肝豆状核变性课题汇报2教学资料

1、 HLD流行病学调查流行病学调查 本病是较为常见的单基因遗传病，国外Ferenci P等流 行病学调查，本病发病率为1/3万人，患病率为 1525/10万人，杂合子为1/100人 国内刘焯霖等对19821991年神经遗传性疾病专科门 诊统计分析，结果HLD占10.14，居全部单基因遗传 病的第二位 我院统计2010年7月2011年2月期间427例住院患者， 约70%的患者在院外由于误诊误治导致病情加重，甚 至因为肝硬化失代偿或/及严重脑损害导致残疾和死亡 申请项目的必要性和依据申请项目的必要性和依据 申请项目的必要性和依据申请项目的必要性和依据 Ferenci P等等 胡纪源等胡纪源等 杨任民

2、等杨任民等 HLD的病理研究 证实患者均存在 明显的肝脏损害 绝大多数HLD患 者存在着不同程 度的肝纤维化声 像学改变 HLD的肝纤维化 是患者最常见的 病理改变 肝硬化失代偿 是本病患者致 残、致死的最 主要原因 我们认为非常有必要 对HLD的肝纤维化进 行系统研究 研究证实研究证实HLD患者均存在明显的肝脏损害患者均存在明显的肝脏损害 干预干预 申请项目的必要性和依据申请项目的必要性和依据 肝纤维化的病理机制肝纤维化的病理机制 肝纤维化 的形成涉 及致病机 体反应的 多个方面 反应细胞 细胞因子 细胞过量表 达产物以及 降解酶等 复杂 的细 胞及 分子 机制 ECM 合成 增加 ECM

3、降解 减少 致病因子使 肝组织中 窦内 皮细 胞 肝细 胞等 形成复 杂的细 胞-细 胞因子 网络 肝星 状细 胞激 活 这些物质常 被用作检测肝纤 维化水平的血清 标志物 HA LN PC- IV-C ECM可 被基质金 属蛋白酶 （MMPs） 降解 基质金属 蛋白酶抑 制剂(TIMPs) 阻止肝 脏ECM 的降解 肝纤维化肝纤维化 吕有魁等临床观察到多数吕有魁等临床观察到多数HLD患者上述指标明显升高患者上述指标明显升高 刘焯霖等 观察到儿 童HLD肝 组织内 TIMP-1、 TIMP-2表 达量增强 国内外有关文献在治疗国内外有关文献在治疗HLD肝纤维化现状肝纤维化现状 国内外有关文献在

4、治疗HLD肝纤维化尚属空白，已报导 的药物尚无一种被正式批准应用于临床抗肝纤维化， 这是因为 申请项目的必要性和依据申请项目的必要性和依据 某些药物虽具 有抗肝纤维化 作用，但其靶 向性不强，对 其它组织也有 影响，长期应 用副作用大 许多药物早 期或短期有 预防作用， 对已形成的 肝纤维化疗 效并不明显 某些药物在 某一环节有 抗肝纤维化 效果，但在 其它环节又 促进纤维化 矛盾的作用 寻找有效治疗HLD肝纤维化的途径任重而道远却又迫在眉睫 干细胞干预肝纤维化的研究现状干细胞干预肝纤维化的研究现状 申请项目的必要性和依据申请项目的必要性和依据 Peresen 等Higashiyama R等

5、Sakaida等 Aziz等 骨髓间充质 干细胞及肝 星状细胞， 可诱导活化 的肝星状细 胞凋亡，明 显减少胶原 沉积 骨髓干细胞定 植于肝脏，一 部分表达基质 金属蛋白酶， 促进纤维条索 的溶解而发挥 抗纤维作用 骨髓干细胞移 至肝脏纤维条 索周围 分泌 MMP-2、9 14增多 细胞 外基质及胶原 条索降解增多 有利肝功改善 通过将MSCs 由尾静脉注入 肝纤维化模型 鼠内发现MSCs 具有向肝细胞 方向的转化及减 轻肝纤维化的 功能 MSCs移植具有抗肝纤维化作用 骨髓间充质干细胞治疗肝损害的优势骨髓间充质干细胞治疗肝损害的优势 骨髓间充质干细胞取材方便，来源丰富 分化能力强 免疫原性低

6、 没有伦理学障碍，不受道德及法律方面的限制 具有跨胚层向多组织细胞分化的潜能和自我更 新的高增值能力。 申请项目的必要性和依据申请项目的必要性和依据 本课题意义本课题意义 骨髓来源的间充质干细胞治疗肝豆状核变性导致的肝 纤维化的安全性和有效性还需进一步的评估 探讨骨髓间充质干细胞移植治疗该病肝纤维化的机制 也具有重要的意义 申请项目的必要性和依据申请项目的必要性和依据 实施方案实施方案 采用临床试验方法，将病人分为三组: 青霉胺组 骨髓间充质干细胞移植干预组; 骨髓间充质干细胞移植干预加青霉胺组。 随访1-2年；治疗后3、6、9、12个月观察患者日常生 活能力评价、临床分级评价、细胞因子、基质

