临床病原体检查

1、 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 主主 要要 内内 容容 第一节第一节 标本的采集运送、实验室标本的采集运送、实验室 评价和检查方法评价和检查方法 第二节第二节 病原体耐药性检测病原体耐药性检测 第三节第三节 临床感染常见病原体检测临床感染常见病原体检测 第五节第五节 性传播疾病病原体检测性传播疾病病原体检测 第六节第六节 医院感染常见病原体检测医院感染常见病原体检测 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 感染性疾病的现状感染性疾病的现状 n感染性疾病的病原体：细菌、病毒、支原体、感染性疾病的病原体：细菌、病毒、支原体、 衣原体、立克次体衣原体、立克次

2、体 以及寄生虫等。以及寄生虫等。 n自从抗生素的发现和预防接种的实施，许多曾自从抗生素的发现和预防接种的实施，许多曾 严重危害人体健康的病原体已消灭或基本消灭严重危害人体健康的病原体已消灭或基本消灭 n新的传染病陆续被发现，曾绝迹的老传染病部新的传染病陆续被发现，曾绝迹的老传染病部 分死灰复燃。分死灰复燃。 n条件致病菌感染比例增加。条件致病菌感染比例增加。 n多重耐药菌株不断出现，真菌感染的几率逐年多重耐药菌株不断出现，真菌感染的几率逐年 增高。增高。 -临床病原体检查的重要性临床病原体检查的重要性 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 q临床病原体检查的目的：临床病原体检

3、查的目的：确定感染的发生和性确定感染的发生和性 质；及早明确诊断；早期提供治疗方案；采取质；及早明确诊断；早期提供治疗方案；采取 预防措施防止感染传播。预防措施防止感染传播。 q临床病原体实验诊断方法遵循的原则：临床病原体实验诊断方法遵循的原则：正确、正确、 规范的标本前处理；一般可借助某些实验室手规范的标本前处理；一般可借助某些实验室手 段可先作出初步诊断；在初步诊断基础上做出段可先作出初步诊断；在初步诊断基础上做出 确诊诊断并参与治疗确诊诊断并参与治疗。 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 第一节第一节 标本的采集运送、实标本的采集运送、实 验室评价和检查方法验室评价和

4、检查方法 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 n 标本的正确采集和运送是实验室取得正标本的正确采集和运送是实验室取得正 确结果的前提和基本要素。但对标本采确结果的前提和基本要素。但对标本采 集的方法和时间，标本的来源，实验室集的方法和时间，标本的来源，实验室 常不能直接加以控制，因此，临床医师常不能直接加以控制，因此，临床医师 和护士必须对此予以高度重视。和护士必须对此予以高度重视。 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 病原检测标本病原检测标本采集与送检的采集与送检的基本原则：基本原则： n采集标本须考虑选择标本的种类和采集部位并要反应采集标本须考虑选择

5、标本的种类和采集部位并要反应 有效病程。有效病程。 n尽量在尽量在抗生素使用前采集标本抗生素使用前采集标本。 n在采集标本时，应严格执行无菌操作，防止污染。在采集标本时，应严格执行无菌操作，防止污染。 n标本采集后尽快送到实验室，床边接种可提高病原菌标本采集后尽快送到实验室，床边接种可提高病原菌 的检出率。的检出率。 n盛标本容器须经灭菌处理，但不得使用盛标本容器须经灭菌处理，但不得使用消毒剂消毒剂。 n处理后标本及容器按生物安全要求进行消毒处理。处理后标本及容器按生物安全要求进行消毒处理。 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 一、常见检验标本的采集送检方法：一、常见检验标

6、本的采集送检方法： （一）血液与骨髓（一）血液与骨髓 适应症：疑似菌血症、败血症或脓毒血症的病人。适应症：疑似菌血症、败血症或脓毒血症的病人。 1 1、通常采血部位为肘中静脉，但感染灶附近血管采、通常采血部位为肘中静脉，但感染灶附近血管采 血，可提高阳性率。血，可提高阳性率。切忌在静滴抗菌药物的静脉处切忌在静滴抗菌药物的静脉处 采集血标本采集血标本。标本采集过程应严格无菌操作。标本采集过程应严格无菌操作。 2 2、选择体温上升或高峰时采选择体温上升或高峰时采 血可提高阳性率。血可提高阳性率。 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 3 3、每次采血量为、每次采血量为5-105-

