高通量测序技术平台流程及应用

1、 人体基因组结构和突变 染色质免疫沉淀 考古学 Meta-Genomics DNA测序 血浆微量DNA测序 基因组DNA的随机打断 DNA片段的末端修复 将A碱基加入到DNA片段的3末端 在DNA片段的末端加上特定接头 PCR扩增连上接头的DNA片段 文库检测 DNA在Cluster Station的成簇扩增 IlluminaGenome Analyzer上的测序 生物信息组装/分析 基因组DNA随机打断特定大小片段（2-10kb范围可选） 末端修复 生物素标记 环化 获得来自大片段两端共计400-600 bp的DNA片段 修饰、加接头 PCR扩增连上接头的DNA片段 文库检测 DNA在Clu

2、ster Station上的成簇扩增 Illumina Genome Analyzer上的测序 生物信息组装/分析 从总 RNA中分离 small RNA 5接头连接和纯化 3接头连接纯化 RT-PCR扩增 Small RNA文库的纯化 文库的检测 DNA在Cluster Station成簇扩增 Illumina Genome Analyzer上的测序 生物信息学分析 mRNA的分离和cDNA第一链的合成 cDNA第二链的合成 限制性内切酶NlaIII的酶切 连接GEX NlaIII Adapter 1 限制性内切酶 MmeI 的酶切 连接GEX Adapter 2 Adapter连接cDNA

3、产物和PCR富集 文库的检测 DNA在Cluster Station上的成簇扩增 IlluminaGenome Analyzer上的测序 生物信息学分析 Total RNA的DNase I 酶消化 mRNA 分离和随机打断 cDNA第一链和第二链的合成 DNA片段的末端修复 将“A”碱基加入到DNA片段的3末端 在DNA片段的末端加上特定接头 PCR扩增连上接头的DNA片段 文库的检测 DNA在Cluster Station上的成簇扩增 IlluminaGenome Analyzer上的测序 生物信息学分析 基因组DNA随机打断 DNA片段的末端修复 将 A 碱基加入到 DNA片段的3末端 D

4、NA片段末端加上特别处理的甲基化接头 重亚硫酸盐处理 去盐处理 PCR扩增连上接头的DNA片段 文库检测 DNA 在Cluster Station上的成簇扩增 Illumina Genome Analyzer上的测序 生物信息学分析 染色质免疫共沉淀 目的DNA片段 DNA片段的末端修复 将 A 碱基加入到 DNA片段的3末端 DNA片段末端加上接头 PCR扩增加上接头的DNA片段 文库检测 DNA在Cluster Station成簇扩增 Illumina Genome Analyzer上的测序 生物信息学分析 Meta基因组的提取 DNA随机打断 DNA片段末端修复 将A碱基加入到DNA片段的3末端 在DNA片段的末端加上接头 纯化连接产物 PCR扩增连上接头的DNA片段 文库的检测 DNA在Cluster Station的成簇扩增 Illumina Genome Analyzer上的测序 生物信息组装/分析 收集10-15ml孕妇外周血 提取血浆中游离DNA Q-PCR定量总DNA含量 构建DNA文库 Agilent和Q-PCR检测文库浓度 Cluster制备和Genome Analyz