疟疾血检技术培训

1、疟原虫检验技术疟原虫检验技术 v采集血样 v血片制作 v血片染色 v疟原虫镜检 采集血样采集血样 采血部位：采血部位：耳垂耳垂或无名指，或无名指， 取血方法：通常在耳垂取血，先取血方法：通常在耳垂取血，先 用用75%75%酒精棉球消毒取血部位，酒精棉球消毒取血部位， 待酒精干后，用左手拇指和食待酒精干后，用左手拇指和食 指紧捏耳垂上方或无名指指尖，指紧捏耳垂上方或无名指指尖， 右手持消毒针迅速刺入皮肤，右手持消毒针迅速刺入皮肤， 不宜过深或过浅。然后用右手不宜过深或过浅。然后用右手 中指轻轻挤压出血。厚血膜血中指轻轻挤压出血。厚血膜血 量约一粒米大小量约一粒米大小, ,薄血膜血量为薄血膜血量为

2、 厚血膜的一半或厚血膜的一半或1/31/3。 厚血膜：用推片的一角，取血厚血膜：用推片的一角，取血 一小滴（约一小滴（约44.5微升），微升）， 置于平置的载玻片上，由置于平置的载玻片上，由 里向外一个方向旋转，涂里向外一个方向旋转，涂 成直径成直径0.81厘米大小圆形厘米大小圆形 厚血膜。厚血膜。 薄血膜：以推片一端的中部取薄血膜：以推片一端的中部取 血一小滴，使血滴与载玻血一小滴，使血滴与载玻 片接触，血液沿推片边缘片接触，血液沿推片边缘 向两侧展开，将推片与载向两侧展开，将推片与载 玻片保持玻片保持300-450，均匀而迅，均匀而迅 速适当地用力向前推成舌速适当地用力向前推成舌 形薄血膜

3、。形薄血膜。 血片制作（一）血片制作（一） 厚血膜厚血膜 薄血膜薄血膜 血片制作（二）血片制作（二） 标准的疟疾厚薄血膜片：标准的疟疾厚薄血膜片： v把载玻片分成六等份，把厚血膜涂在从右到左的第三格中把载玻片分成六等份，把厚血膜涂在从右到左的第三格中 央，薄血膜涂在第四格前缘至第六格中部，第一、二格备央，薄血膜涂在第四格前缘至第六格中部，第一、二格备 贴标签编号用。厚、薄血膜间用蜡笔划线分开贴标签编号用。厚、薄血膜间用蜡笔划线分开 v厚血膜血量不宜过多或过少厚血膜血量不宜过多或过少 v薄薄血膜平整血膜平整,无皱折和空泡无皱折和空泡.显微镜下红细胞单层排列显微镜下红细胞单层排列 血片制作（三）血

4、片制作（三） 不同血片涂布法：不同血片涂布法： v标准血片标准血片 v门诊发热病人血片门诊发热病人血片 v居民普查血片居民普查血片 血片染色（一）血片染色（一） 染色方法染色方法: v吉氏染色法吉氏染色法 v瑞氏染色法瑞氏染色法 WHO推荐使用吉氏染色法推荐使用吉氏染色法 血片染色（二）血片染色（二） 吉氏原液的配制：吉氏原液的配制： 吉氏染粉吉氏染粉 (Azure B type) g 甘油甘油 (纯纯) 50ml 甲醇甲醇 (纯纯) 50ml v把吉氏粉置于研钵中，加少量甘油充分研磨把吉氏粉置于研钵中，加少量甘油充分研磨, 然后边加然后边加 边磨，直至边磨，直至50ml甘油完全加入，倒入棕色

5、瓶中。然后甘油完全加入，倒入棕色瓶中。然后 在在 研钵中加入少许甲醇清洗研钵，洗液倒入棕色瓶中，研钵中加入少许甲醇清洗研钵，洗液倒入棕色瓶中， 再放入甲醇清洗，反复数次，直至甲醇用完。盖好瓶盖，再放入甲醇清洗，反复数次，直至甲醇用完。盖好瓶盖， 充分摇匀，置于充分摇匀，置于65温箱中温箱中24小时，或室温阴暗处小时，或室温阴暗处1-2 周后周后过滤，过滤，备用。备用。 v整个染色液配制时间不能少于整个染色液配制时间不能少于5个小时个小时 v时间越长染色效果越好。时间越长染色效果越好。 血片染色（三）血片染色（三） 吉氏染液的配制：吉氏染液的配制： v把吉氏原液用把吉氏原液用PH7.00.2缓冲