7、10（10-2010-20）mlml，婴幼儿婴幼儿1-5ml1-5ml，培培 养基与血液之比以养基与血液之比以10:110:1为宜。以稀释血液中的抗生素、为宜。以稀释血液中的抗生素、 抗体等杀菌物质。抗体等杀菌物质。 4 4、每例至少采血两次，间隔时间据病情而定，以利、每例至少采血两次，间隔时间据病情而定，以利 于提高阳性率和区别感染菌和皮肤污染菌。于提高阳性率和区别感染菌和皮肤污染菌。 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 1 1、中段尿采集：中段尿采集：是临床上最常用的方法。采样前须是临床上最常用的方法。采样前须 以肥皂水和清水洗净尿道口，排出的尿液前段须以肥皂水和清水洗

8、净尿道口，排出的尿液前段须 弃去，而将中段或近后段的尿液留于无菌容器中。弃去，而将中段或近后段的尿液留于无菌容器中。 （二）尿（二）尿 液液 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 2 2、导尿管采集尿液：导尿管采集尿液：可减少污染，但可减少污染，但易引起逆行感染易引起逆行感染， 除非必要，须避免用此方法。对留置导尿者，可用碘除非必要，须避免用此方法。对留置导尿者，可用碘 酒消毒尿道口处的导尿管壁，用无菌注射器斜穿管壁酒消毒尿道口处的导尿管壁，用无菌注射器斜穿管壁 抽吸尿液，或消毒后解开接口，弃去导尿管前段尿液，抽吸尿液，或消毒后解开接口，弃去导尿管前段尿液， 留无污染的膀胱内

9、尿液送检。留无污染的膀胱内尿液送检。不可从集尿袋的下端管不可从集尿袋的下端管 口留取标本。口留取标本。 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 3 3、膀胱穿刺采集尿液：膀胱穿刺采集尿液：病人耻骨上皮肤消毒后，以病人耻骨上皮肤消毒后，以 无菌针筒作膀胱穿刺。此法主要用于尿液无菌针筒作膀胱穿刺。此法主要用于尿液厌氧菌培厌氧菌培 养或中段尿采集困难的婴幼儿。养或中段尿采集困难的婴幼儿。 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 （三）粪便（三）粪便 1 1、挑取有脓血粘液部分的新鲜粪便约、挑取有脓血粘液部分的新鲜粪便约2-32-3克盛于清洁克盛于清洁 容器中送检，也可

10、用拭子挑取粪便插入运送培养基容器中送检，也可用拭子挑取粪便插入运送培养基 中送检，可提高病原菌的检出率。中送检，可提高病原菌的检出率。 2 2、对不易获取粪便者，如婴幼儿可用直肠拭子采集、对不易获取粪便者，如婴幼儿可用直肠拭子采集 送检。送检。 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 ( (四四) )痰液痰液- -最常见的呼吸道标本最常见的呼吸道标本 1、自然咳痰：自然咳痰：清水反复漱口后用力咳嗽，清水反复漱口后用力咳嗽， 从从呼吸呼吸 道深部道深部咳出新鲜痰液于无菌容器内送检。痰量极咳出新鲜痰液于无菌容器内送检。痰量极 少者可用少者可用4510%氯化钠液雾化吸入导痰，一般氯化

11、钠液雾化吸入导痰，一般 以清晨第一口痰为好。以清晨第一口痰为好。 2、气管镜下采集法、气管穿刺法：气管镜下采集法、气管穿刺法：可减少污染，可减少污染， 但病人有一定的痛苦，不易接受和推广。但病人有一定的痛苦，不易接受和推广。 （符合要求的痰标本在低倍视野中（符合要求的痰标本在低倍视野中10个鳞状上皮个鳞状上皮 细胞，细胞，25个白细胞）个白细胞） 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 3.3.痰标本采集后应及时送检和处理，最好不痰标本采集后应及时送检和处理，最好不 超过超过1 1小时，室温下延搁数小时，定植于口小时，室温下延搁数小时，定植于口 咽部的非致病菌呈过度生长，导致检

12、出率咽部的非致病菌呈过度生长，导致检出率 则明显下降。另外则明显下降。另外上呼吸道存在正常菌群，上呼吸道存在正常菌群， 在采集标本与结果分析时应予考虑在采集标本与结果分析时应予考虑。 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 （五）脑脊液等无菌体液（五）脑脊液等无菌体液 1.严格无菌条件下采集标本。严格无菌条件下采集标本。 2.尽量采集多的标本送检。尽量采集多的标本送检。 3.尽快送检或床旁接种可提高阳性率，特尽快送检或床旁接种可提高阳性率，特 殊标本需保温送检。殊标本需保温送检。 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 （六）创伤、组织和脓肿标本：（六）创伤、组

