疑难血型鉴定与疑难配血教学资料

1、 疑难血型疑难血型 -疑难血型是一种血型难以检定或判定的现象 -在血型分类中没有疑难血型，文献中也查不到疑难血型 的定义。 -一份样本的血型检定是否疑难，除了样本本身的特殊性 外，还与实验室设备，技术人员水平和经验等多种因素有 关。 -临床输血中，一般只涉及ABO和RhD血型，不涉及其他血 型系统的疑难血型。 ABO血型：血型：根据红细胞膜上有无A抗原或/和B抗原，将血 型分为A型、B型、AB型及O型四种。A型人血清中含抗B 抗体，B型人血清中含抗A抗体，O型人血清中含抗A和抗B 抗体，AB型人血清中不含ABO抗体。 正定型正定型：采用抗A和抗B试剂血清以凝集实验来检定红细 胞上有无对应的A抗

2、原或B抗原。 反定型反定型：采用A型试剂红细胞和B型试剂红细胞检测血清 中有无相应的抗A抗体和抗B抗体。 同时从正定型和反定型两项实验来检定样本的同时从正定型和反定型两项实验来检定样本的ABO血型。血型。 O型红细胞的作用 可以提示抗-H(如孟买型)、某些IgM类不规 则抗体，冷凝素或自身抗体。 A B O 血 型 检 定 方 法 - - - - 玻 片 法 简 单、 快 速， 基 本 没 有 实 验 条 件 的 限 制 - - - - 试 管 法 准 确 可 靠 - - - - 微 板 法 适 用 于 大 批 量 样 本 实 验 不 同 的 方 法 用 途 不 同， 实 验 条 件 不 同

3、玻片法: 把混合物均匀涂开，使其覆盖面积大约20mm20mm。 缓慢连续倾斜转动玻片或纸片1分钟5分钟，观察结果。 试管法： 细胞的浓度3%-5%、最佳离心力（既不能大也不能小） 结果观察：上清液有无溶血现象，细胞扣有无凝集块。 微板法： 细胞的浓度3%-5%、离心力（既不能大也不能小） 结果观察：上清液有无溶血现象，细胞扣有无凝集块。 用洗涤充分的红细胞 -可以去除红细胞上黏附的蛋白的干扰 -可以去除样本血浆中含对试剂成分反应 的物质。 试管方法为经典方法 离心机离心力校正 。 疑疑 难难 血血 型型 的的 特特 点点 - - - - - - - - 正 定 型 凝 集 弱 于 2 + 或

4、反 定 型 弱 于 1 + （ 正 常 凝 集 3 + 4 +） - - - - 正 反 定 型 不 一 致 - - - - 抗 - A， B 与 抗 - A / 抗 - B 的 凝 集 强 弱 不 平 行 或 凝 集 呈 m f。 干扰血型正确检定的常见因素干扰血型正确检定的常见因素 n生理因素生理因素 -年龄 -ABO亚型 -先天无抗体 -冷凝集素 n实验技术原因实验技术原因 -样本混淆 -静脉输液处采样 -试剂质量问题或漏加试剂 -实验操作不规范 n临床治疗临床治疗 -大量输液 -静脉输入高分子药物 静脉输入高分子药物如甘 露醇、右旋糖酐，羟乙基淀粉等，可导致红细胞 呈钱串状，干扰结果判

5、定。 -近期输过异型红细胞（包括宫内输血）或异型血 浆 -异基因造血干细胞移植 n疾病原因疾病原因 -白血病或某些其他造血系统恶性疾患，白血病血型白血病血型“变变 异异” 变少不变多，疾病缓解后，血型抗原恢复。 -肝脏疾病、结核病等血浆蛋白紊乱干扰ABO正定型呈 钱串样。 -丙球蛋白过低血症 -真性红细胞增多症、多发性骨髓瘤等 -不规则抗体 -感染 革兰阴性（G）菌感染 启启 动动 疑疑 难难 血血 型型 分分 析析 思思 路路 推 荐 方 法 ： 三 步 法 参 考 输 血 免 疫 学 实 验 技 术 人 卫 社 n 第 一 步 ： 排 除 人 为 因 素 或 操 作 失 误 。 首 先 需