6、液稀释，比缓冲液稀释，比 例约为例约为1:1520，稀释后方可用于厚薄血，稀释后方可用于厚薄血 片染色。片染色。 v吸取原液时，不要晃动瓶子吸取原液时，不要晃动瓶子,以免沉淀物泛以免沉淀物泛 起影响染色效果起影响染色效果. 血片染色（四）血片染色（四） v血膜固定：血膜固定：血膜充分晾干后，用甲醇固定薄血膜。厚 血膜上滴加蒸馏水进行溶血，到血膜呈灰白色时，将 水倒去，晾干后再用甲醇固定。 注意：薄血膜固定时，甲醇不可触碰未溶血的厚血膜。 厚血膜溶血时，蒸馏水不可触碰薄血膜。 血片染色（五）血片染色（五） v血片染色：血片染色： 1.吉氏染色法：把吉氏染液滴加于已固定的厚、薄血膜上，室 温染色3

7、0分钟，用缓冲液冲洗干净。血片晾干后镜检。 2.快速吉氏染色法：取吉氏原液1ml，加缓冲液5ml，混匀后， 滴加于厚、薄血膜上染色5分钟，用缓冲液冲洗，晾干后镜 检。 血片染色（六）血片染色（六） 3.成批血片染色：将已固定的血片插入染色缸，加入吉氏染液 浸没血片，对厚、薄血膜同时染色30分钟。 注意：如果吉氏染液是从市场上购置的成品试剂，请严格按照 说明书操作。 血片染色（七）血片染色（七） 血片染色结果：血片染色结果： v染色质量好的血片： 显微镜下核呈红色， 胞浆呈蓝色，薄血 膜平整，红细胞单 层排列。 v如果血片偏红,说明 染液偏酸性 v如果血片偏蓝,说明 染液偏碱性 吉氏染色血片外观

8、吉氏染色血片外观 血片染色（八）血片染色（八） v血片制作与染色注意事项：血片制作与染色注意事项： 、载玻片必须清洁无油污； 、固定薄血膜时，甲醇不要触碰到厚血膜； 、厚血膜在染色之前先用清水滴加在上面进行溶血， 以防厚血膜染色后颜色发黑，影响镜检； 、血片充分干燥后方可染色，防止冲洗染液时厚血 膜脱落。 5、未染色血膜的放置时间夏天不宜超过48小时，冬 天不宜超过72小时，否则厚血膜会自然固定，影响 镜检。 疟原虫镜检（一） 厚血膜 薄血膜 优点优点 血量多，面积小，原血量多，面积小，原 虫较为集中。虫较为集中。原虫原虫 检出率高检出率高 血量少，面积大，干燥快红血量少，面积大，干燥快红 细

9、胞完整，原虫形态极少变细胞完整，原虫形态极少变 形。用于观察形。用于观察原虫形态与鉴原虫形态与鉴 别虫种。别虫种。 缺点缺点 原虫在干燥过程中皱原虫在干燥过程中皱 缩，红细胞消失，原缩，红细胞消失，原 虫变形较大，虫变形较大，原虫原虫 鉴定困难鉴定困难 血量比厚血膜少许多，但面血量比厚血膜少许多，但面 积是厚血膜的积是厚血膜的8-10倍。倍。检查检查 费时，原虫检出率较低费时，原虫检出率较低 用途用途用于疟疾病人检查用于疟疾病人检查虫种、虫期鉴定及初学者教虫种、虫期鉴定及初学者教 学标本学标本 疟原虫厚、薄血膜镜检优缺点疟原虫厚、薄血膜镜检优缺点 显微镜下厚血膜读片顺序 疟原虫镜检（二） v读

10、片顺序读片顺序：显 微镜镜下按由 上而下、之字 形顺序读片 疟原虫镜检（三） 镜检疟原虫结果判断：镜检疟原虫结果判断： v阴性血片： 检查全部厚血膜视野未查见疟原虫； 最少检查100个厚血膜视野未查见疟原虫（临床病 人）。 v阳性血片：检出各期疟原虫（环状体、裂殖体、配子 体）。 v混合感染：在一个血膜上有2种以上疟原虫感染称为混 合感染，较常见的是间日疟原虫与恶性疟原虫混合。 v镜检判断P.v+P.f混合感染：必须是看到P.v各期原虫和 P.f的配子体。 间日疟和恶性疟的鉴定要点 疟原虫镜检（四） 疟原虫镜检（五） v疟原虫形态特征：间日疟（P. vivax ） 鉴定要点 1.红细胞通常涨红

