医学微生物学：第7章 细菌感染的检测方法与防治原则

1、细菌感染的检测方法与防治原则细菌感染的检测方法与防治原则 CHAPTER 7 Principles of Diagnosis, Prevention and Treatment of Bacteria Infection Manifestations of Infection Signs and symptoms(症状症状) vary according to the site and severity of infection.Diagnosis requires a composite(综合的综合的) of information, including history, physical

2、examination, radiographic(X线的线的) findings, and laboratory data. Microbial Causes of Infection Infections may be caused by bacteria, viruses, fungi, and parasites. The pathogen may be exogenous (acquired from environmental or animal sources or from other persons) or endogenous (from the normal flora)

3、. 细菌学诊断细菌学诊断 Bacteriological Diagnosis 细菌感染的诊断方法细菌感染的诊断方法 Approach of Bacterial Diagnosis 标本标本Specimen 形态检测形态检测 抗原检测抗原检测 morphological, Antigen detection 细菌学诊断细菌学诊断 凝集试验凝集试验 沉淀试验沉淀试验 中和试验中和试验,补补 体结合试验体结合试验 血清学诊断血清学诊断 分离鉴定分离鉴定 Isolation and Identification 标本：双分血清标本：双分血清 一、病原菌检测一、病原菌检测 Bacterial Diagn

4、osis 1. Specimen Selection, Collection, and Processing A few general rules apply to all specimens The sample should be representative of the infectious phase(阶段阶段). Contamination(污染污染) of the specimen must be avoided by using sterile(无菌的无菌的)equipment. The specimen must be taken to the laboratory and

5、 examined promptly. 1. Specimen Selection, Collection, and Processing A few general rules apply to all specimens Meaningful specimens to diagnose bacterial infection must be secured(获得获得) before antibiotic are administered. The quantity of material must be adequate. Marker is important. 无菌采集无菌采集 早期采

6、集早期采集 采集适当标本采集适当标本 尽快送检，注意冷暖尽快送检，注意冷暖 作好标记，确保无误作好标记，确保无误 采集双份血清采集双份血清 标本的采集和送检六原则标本的采集和送检六原则 1. Specimens 2. Examination Process 标标 本本 显微镜放大、染色镜检显微镜放大、染色镜检 初步诊断初步诊断 分离培养分离培养 明确诊断明确诊断 分子生物学技术：分子生物学技术： PCR, DNA杂交等杂交等 培养特征培养特征 形态特征形态特征 生化试验生化试验 血清学鉴定血清学鉴定 动物试验动物试验( (毒力毒力) ) 药物敏感试验药物敏感试验 Ag的免疫学检测的免疫学检测

7、1. 1. 鉴别细菌鉴别细菌 2. 2. 选择抗菌药物选择抗菌药物 3. 3. 研究细菌致病性研究细菌致病性 革兰染色的意义革兰染色的意义 bacteria Inoculation 接种接种 incubation 孵育孵育 antibiotic paper 抗生素纸片抗生素纸片 result: a clear, bacteria-free zone 纸碟法药物敏感试验 常用于细菌学诊断的免疫学技术常用于细菌学诊断的免疫学技术 沉淀反应沉淀反应 Precipitation 协同凝集反应协同凝集反应 Coagglutination 免疫荧光法免疫荧光法Immunofluorescence IF 对

8、流免疫电泳对流免疫电泳 CIE Counter immuno-electrophoresis 酶免疫测定酶免疫测定 Enzyme immunoassay EIA SPA协同凝集试验协同凝集试验 含含SPA的的 葡萄球菌葡萄球菌 SPA(葡萄球菌葡萄球菌A A蛋白蛋白)可可 与与IgG的的Fc非特异结合，非特异结合， Fab仍可与抗原结合。仍可与抗原结合。 二、血清学诊断二、血清学诊断 Serological Diagnosis 1. 原理原理 The antibodies directed against the bacteria are present in the serum of pat

9、ients, so the identification of serum antibodies with known antigens is often called serological diagnosis. 1.1.原理原理 用已知抗原检测病人血清或体液中未用已知抗原检测病人血清或体液中未 知抗体及其量的变化，可作为感染性疾病知抗体及其量的变化，可作为感染性疾病 的辅助诊断。由于抗体存在于血清或其他的辅助诊断。由于抗体存在于血清或其他 体液中，故常称为血清学反应或血清学诊体液中，故常称为血清学反应或血清学诊 断。断。 2. 标本标本 In an acute infection, the