6、 要 排 除 在 技 术 上 可 能 发 生 的 错 误 ， 规 范 地 做 重 复 试 验 - - - - 重 新 采 集 血 样 - - - - 核 对 试 剂 、 器 材 核 对 试 剂 - - - - 复 检 A B O 血 型 n 第二步：了解临床资料，分析可能的原因 -病人年龄小于1岁或大于60岁吗？ -病人的丙球蛋白浓度减低吗？ -病人的诊断是白血病、肠道阻塞、胃癌、结肠或 直肠癌瘤吗？ -病人做过骨髓移植手术吗？ -病人是一位经产妇吗？ -病人近期输过血吗？ n 第三步：排除不可能的原因，归纳不能排除的原因，设计 验证试验。 n 举例说明 红细胞抗原减弱或丢失红细胞抗原减弱或丢

7、失 -ABO亚型 -正定型ABO抗原减弱 红细胞额外反应红细胞额外反应 -亚型抗体 -自身抗体 -获得性B抗原（类B） 混合凝集（混合凝集（mf） 红细胞抗原减弱或丢失红细胞抗原减弱或丢失 - - - - A B O 亚亚 型型 u实 验 结 果 ： 正 定 型 与 反 定 型 不 一 致 ， 正 定 型 被 检 红 细 胞 凝 集 弱 u解 决 办 法 - - - - 加 抗 - A B 、 抗 A 1 、 抗 - H （ 抗 - A B 、 - H 与 抗 - A 或 抗 - B 的 凝 集 强 弱 不 一 致 ） - - - - 吸 收 / 放 散 试 验 - - - - 高 效 价 的

8、 人 源 血 清 - - - - 血 型 物 质 检 测 - - - - D N A 鉴 定 亚 型 统 计 ？ 2.正定型ABO抗原减弱 u实验结果：正定型与反定型不一致，或正定型被 检红细胞凝集弱，或正定型呈mf样。 u提示：临床诊断白血病或其他造血系统恶性疾患 （如MDS），一般反定型不受干扰，（不会增强 或出现额外反应） u偶见RhD抗原减弱者。 u一般病情缓解后血型抗原强度恢复 u解 决 办 法 - - - - 抗 原 - 抗 体 增 强 技 术 （ 4 孵 育 1 小 时 替 代 离 心 看 结 果 ） - - - - - 加 抗 - A B - - - - 吸 收 / 放 散 试

9、 验 - - - - 血 型 物 质 检 测 - - - - D N A 鉴 定 u与 亚 型 的 区 别 红细胞额外反应红细胞额外反应 1.亚型抗体 u实验结果：抗-A w+，抗-B 0，AC 2+，BC 4+，OC 0， u正定型被检红细胞凝集弱 u解决办法 -加抗-AB、抗A1、抗-H -吸收/放散试验 -血型物质检测 -DNA鉴定 2.不规则抗体 u实验结果：抗-A 4+，抗-B 0，AC 0，BC 3+，OC 2+， u临床提示：有输血史或妊娠史 u解决办法： u-加-H和抗-AB u-抗体筛选与鉴定 3.自身抗体 u实验结果：抗-A +，抗-B +，AC +，BC +，OC +，直

10、抗 +。 u临床提示：AIHA，自身红细胞被自身抗体致敏后在含蛋 白的ABO定型血清中可能发生非特异性凝集 u解决办法： -37盐水洗涤红细胞至直抗阴性后检定血型。 -红细胞经甘氨酸/HCl或二磷酸氯喹放散至直抗阴性后检定 血型。 2.红细胞额外反应-获得性B抗原（类B） u临床提示：细菌感染（尤其是肠道细菌感染），以前为O 型或A型。 u实验结果： u解决方法 -用酸化（pH 6.0）抗-B检测（无凝集） -吸收放散实验，吸收抗-B的能力弱，区别于亚型 *临床追踪，感染控制后“类B”现象消失 混合凝集（混合凝集（mfmf） 混合凝集（mf）： 部分红细胞凝集（大凝集块） 部分红细胞均匀分布（

11、背景浑浊） -近期输异型血 -造血干细胞移植 ABO血型不同的造血干细胞移植后，如果 植入存活，受者逐渐转变为供者血型的过 程中，可能呈嵌合体状态。 如果供者O型，受者非O型，受者的A或B抗 原逐渐减弱，抗体逐渐被检出。 是移植物存活的指标之一。 三个月内输异型血，一般直接抗人球蛋白 试验（DAT）阳性 血型鉴定：毛细管离心法（分离年轻和衰 老红细胞） DNA鉴定（供者白细胞在受者外周血中存 活期短，一般不干扰受者DNA鉴定） RhD误定误定 -D抗原阳性误定阴性，D抗原阴性误定阳性 -特例弱特例弱D -D抗原遮断抗原遮断 解决疑难血型攻略解决疑难血型攻略 u采用最经典的试管方法 u用洗涤充分