11、细胞通常涨 大大 2.薛氏点明显薛氏点明显 3.成熟环状体粗成熟环状体粗 大大 4.滋养体胞浆有滋养体胞浆有 阿米巴样伪足阿米巴样伪足 5.血片中可见各血片中可见各 期的原虫形态期的原虫形态 6.成熟裂殖体约成熟裂殖体约 含含12-24个裂殖个裂殖 子子 疟原虫镜检（六） v疟原虫形态特征：恶性疟（P.falciparum）鉴定要 点： 1.红细胞不涨大红细胞不涨大 2.小滋养体（环状体）小滋养体（环状体） 纤细纤细, 常有多重感染常有多重感染 ，环状体，环状体内可有内可有2个个 核核 3.环状体可贴在红细胞环状体可贴在红细胞 边缘边缘 4.血片中没有其他发育血片中没有其他发育 期的大滋养体期

12、的大滋养体 5.配子体呈新月形或腊配子体呈新月形或腊 肠形肠形 6.成熟裂殖体约含成熟裂殖体约含16- 32个裂殖子个裂殖子 7.可出现茂氏点可出现茂氏点 镜检示教镜检示教 v以下血片采自现症病例以下血片采自现症病例 疟原虫镜检（七） 间日疟环状体间日疟环状体 2. Intermittent fever; arrived from India 2 months ago. 间日疟滋养体间日疟滋养体 3. History of round the world safari including S. America, Asia and Africa. General malaise. 恶性疟雄配子体

13、恶性疟雄配子体 4. Unspecified overseas travel. Presented with temperature 38.4C 三日疟裂殖体三日疟裂殖体 5. Male recently returned to Australia after backpacking through Asia. History of flu like symptoms. 白细胞白细胞 6. New Australian previously from Malaysia. Intermittent temperatures and headaches. 白细胞白细胞 7. Aches and p

14、ains, with fever. ? Glandular Fever, ?malaria. 间日疟裂殖体间日疟裂殖体 恶性疟环状体恶性疟环状体 18. Recent trip to Southern India- headaches and vaguely unwell. 间日疟裂殖体间日疟裂殖体 19. Patient has been holidaying in the Dominican Republic, now feverish. 恶性疟雄配子体恶性疟雄配子体 21. A member of the UN forces in East Timor. Presented with h

15、igh temperature. 恶性疟雌雄配子体恶性疟雌雄配子体 间日疟裂殖体间日疟裂殖体 恶性疟雌配子体恶性疟雌配子体 间日疟裂殖体间日疟裂殖体 血检质量考核 v 实验室条件 v 血检工作要求 v 考核标准 实验室条件 v人员：人员： 各单位至少有各单位至少有1名专职或兼职的经过疟原虫名专职或兼职的经过疟原虫 检验技术培训的人员。熟悉疟疾血片的制作，疟检验技术培训的人员。熟悉疟疾血片的制作，疟 原虫的镜下特征，能承担疟疾血检工作。原虫的镜下特征，能承担疟疾血检工作。 v环境：环境： 实验室相对独立，可做疟疾血检。实验室相对独立，可做疟疾血检。 v设备：设备： 显微镜、玻片、玻片架、玻片合、

16、染色缸。显微镜、玻片、玻片架、玻片合、染色缸。 v试剂：试剂： 吉氏染液、甲醇、二甲苯、镜油。吉氏染液、甲醇、二甲苯、镜油。 血检工作要求血检工作要求 v制定疟原虫镜检实验室管理制度、疟原虫镜 检操作规程 v对血检对象进行认真登记，填写疟原虫镜检登记 表，按接样顺序编号。编号：医院名称代码序 号。 v保留镜检过的所有血片，以备上级抽样复查，经上 一级机构同意后方可清洗。阳性血片须专人管理。 v血液标本有潜在生物危害，在实验室血检工作、标 本保存中应严格遵守实验室生物安全通用要求。 县（市县（市/区）全球基金疟疾项目发热病人疟原虫血检登记表区）全球基金疟疾项目发热病人疟原虫血检登记表 血检单位：

17、血检单位： 、 序序 号号 姓名姓名 年年 龄龄 性性 别别 居住地址居住地址 外出外出 史及史及 地点地点 职职 业业 发发 病病 日日 期期 体体 温温 （ o oC) C) 临临 床床 初初 诊诊 血血 检检 日日 期期 血检方法血检方法血检结果血检结果检检 验验 人人 签签 名名 血血 样样 编编 号号 镜镜 检检 RDRD T T 阴阴 性性 PfPfPvPvPmPmPoPo 混混 合合 1 2 3 4 合合 计计 疟原虫血检考核标准疟原虫血检考核标准(1)(1) 项目项目检查内容检查内容 质量标准质量标准 考核考核 分值分值 好好 分分 值值 中中 分分 值值 差差 分分 值值 血

