微生物生物学实验指导：07实验七 噬菌体效价的测定

1、实验七 噬菌体效价的测定 实实 验验 目目 的的 1.学习并掌握噬菌体效价的含义及其测定原 理。 2.学习并掌握双层琼脂平板法测定噬菌体效 价。 实实 验验 原原 理理 噬菌体的效价噬菌体的效价即即mL样品中所含侵染性噬菌体的粒子数。样品中所含侵染性噬菌体的粒子数。 效价的测定一般采用效价的测定一般采用双层琼脂平板法双层琼脂平板法。由于在含有特异宿主细。由于在含有特异宿主细 菌的琼脂平板上，一般一个噬菌体产生一个噬菌斑，故可根据菌的琼脂平板上，一般一个噬菌体产生一个噬菌斑，故可根据 一定体积的噬菌体培养液所出现的噬菌斑数，计算出噬菌体的一定体积的噬菌体培养液所出现的噬菌斑数，计算出噬菌体的 效

2、价。效价。 噬菌体效价噬菌体效价(cfu/ml)=噬菌斑数噬菌斑数稀释倍数稀释倍数10 当烈性噬菌体侵染敏感细菌后会迅速引起敏感细菌 裂解，释放出大量子代噬菌体，然后它们再扩散和侵 染周围细胞，结果就会在菌苔上形成一个具有一定形 状、大小、边缘和透明度的噬菌斑噬菌斑 实实 验验 材材 料料 菌种：大肠杆菌（菌种：大肠杆菌（Escherichia coli) LE392 噬菌体：噬菌体：噬菌体噬菌体EA94 培养基：培养基：LB固体培养基固体培养基 0.7%琼脂糖琼脂糖 噬菌体噬菌体(phage,bacteriophage)是原核生物的病毒是原核生物的病毒 噬细菌体噬细菌体 (bacteriop

3、hage) 噬放线菌体噬放线菌体 (actinophage) 噬蓝细菌体（噬蓝细菌体（cyanophage) 噬菌体的生物学性状噬菌体的生物学性状 抵抗力抵抗力 比一般细菌的繁殖体强比一般细菌的繁殖体强 抵抗乙醚、氯仿和乙醇抵抗乙醚、氯仿和乙醇 75 30min或更久才能被灭活或更久才能被灭活 耐受低温和冰冻耐受低温和冰冻 但对紫外和但对紫外和X射线敏感，一般经紫外照射射线敏感，一般经紫外照射 1015min即失去活性。即失去活性。 噬菌体的繁殖 吸吸 附附 侵侵 入入 增增 殖殖 成成 熟熟 裂裂 解解 噬菌体的繁殖过程很快，噬菌体的繁殖过程很快，E.coli T系噬菌体在合适温度系噬菌体在

4、合适温度 下仅为下仅为1525min 双层平板法双层平板法 底层平板底层平板 上层平板上层平板 上层培养基上层培养基 宿主菌悬液（浓）宿主菌悬液（浓） 噬菌体试样噬菌体试样 （0.7%琼脂糖琼脂糖） （2琼脂的细菌培养基琼脂的细菌培养基78ml) 混匀混匀 37oC 10余h 噬菌斑计数噬菌斑计数 底层底层 培养基培养基： 弥补培养皿底部不平的缺陷弥补培养皿底部不平的缺陷 使所有的噬菌斑都位于近乎同一个平面上，因而使所有的噬菌斑都位于近乎同一个平面上，因而 大小一致、边缘清晰、无重叠现象大小一致、边缘清晰、无重叠现象 上层上层 培养基培养基： 半固体培养基半固体培养基 可形成形态较大、特征明显的噬菌斑便于计数可形成形态较大、特征明显的噬菌斑便于计数 LB固体培养基固体培养基 0.7%琼脂糖琼脂糖 单个噬菌斑单个噬菌斑 指示菌菌苔指示菌菌苔 透明的裂解圈透明的裂解圈 噬噬 菌菌 体体 大肠杆菌大肠杆菌 37oC保温保温25min 菌菌 液液 菌液 菌液 噬菌体噬菌体 注意事项注意事项 2、倒培养基时要观察培养基是否已经结块？、倒培养基时要观察培养基是否已经结块？ 3、从、从50oC水浴锅中取出琼脂糖培养基后的步水浴锅中取出琼脂糖培养基后的步 骤动作要迅速，否则琼脂糖凝