12、的红细胞制备悬液 u增加高效价人源抗血清检测 u增加抗-AB、抗-H和抗A1检测 u吸收放散实验 uDNA检测 u直抗试验 *。 血型检定，抗体筛查和交叉配血三步也是确保安 全有效输血的三关，交叉配血是最后一关，也是 “三关”中最重要的一关。只要交叉配血真正相 合（相容），将血液输给患者才是安全的。 主 侧 配 血 - - - - 患 者 血 清 与 供 者 红 细 胞 配 血 次 侧 配 血 - - - - 供 者 血 清 与 患 者 红 细 胞 配 血 - - - - 全 血 要 求 交 叉 配 血 - - - - 血 浆 则 只 要 求 A B O 同 型 输 注 。 - - - - 不

13、 含 血 浆 的 红 细 胞 只 要 求 主 侧 配 血 一般情况下，只要ABO、RhD血型检定正确 供/受者ABO、RhD同型配血，多数情况是相合的 如果不相合，则视为“疑难配血” 一般只有配血相合，才能输血 配血不相合，不能输血 特殊情况例外 交交 叉叉 配配 血血 的的 方方 法法 聚 凝 胺 配 血？ 抗 球 蛋 白 试 剂 配 血？ 卡 式 配 血？ AABB推荐方法推荐方法 The Antiglobulin Test Other Methods to Detect Antigen-Antibody Reactions Solid-Phase Red Cell Adherence T

14、ests Column Agglutination Technology Enzyme-Linked Immunosorbent Assay 全全 国国 临临 床床 检检 验验 操操 作作 规规 程程 第第 二二 篇篇 临临 床床 血血 液液 学学 检检 验验 第第 六六 章章 血血 型型 血血 清清 学学 检检 查查 p 2 4 6 - 2 7 1 第 七 节 交 叉 配 血 试 验 p 2 6 2 一、 交 叉 配 血 方 法 p 2 6 2 - 2 6 4 （ 一） 盐 水 介 质 配 血 法 （ 二） 酶 技 术 配 血 法 （ 三） 抗 人 球 蛋 白 配 血 法 ( 四) L I

15、S S 配 血 法 ( 五) 微 柱 凝 胶 卡 配 血 法 详 见 本 章 第 四 节 第 六 部 分。 第 四 节 血 清 学 常 用 检 查 六、 凝 聚 胶 试 验 P 2 5 8 第 八 节 微 柱 凝 胶 试 验 可 用 于 交 叉 配 血 p 2 6 5 抗球蛋白试验(也成Coombs试验），它是以抗人球 蛋白试剂作为连接桥，使不完全抗体致敏的红细 胞连接并发生凝集。 微柱凝胶实验（简称 MCGT） 1986 年法国的Yves Lapierre 首先发明此方法, 1994 年获美国FDA批准使用 -凝胶过滤技术和免疫学的产物 -是抗人球蛋白试验的技术延伸 原理：一定浓度的凝胶如筛

16、子，把产生凝集的细胞 团块阻挡于凝胶顶部，没有产生凝集的单个细胞 则能够通过离心沉降于微管底部。 4+4+ 3+ 3+ 2+2+ 1+ 1+ +/-+/- - - 溶血溶血 双群双群 ； 阳性阳性阴性阴性 微 管 凝 胶 检 测 技 术 的 关 键 是 凝 胶， 通 过 凝 胶 的 浓 度 来 控 制 凝 胶 间 隙 的 大 小； 凝 胶 试 剂 中 已 经 加 好 了 抗 球 蛋 白， 从 而 简 化 了 操 作 过 程， 只 需 加 入 样 本 即 可； 高 敏 感 性、 高 特 异 性 和 可 重 复 性 等 优 点； 假 阴 性？ 假 阳 性？ 质 量 的 可 靠 性? L I S S