13、织和脓肿标本： 1、无菌生理盐水清洗病灶表面后，用无、无菌生理盐水清洗病灶表面后，用无 菌拭子取病灶深部的脓液和分泌物。菌拭子取病灶深部的脓液和分泌物。 2、对未溃破的脓肿直接用碘酒、酒精消、对未溃破的脓肿直接用碘酒、酒精消 毒皮肤后，以无菌注射器抽取脓液送检，毒皮肤后，以无菌注射器抽取脓液送检， 也可以切开排脓时用无菌拭子采样。也可以切开排脓时用无菌拭子采样。 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 二、标本的质量评估标准：二、标本的质量评估标准： n标本及送检单上应注明被检人的姓名、性别、年龄、标本及送检单上应注明被检人的姓名、性别、年龄、 临床诊断、标本来源及检验目的、抗

14、生素使用情况等，临床诊断、标本来源及检验目的、抗生素使用情况等， 无患者信息及标识的不予接收。无患者信息及标识的不予接收。 n标本须及时送检，超过时限的标本不予接收。标本须及时送检，超过时限的标本不予接收。 n送检容器须完整，有容器破损或标本渗漏的不予接收。送检容器须完整，有容器破损或标本渗漏的不予接收。 n标本储存、运送方式不当的，不予接收。标本储存、运送方式不当的，不予接收。 n明显被污染的标本不予接收。明显被污染的标本不予接收。 n标本量明显不足的标本不予接收。标本量明显不足的标本不予接收。 n除血培养之外的同一天内重复申请检验的标本不予接除血培养之外的同一天内重复申请检验的标本不予接

15、收。收。 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 三三.临床病原体检查方法临床病原体检查方法 其主要手段包括：其主要手段包括： 1. 1.直接显微镜检查：重要的基本方法，常作为初步诊断但阳性直接显微镜检查：重要的基本方法，常作为初步诊断但阳性 率相对较低。率相对较低。 2.2.特异性抗原检查：可作为早期快速诊断，但特异性是关键。特异性抗原检查：可作为早期快速诊断，但特异性是关键。 如如免疫荧光技术、酶免疫技术、化学发光技术、胶乳凝集技免疫荧光技术、酶免疫技术、化学发光技术、胶乳凝集技 术等。术等。 3.3.核酸检查：核酸检查：近年来发展迅速，敏感性和特异性均较好。近年来发展迅速

16、，敏感性和特异性均较好。如如 PCR、分子杂交、分子杂交、DNA测序等。测序等。 4.4.病原菌病原菌分离培养和鉴定：常为确诊的关键步骤，分离培养和鉴定：常为确诊的关键步骤，但常较费时。但常较费时。 5.5.血清学检查：通过检测相应的特异性抗体以辅助诊断。血清学检查：通过检测相应的特异性抗体以辅助诊断。如肥如肥 达氏试验、军团菌抗体检查等。应进行双份血清检测，两次达氏试验、军团菌抗体检查等。应进行双份血清检测，两次 抗体效价相差抗体效价相差4倍以上有意义。倍以上有意义。 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 第二节 病原体耐药性检测 临床常见病原体检测临床常见病原体检测200

17、2009 9 抗菌药物治疗的现状和存在的问题抗菌药物治疗的现状和存在的问题 n使用增加，疗效下降使用增加，疗效下降 n出现难以治疗的感染出现难以治疗的感染 n加剧细菌耐药性加剧细菌耐药性 n引起菌群失调，二重感染引起菌群失调，二重感染 n滥用，污染造成危害滥用，污染造成危害 一、耐药性及发生机制一、耐药性及发生机制 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 1.重点监测耐药菌株重点监测耐药菌株 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 (5)产超广谱产超广谱-内酰胺酶内酰胺酶( )的肺炎克雷伯菌和的肺炎克雷伯菌和 大肠埃希菌大肠埃希菌 (6)持续高产染色体持续高产染

18、色体型型-内酰胺酶内酰胺酶()阴沟阴沟 肠杆菌、产气肠杆菌肠杆菌、产气肠杆菌 (7)多重耐药的铜绿假单胞菌、不动杆菌、嗜多重耐药的铜绿假单胞菌、不动杆菌、嗜 麦芽窄食单胞菌麦芽窄食单胞菌 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 细菌水平和垂直传播耐药基因的整合子系统细菌水平和垂直传播耐药基因的整合子系统 产生灭活抗生素的水解酶和钝化酶产生灭活抗生素的水解酶和钝化酶 细菌抗生素作用靶位的改变细菌抗生素作用靶位的改变 细菌膜外排泵出系统细菌膜外排泵出系统 细菌生物膜的形成细菌生物膜的形成 2. 耐药产生的主要机制耐药产生的主要机制 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009