7、金属蛋 白酶、肝铜含量变化、治疗1年后肝组织活检进行病理 检查，所得数据应用SAS处理。 项目研究开发内容项目研究开发内容 给药方案给药方案 青霉胺组：青霉胺(上海信谊制药公司生产)，剂量为每日 40mg/kg，连续816周 骨髓间充质干细胞移植干预：将3l06细胞/ml的骨髓间充质干 细胞液2ml+生理盐水100ml经静脉移入人体。每10天静脉干细 胞移植一次，三次为一个疗程 骨髓间充质干细胞移植干预加青霉胺组：将3l06细胞/ml的骨 髓间充质干细胞液2m+生理盐水100ml经静脉移入人体，每10天 静脉干细胞移植一次，三次为一个疗程。另将青霉胺（剂量为 每日40mg/kg），每日分3次口

8、服，连续816周 项目研究开发内容项目研究开发内容 标本收集标本收集 分别于治疗后3、6、9、12个月抽取病人外周血1.2ml， 用于细胞因子、基质金属蛋白酶、肝铜含量检测； 治疗后1年进行肝脏组织病理检查 项目研究开发内容项目研究开发内容 观察指标与方法观察指标与方法 取血1.2ml，血标本经低速冷冻离心(3000转/分)10分 钟后取血清约0.5ml进行有关实验项目检测。如：血清 生化、肝纤维化指标及相关细胞因子检测 血清铜蓝蛋白采用免疫比浊法，ALT采用比色法，LN、 HA采用放射免疫法(RIA)，PDGF、 TGF1、IL-10、 TNF-、MMP-1及TIMP-1采用ELISA法 肝

9、脏组织病理检查:肝脏标本均作连续切片，每份标本 均行下述检查：普通HE染色、胶原纤维采用Masson氏 染色、网状纤维采用Gomori染色 肝脏组织铜含量测定采用原子吸收分光光度法检测 项目研究开发内容项目研究开发内容 统计学分析统计学分析 数据应用SAS处理，各组间比较采用one way ANOVA 分析 项目研究开发内容项目研究开发内容 关键技术关键技术 肝脏穿刺可能会给病人带来一定的痛苦和创伤，我们 将请有经验的临床医生在彩超监测下进行活检 建立一套稳定的检测细胞因子、基质金属蛋白酶、肝 铜含量方法直关重要。本实验室检测基质金属蛋白酶 时，出现不稳定的现象，对于这一问题，我们正请有 关专

10、家帮助建立稳定、可靠的方法 项目研究开发内容项目研究开发内容 技术路线技术路线 项目研究开发内容项目研究开发内容 本项目的特色与创新之处本项目的特色与创新之处 首次应用人骨髓干细胞移植干预HLD患者，为开展骨 髓干细胞移植治疗HLD肝纤维化提供新的 理论、实验 依据 项目研究开发内容项目研究开发内容 已具备的试验手段已具备的试验手段 南方医科大学附属郑州人民医院2008年成立了院士工作站，并 开展了干细胞治疗。与此相适应的投入一千万元建立了一个现 代化试验室，配备了先进的试验设备。有能力提供高质量、高 活性的细胞 该研究与我们刚获得的国家自然基金项目可以共享试验设备和 人力资源，我们又投入50

11、0多万元，购买了与试验相关的设备， 如ABI3730XL序列仪、高速冷冻离心机、流式细胞仪、PCR仪、 分子生物学平台、高速离心机、悬涡振荡器，磁力搅拌器， PH计，立式高压消毒锅，微波炉等 院士工作站具备完成本课题所需的条件 实施本项目已具备的条件实施本项目已具备的条件 已具备的技术力量已具备的技术力量 姓姓 名名性性 别别出生年月出生年月学学 历历职称（职务）职称（职务）从事专业从事专业工作单位及部门工作单位及部门 张东锋男1976.10硕士主治医师神经内科郑州人民医院、脑科医院 曹 巍男1963.01博士教 授分子病理郑州人民医院、院士工作站 王大忠男1968.08硕士副主任医师神经内科

12、郑州人民医院、脑科医院 吴牵峰男1973.12硕士主治医师神经内科郑州人民医院、脑科医院 刘 荣女1975.05博士副研究员 药理学郑州人民医院、院士工作站 张 岩男1983.02学士住院医师神经内科郑州人民医院、脑科医院 葛长勇男1970.02博士副研究员干细胞研究郑州人民医院、院士工作站 实施本项目已具备的条件实施本项目已具备的条件 项目的预期经济、社会和环境效益项目的预期经济、社会和环境效益 通过以下三方面的研究 评价骨髓间充质干细胞治疗HLD患者的安全性和有效性 （血常规、尿常规、肝肾功能） 探讨经人静脉骨髓间充质干细胞移植干预肝纤维化的 病理过程 观察骨髓间充质干细胞对多种肝纤维化指

13、标、细胞因 子、基质金属蛋白酶、肝铜含量的影响及肝组织光镜、 电镜的病理改变 本项目可取的以下几项成果 客观评价骨髓干细胞移植治疗HLD肝纤维化的安全性和 有效性。 初步探讨骨髓干细胞移植对HLD肝纤维化干预的作用机 制。 在国内核心期刊发表学术论文1-2篇，SCI杂志发表专 业论文1篇。 申报省及市级科技进步奖项 项目的预期经济、社会和环境效益项目的预期经济、社会和环境效益 经费概算经费概算 资金支出预算资金支出预算预算金额（万元）预算金额（万元） 其中：申请其中：申请 市财政拨款市财政拨款 财政拨款支持简要说明财政拨款支持简要说明 1.设备费 4酶联免疫阅读仪 2.材料费10抗原及酶标记抗体; DNA 提取试剂盒；测序 试剂等耗材 3.测