10、 antibodies usually appear early, and then rise sharply over the next 10 to 21 days. Thus, a serum sample collected shortly after the onset of illness (acute serum) and another collected 2 to 3 weeks later(convalescent serum恢复期血清恢复期血清) can be compared quantitatively(数量上数量上) for changes in specific a

11、ntibody content. That is, detectable specific antibody is absent from the acute serum, but present in the convalescent serum(恢复期血清恢复期血清). Alternatively, a 4-fold or greater increase in antibody titer(效价效价) supports a diagnosis of recent infection. 2. 标本标本 2. 标标 本本 血液，双份血液，双份 急性期血清急性期血清恢复期血清恢复期血清 抗体效

12、价比早期升高抗体效价比早期升高4倍以上，倍以上， 表明近期感染，具有诊断意义。表明近期感染，具有诊断意义。 3. 血清学诊断方法血清学诊断方法 that have lost virulence but retain antigenicity . 第一代疫苗第一代疫苗 减毒活疫苗减毒活疫苗 通过毒力变异获得减毒或无毒株通过毒力变异获得减毒或无毒株, ,培养后制培养后制 成疫苗。成疫苗。 宿主体内繁殖宿主体内繁殖, ,停留长停留长, ,类似隐性感染。类似隐性感染。 接种一次接种一次, ,用量小用量小, ,副作用轻副作用轻, ,效果好。效果好。 不易保存不易保存,4,4,二周。二周。 回复毒力回复毒

13、力, ,重新获得致病性。重新获得致病性。 BCG,BCG,鼠疫鼠疫, ,炭疽。炭疽。 Characteristic Living Killed duration of immunitylongershorter Ab produceIgA, IgGIgG cell-mediated immunity produce yesweakly or none reversion to virulencepossibleno stability at room temperature lowhigh Characteristics of live and killed viral vaccines E

14、亚单位疫苗亚单位疫苗 Subunit Vaccine 利用微生物的某种表面结构成分利用微生物的某种表面结构成分( (表面表面 抗原抗原) )制成不含有核酸、能诱发机体产制成不含有核酸、能诱发机体产 生抗体的疫苗，称为亚单位疫苗生抗体的疫苗，称为亚单位疫苗 。 第二代疫苗第二代疫苗 E基因工程疫苗基因工程疫苗 Gene Engineering Vaccine 利用基因工程方法获得带有病原体保护利用基因工程方法获得带有病原体保护 性抗原表位的目的基因，将其导入原核或性抗原表位的目的基因，将其导入原核或 真核表达系统，表达该种保护性抗原，提真核表达系统，表达该种保护性抗原，提 纯后研制成疫苗纯后研制

15、成疫苗。 E 重组载体疫苗重组载体疫苗 Recombinant Vaccine E 合成疫苗合成疫苗 Peptide Vaccine 第二代疫苗第二代疫苗 重组载体重组载体疫苗疫苗 将抗原编码基因转入减毒的病毒或细菌制成疫苗将抗原编码基因转入减毒的病毒或细菌制成疫苗, , 接种后在体内繁殖表达接种后在体内繁殖表达, ,似活疫苗。似活疫苗。 如以痘苗病毒为载体如以痘苗病毒为载体, ,用于甲肝用于甲肝, ,乙肝乙肝, ,麻疹疫苗的麻疹疫苗的 研制。研制。 第二代疫苗第二代疫苗 核酸疫苗核酸疫苗(DNA(DNA疫苗疫苗) ) 将编码产生抗原的基因重组到质粒真核表达将编码产生抗原的基因重组到质粒真核表

16、达 载体上载体上, ,将重组的质粒将重组的质粒DNADNA直接注射给人体表直接注射给人体表 达。达。 优点优点: :抗原持续产生抗原持续产生, ,免疫持久免疫持久; ;体液和细胞免体液和细胞免 疫疫; ;对不同亚型病原有交叉保护对不同亚型病原有交叉保护; ;将不同抗原将不同抗原 基因构建在同一质粒基因构建在同一质粒- -联合免疫。联合免疫。问题问题:DAN:DAN 整合激活癌基因整合激活癌基因; ;产生抗核抗体诱导自身免疫产生抗核抗体诱导自身免疫 病病。 第三代疫苗第三代疫苗 Naked DNA vaccines Gene for antigen Plasmid Recombinant DNA Muscle cell Muscle cell expresses protein - antibody made CTL response （二）类毒素（二）类毒素 外毒素经外毒素经0.3%0.3%甲醛处理后甲醛处理后, ,失去毒性保留失去毒性保留 抗原性抗原性, ,加入佐剂制成。加入佐剂制成。 氢氧化铝可延缓类毒素的吸收时间。氢氧化铝可延缓类毒素的吸收时间。