19、 9 （1 1）手工试验）手工试验 1. 1.纸片扩散法（纸片扩散法（S S，I I，R R） 2.2.稀释法（稀释法（MICMIC） 3.E test3.E test（MICMIC） （2 2）自动仪器）自动仪器 VitekVitek，MicroscanMicroscan， PhoenixPhoenix （3 3）分子试验）分子试验 PCRPCR直接检测直接检测mecAmecA基因基因 二、检查项目、结果和临床应用二、检查项目、结果和临床应用 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 K-B 法 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 临床常见病原体检测临床常见

20、病原体检测2002009 9 E-试验试验 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 n最低抑菌浓度（最低抑菌浓度（MIC）：）：抑制细菌生长的最抑制细菌生长的最 低药物浓度。低药物浓度。 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 n敏感（敏感（S S）：）：测试菌能被测定药物常规剂量给药测试菌能被测定药物常规剂量给药 后在体内达到的血药浓度所抑制或杀灭，后在体内达到的血药浓度所抑制或杀灭，即该即该 菌引起的感染可以用推荐剂量（常规剂量）的菌引起的感染可以用推荐剂量（常规剂量）的 该抗菌药物治疗。其体外的最低抑菌浓度该抗菌药物治疗。其体外的最低抑菌浓度 （MIC）必

21、须低于临床上该种抗菌药物的常规必须低于临床上该种抗菌药物的常规 用量。用量。 铜绿假单胞菌药敏实验结铜绿假单胞菌药敏实验结 果果 S S 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 n中度敏感（中度敏感（I I）：）：测定菌能被测定药物大剂测定菌能被测定药物大剂 量给药后在体内达到的血药浓度所抑制，量给药后在体内达到的血药浓度所抑制， 或在测定药物浓集部位的体液中被抑制。或在测定药物浓集部位的体液中被抑制。 其细菌对这类抗菌药物的反应性通常低于其细菌对这类抗菌药物的反应性通常低于 敏感菌，中度敏感药物在生理浓集部位或敏感菌，中度敏感药物在生理浓集部位或 高于常规剂量也可有临床疗效。

22、高于常规剂量也可有临床疗效。 铜绿假单胞菌药敏实验结铜绿假单胞菌药敏实验结 果果 I 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 n耐药（耐药（R R）：）：测试菌不能被在体内感染部测试菌不能被在体内感染部 位可能达到的抗菌药物浓度所抑制，位可能达到的抗菌药物浓度所抑制，感感 染菌对该抗菌药物治疗不发生反应，即染菌对该抗菌药物治疗不发生反应，即 使加大剂量或药物浓集部位也不发生反使加大剂量或药物浓集部位也不发生反 应。应。 铜绿假单胞菌药敏实验结铜绿假单胞菌药敏实验结 果果 R 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 对所有对所有内酰胺类及与酶内酰胺类及与酶 抑制剂

23、的复合剂耐药并对抑制剂的复合剂耐药并对 氨基糖甙类、大环内脂类、氨基糖甙类、大环内脂类、 克林霉素和四环素等抗生克林霉素和四环素等抗生 素多重耐药。治疗首选药素多重耐药。治疗首选药 物为物为万古霉素万古霉素。 FOX OX OX FOX OX FOX 注注:OX为苯唑西林为苯唑西林;FOX为头孢西丁为头孢西丁 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 1.CTX/CA比比CTX抑菌圈抑菌圈 或或CAZ/CA比比CAX 5mm即为阳性即为阳性 2.若若ESBLs阳性阳性,对青霉对青霉 素类、所有头孢菌素素类、所有头孢菌素 类及单环类抗菌素耐类及单环类抗菌素耐 药药 3.主要在大肠埃

24、希菌和克主要在大肠埃希菌和克 雷伯菌属等肠杆菌科雷伯菌属等肠杆菌科 细菌中产生细菌中产生 CTX CTX/CA CAZ CAZ/CA 注注:CTX为头孢噻肟为头孢噻肟;CTX/CA为头孢噻肟为头孢噻肟/棒酸棒酸 CAZ为头孢他啶为头孢他啶;CAZ/CA为头孢他啶为头孢他啶/棒酸棒酸 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 第三节第三节 临床感染常见病原体检测临床感染常见病原体检测 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 一、细菌感染一、细菌感染 1. 1.检测细菌或其抗原：直接涂片镜检、培养、检测细菌或其抗原：直接涂片镜检、培养、 抗原检测与分析抗原检测与分析