18、血 片片 制制 作作 厚血膜厚血膜 (25(25分）分） 血量（5分）45l5略多或略少3过多或过少1 位置（5分）玻片右1/3 5稍偏右4偏右过多3 直径（5分）0.81.0cm5 0.70.8 或1.0 1.2cm 31.2cm1 外观(10分) 圆形厚膜均匀, 边缘整齐 10圆形稍不均不整齐8厚薄不匀影响着色5 薄血膜薄血膜 (25(25分）分） 血量（5分）11.5l5略多或略少3过多或过少1 位置（5分） 直径（5分） 外观(10分） 玻片1/21/3处5稍偏右或偏左4偏右或偏左过多3 2.52.0cm5稍大或稍小 3过多或过少1 舌状厚薄均匀10舌状稍不均 5厚薄不匀呈波浪型3 考

19、核标准 疟原虫血检考核标准（疟原虫血检考核标准（2） 项目项目 检查检查 内容内容 质量标准质量标准 考核考核 分值分值 好好 分分 值值 中中 分分 值值 差差 分分 值值 血片染血片染 色质量色质量 (15(15分分) ) 外观 （5分） 蓝紫色5深蓝色3红色或灰白色2 镜下 (10分) 白细胞、疟原 虫胞浆蓝色， 核红色 10 染色过深，原 虫胞浆与核均 呈深蓝色 8 染色过浅，胞 浆蓝色不易显 见，核淡红 5 血片清血片清 洁度洁度 (10(10分分) ) 外观 （5分） 光洁无油灰5稍有油污2油灰粘连2 镜下 （5分） 无沉渣5稍有沉渣2 沉渣多或有杂 菌 2 疟原虫血检考核标准（疟

20、原虫血检考核标准（3） 项目项目 检查检查 内容内容 使用标准使用标准扣分标准扣分标准 考核考核 分值分值 显微镜使用显微镜使用 （2525分）分） 使用前 （10分） 显微镜干净，有绸布遮盖，接 物镜不与聚光器对接 显微镜稍有灰（-2分），无 绸布遮盖（-4分），接物镜 与聚光器对接（-4分） 镜检时 （10分） 打开光源，调节亮度，聚光器 上升至最高位置，油镜与聚光 器对接，放入待检血片，镜台 上升直至油镜与血膜接触，然 后镜台徐徐下降，出现视野用 微调调节 聚光器未上升至最高位置即 放血片（-2分），镜台上升 或下降过快（-3分），压破 玻片（-10分） 使用后 （5分） 擦拭干净油镜，

21、物镜转离聚光 器，绸布遮盖 未擦拭油镜（-1分），物镜 未转离聚光器（-2分），未 用绸布遮盖（-2分） 合计合计100分 注：文本框可根据需求改变颜色、移动位置；文字可编辑 POWERPOINT模板 适用于简约清新及相关类别演示 1 2 3 4 目录 点击添加标题 点击添加标题 点击添加标题 点击添加标题 添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本

22、 点击添加文本 添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本点击添加文本 添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 添加文本 点击添加文本点击添加文本点击添加文本点击添加文本 点击添加文本点击添加文本点击添加文本 01 02 03 04 添加标 题 添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 点击添加文本 会议基调 年会视频：http:/ 会议主题 1 1、携手超越，驭领未来、携手超越，驭领未来 2 2、你在我心里面、你在我心里面 -用心创造新未来用心创造新未来 会议主体环节 年度总结：由公司各职能部门、高层做年度总结：由公司各职能部门、高层做09年总年总

23、 结报告，传递结报告，传递10年度公司战略发展规划以及嘉年度公司战略发展规划以及嘉 许许09年度优秀员工年度优秀员工 感谢晚宴：让员工在享受晚宴的同时，感受公感谢晚宴：让员工在享受晚宴的同时，感受公 司对他们一年来付出的感谢；让嘉宾感受耀光司对他们一年来付出的感谢；让嘉宾感受耀光 纺织的关注和企业文化纺织的关注和企业文化 员工才艺秀：加强员工互动，展现员工风采员工才艺秀：加强员工互动，展现员工风采 血片染色（二）血片染色（二） 吉氏原液的配制：吉氏原液的配制： 吉氏染粉吉氏染粉 (Azure B type) g 甘油甘油 (纯纯) 50ml 甲醇甲醇 (纯纯) 50ml v把吉氏粉置于研钵中，加少量甘油充分研磨把吉氏粉置于研钵中，加少量甘油充分研磨, 然后边加然后边加 边磨，直至边磨，直至50ml甘油完全加入，倒入棕色瓶中。然后甘油完全加入，倒入棕色瓶中。然后 在在 研钵中加入少许甲醇清洗研钵，洗液倒入棕色瓶中，研钵