17、 的 应 用？ 聚 凝 胺 是 一 种 由 四 个 铵 聚 合 而 成 的 高 阳 离 子 聚 合 体。 红 细 胞 血 型 抗 原 与 相 应 的 抗 体 在 低 离 子 介 质 中 快 速 孵 育 致 敏 后， 加 入 带 正 电 荷 的 聚 凝 胺 大 分 子 聚 合 物 后， 中 和 红 细 胞 表 面 唾 液 酸 所 带 的 负 电 荷， 减 弱 红 细 胞 间 的 静 电 斥 力， 缩 短 红 细 胞 间 的 距 离， 促 使 红 细 胞 凝 集 或 聚 集。 它 可 使 正 常 红 细 胞 聚 集， 而 在 加 入 柠 檬 酸 盐 时 又 可 使 聚 集 的 红 细 胞 散 开。

18、 当 红 细 胞 上 有 I g G 抗 体 结 合 时， 聚 凝 胺 所 造 成 的 凝 集 是 不 可 逆 的， 加 入 柠 檬 酸 盐 时 不 会 散 开， 呈 现 出 肉 眼 可 见 的 凝 集 现 象。 凝 聚 胺 不 是 一 个 特 异 性 的 试 验, 如 果 凝 聚 胺 结 果 阳 性， 必 须 用 抗 球 蛋 白 试 验 做 确 认。 用 凝 聚 胺 试 验 技 术 交 叉 配 血， 出 现 不 配 合 时， 要 用 抗 人 球 蛋 白 试 验 重 复。 结 果 不 一 致， 以 抗 人 球 蛋 白 试 验 结 果 为 准。 参 考 文 献： 中 国 输 血 丛 书 输 血

19、免 疫 血 液 学 实 验 技 术 ， 人 民 卫 生 出 版 社， 2 0 1 1， ： 7 5 - 7 6 任何一种实验方法都不可能百分之百准确无误， 都有假阳性或假阴性。假阴性可能导致患者被输 入并非真正相合的红细胞，从而导致患者发生免 疫学反应，（急性或迟发生性溶血性输血反应， 或红细胞输进体内后寿命缩短）。假阳性则造成 人力和资源的浪费。 聚凝胺试剂漏检抗体举例聚凝胺试剂漏检抗体举例 骨 髓 瘤 患 者 有 多 次 输 血 史 ， 因 抗 筛 阳 性 送 检 （ 抗 球 蛋 白 卡 法 ） 。 血血 型型 鉴鉴 定定 ： B 型 , C c D E e 直直 抗抗 ： 1 + 抗 筛

20、 结 果 ： 抗 体 鉴 定 是 - J k a 抗 体 ， 提 供 J k a 抗 原 阴 性 血 液 。 抗球蛋白试剂漏检抗体举例抗球蛋白试剂漏检抗体举例 溶溶 血血 性性 贫贫 血血 患患 者者 有有 多多 次次 输输 血血 史，史， 因因 抗抗 筛筛 （ 卡卡 式）式） 阴阴 性，性， 凝凝 聚聚 胺胺 配配 血血 不不 合合 送送 检检。 血血 型型 鉴鉴 定定： O 型, C c D E E 直直 抗：抗： 1 + 抗抗 筛筛 阴 性 对 照 阳 性 对 照 盐 水 0 0 0 0 0 p o l y 2 + 0 2 + 0 3 + A H G 0 0 0 0 3 + M G T

21、0 0 0 0 3 + 在 聚 凝 胺 介 质 中 试 验 反 应 结 果 符 合 抗 - e 格 局 抗 体 鉴 定 证 明 是 - e， 提 供 e 抗 原 阴 性 血 液。 不 同 的 情 况 采 取 不 同 的 检 测 技 术 - - - - 常 规 - - - - 急 诊 - - - - 输 血 无 效 - - - - 输 血 反 应 建 立 适 合 本 实 验 室 的 免 疫 血 液 学 检 测 技 术 - - - - 医 院 实 验 室 - - - - 血 站 实 验 室 盐 水 法： I g M 抗 体、 A B O 血 型 的 复 核； 凝 聚 胺 试 验 和 抗 人 球 蛋 白 试 验： I g G 抗 体 筛 查 抗 人 球 蛋 白 试 验 仍 然 不 可 替 代， 遇 到 异 常 的 实 验 结 果 时， 应 以 抗 人 球 蛋 白 法 为 准。 主侧配血不相合的原因主侧配血不相合的原因 1.患者血清的原因 -针对供者红细胞的同种抗体。 -自身抗体 -冷凝集素：实验操作在37进行。 -血清（浆）蛋白紊乱（A/G倒置、M蛋白等）： 假凝集，红细胞膜完整，加生理盐水稀释后散开 2. 供者红细胞的原因（很少见）