25、2. 2.检测抗体检测抗体 3.3.检测细菌遗传物质检测细菌遗传物质 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 二二.病毒感染：病毒感染： 1.显微镜形态学检查：光镜检查特征性病毒包涵体，显微镜形态学检查：光镜检查特征性病毒包涵体， 电镜检查病毒颗粒。电镜检查病毒颗粒。 2.分离培养：活细胞培养临床不常用。分离培养：活细胞培养临床不常用。 3.血清学检查：临床常用，如血清学检查：临床常用，如HIV检查等。检查等。 4.核酸杂交和核酸杂交和PCR方法：近年来发展迅速。方法：近年来发展迅速。 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 三三.真菌感染：真菌感染： 1.形态

26、学检查：重要手段。形态学检查：重要手段。 2.分离培养、鉴定。分离培养、鉴定。 3.抗原检查及血清学诊断：少用。抗原检查及血清学诊断：少用。 四四.寄生虫感染：寄生虫感染： 1.涂片检查：最可靠确诊方法，如粪便中找蠕虫卵、涂片检查：最可靠确诊方法，如粪便中找蠕虫卵、 外周血中找疟原虫等。外周血中找疟原虫等。 2.免疫学方法：广泛应用免疫学方法：广泛应用 。 3.DNA探针及探针及PCR技术：技术： 近年发展迅速。近年发展迅速。 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 五五.其他病原体感染检查：其他病原体感染检查： 1.支原体检查：直接显微镜检查无临床意义，分离支原体检查：直接显

27、微镜检查无临床意义，分离 培养为确诊依据。培养为确诊依据。 2.螺旋体检查：暗视野显微镜检查；钩端螺旋体可螺旋体检查：暗视野显微镜检查；钩端螺旋体可 培养；血清学诊断为最主要方法。培养；血清学诊断为最主要方法。 3.衣原体检查：直接显微镜检查有参考价值；免疫衣原体检查：直接显微镜检查有参考价值；免疫 学方法检测抗原或抗体为主要方法。学方法检测抗原或抗体为主要方法。 4.立克次体检查：直接检出（免疫荧光、立克次体检查：直接检出（免疫荧光、PCR等）；等）； 动物接种；血清学诊断试验（外斐试验等）。动物接种；血清学诊断试验（外斐试验等）。 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 第

28、五节第五节 性传播疾病病原体检测性传播疾病病原体检测 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 n性传播疾病（性传播疾病（STD）是指是指以性行为为主要传播途以性行为为主要传播途 径的一类传染病径的一类传染病，通称性病。，通称性病。 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 HIV感染检测感染检测 筛选试验：筛选试验：ELISA法测法测HIV抗体抗体 确诊试验：蛋白印迹试验确诊试验：蛋白印迹试验 RT-PCR测测HIV-RNA 梅毒螺旋体感染检测梅毒螺旋体感染检测 筛选试验：筛选试验：RPR快速血浆反应素试验快速血浆反应素试验 确诊试验：确诊试验：TPHA梅毒螺旋体

29、血凝试验梅毒螺旋体血凝试验 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 淋病病原体检测淋病病原体检测 1.直接显微镜涂片检查：直接显微镜涂片检查：早期诊断，敏感性稍差，对早期诊断，敏感性稍差，对 男性患者特异性高而对女性患者特异性稍差。男性患者特异性高而对女性患者特异性稍差。 2.PCR方法：方法：早期、快速、敏感的方法，不能区别是早期、快速、敏感的方法，不能区别是 活菌还是死菌。活菌还是死菌。 3.分离培养和鉴定：分离培养和鉴定：特异性高，为诊断特异性高，为诊断“金标准金标准”， 同时可作药敏试验。同时可作药敏试验。 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 非淋菌

30、性尿道炎实验室检查：非淋菌性尿道炎实验室检查： 1.衣原体检查：衣原体检查：常用特异性抗原检查、培养常用特异性抗原检查、培养 等。等。 2.支原体检查：支原体检查：相关病原体主要是相关病原体主要是解脲脲原解脲脲原 体与人型支原体体与人型支原体，可进行培养。，可进行培养。 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 第六节第六节 医院感染常见病原体检测医院感染常见病原体检测 临床常见病原体检测临床常见病原体检测2002009 9 n医院感染是指患者在入院时既不存在，亦不医院感染是指患者在入院时既不存在，亦不 处于潜伏期，而在医院内发生的感染，包括处于潜伏期，而在医院内发生的感染，包括 医院内获得而在出院后发病的感染。即发生医院内获得而在出院后发病的感染。即发生 在医院中的一切感染