高效液相色谱法及液-质联仪法在中药鉴定中的应用

1、高效液相色谱法及液-质联仪法在中药鉴定中的应用 中图分类号：r927 文献标识码：c 文章编号：1006-1533(2007)07-0312-02 中药鉴定学是一门传统而古老的学问，是随着中医理论的建立和发展而建立并不断完善的一项技术。发展到20世纪50年代，逐步形成了四大鉴别法：性状鉴定法、基源鉴定法、显微鉴定法和理化鉴定法。中药鉴定学已成为一门系统而完善的学科。近年，国家制定了中药现代化发展规划。为了保证中药的质量，各种现代的鉴定法越来越多地在中药鉴定中被应用。而高效液相色谱法（high perfomance liquid chromatography,hplc）是理化鉴定法中应用较为广泛

2、的一种。 hplc具有快速、灵敏、分离效能高等优点1。在中药鉴定中，采用hplc法分离特征成分后，用紫外检测器（uv）或质谱检测器（ms）进行结构分析和定量分析，是全面评价质量的有效方法。中国药典（2000年版）一部中就有59种药材和50种中成药采用hplc法进行鉴定。而且还不断有人用hplc法对其它的中药进行鉴定和成分分析研究。其中主要涉及的研究在此作一介绍。 1 建立单味中药的高效液相指纹图谱（hplc fengerprent spectrum） 2000年我国中药指纹图谱技术全面启动。指纹图谱能根据中医用药理论，从宏观的角度完成对中药的综合分析和整体分析，表达产品质量的稳定性、均一性；有

3、效地鉴别样品的真伪或产地；指导中药种植符合gap的要求。它是中药质量标准的一个飞跃，也是中药实现国际化的关键技术之一2。 余静等3通过对同一产地（龙江伊春南岔）10批刺五加样品，采用hplc-uv、hplc-ms进行分析，得到分离度和重现性均较好的刺五加药材hplc-uv及hplc-ms指纹图谱，并分别对水溶性成分指纹图谱中5个色谱峰和脂溶性成分指纹图谱中8个色谱峰进行了初步定性。两个指纹图谱相互补充为刺五加的相关研究提供了较全面的数据。同时表明质谱检测器对uv检测器是较好的补充。刘艳娥等4通过对10批金银花药材样品进行hplc指纹图谱研究确定了它们有11个共有峰。王荣等5在对甘肃地产大黄道地

4、药材的5批样品及其不同用药部位的hplc研究中确定了7个特征峰，并且发现其中值（=tri/trs，tri为各组分的出峰时间，trs为内参照峰的出峰时间）为0.12、0.13、0.28、0.67，它们在标准对照药材中未标出。由此认为共有7个色谱峰是大黄药材鉴定的有力依据。 对单味中药的高效液相指纹图谱的研究，不仅在基础理论上为药材质量的评价做了大量而有效的工作，而且也为指纹图谱理论在应用领域中的开展提供了简便易行的方法。李磊等6在对丹参水溶性成分hplc法研究过程中，发现正品丹参共有18个共有峰，与其他鼠尾草属植物的指纹图谱存在较大差异，并且采用归一化数药法处理hplc指纹图谱得到不同类别丹参的

5、典型指纹条形码图。该条形码图简单明了，能直观、快捷地对不同等级和质量的丹参做出评价，对不同来源及真伪丹参做出准确鉴别。 2 药材中主要化学成分的指纹图谱研究 对于部分应用时间长、疗效肯定、成分明确的药材，通过研究其主要化学成分的hplc指纹图谱，从方法学的角度讲，能够使研究的方向更加明确，结果比较确定，能对药材质量做出更好的评价。陈志霞等7在通过对化橘红黄酮成分的hplc法研究后，从不同品种和产地的10批样品中得到30余个峰，其中共有峰20多个，并发现大部分光橘红样品在51.4 min有一个含量超过10%的峰，而毛橘红则检测到此峰或含量极低，此外，毛橘红中的柚皮苷的含量均在70%以下，表明化州

6、柚和柚主要有效部位黄酮类成分的hplc指纹图谱有明显差别。马翠英等8对10批不同地区黄芩样品采用溶剂系统梯度洗脱后，确定了14个共有峰的hplc指纹图谱。此外，张雯洁等9还进行了三七不同部位皂苷类成分的hplc指纹图谱研究，认为三七不同部位中皂苷成分大体相同，并确定了17个特征峰。 3 应用于相似药材的鉴别及质量评价 许多同科或同属的药材，由于相似的功效，在临床上有时混用，或在药材流通中渗伪。与此同时，某些资源匮乏、稀有的名贵药材，也存在急需寻找替代品的问题，而上述问题的解决都需要通过有力的质量控制和评价方法来解决，hplc就是其中一种方法。李晓蒙等10通过对5批水牛角和羚羊角样品的hplc法

7、测定，发现羚羊角与水牛角氨基酸含量有明显差异，前者含较高的天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、酪氨酸，而后者则是丙氨酸、颉氨酸的含量相对较高。两者可以用hplc法区分。张聪等11对中国红参和高丽红参进行了hplc指纹图谱比较研究，表明国产红参和进口高丽红参的品质十分接近。还有人对半野生与野生冬虫夏草的化学成分进行比较，认为两者存在明显差异12。 4 中药制剂的hplc指纹图谱研究 中药制剂是中药产业发展的一个重要部分，质量控制是影响其全面发展和国际化的一个瓶颈。2002年国家食品药品监督管理局要求对中药注射剂进行指纹图谱研究，而其他剂型的指纹图谱也相继有人开展了研究。苗爱军13通过对2个不同厂家生产的刺

8、五加注射液的分析，建立其24个特征峰的hplc指纹图谱，并发现不同厂家的产品共有峰面积的比值有一定差异 ，认为hplc指纹特征图谱可以快速区分不同的产品。而沈嘉等14对不同工艺、不同原料制备的黄连解毒汤制品以及日本汉方黄连解毒汤剂用hplc法分析，发现共有1516个特征峰为共有峰，而不同生产工艺及原料制品的特征峰与内标峰的峰高比有显著区别，认为hplc指纹图谱可以量化地区分不同原料和生产工艺生产的同处方复方中药的质量特征。 5 结语 随着hplc及hplc-ms技术的逐步发展和完善，它们必将在中药鉴定以及中药材的种植、中药炮制研究、中药活性成分的分析、生产工艺规范与优化、中药及其制剂生产的质量

9、监控等方面起到重要的作用，从而加快中药产业现代化的步伐。 参考文献 1 许瑞庭.实用药物分析化学m.第1版.杭州：浙江科学技术出版社，1992：548. 2 杨义芳，蔡定建.中药指纹图谱研究概况j.中草药， 2003，34，（6）：附2-附5. 3 余静，李茜，沈文斌，等. 刺五加hpic/uv/ms指纹图谱研究j.中国药科大学学报， 2003， 34（2）：148-150. 4 刘艳娥，吴致涵，吴玉田，等.金银花药材hpic指纹图谱j.解放军药学学报，2003，19（3）：161-164. 5 王荣，张强，贾正平，等. 色谱指纹技术在甘肃道地药材大黄鉴定中的应用j. 中药材， 2003，26

10、（7）：484-486. 6 李磊，黎先春，王小如. 丹参品质鉴定和评价的hpic指纹条形码技术j.中草药， 2003，34（7）：649-653. 7 陈志霞，林励，林冬梅.化橘红黄酮成分的hpic指纹图谱研究 j.中草药，2003，34（7）：657-661. 8 马翠英，戴宝成，林瑞超.黄芩中4种黄酮成分的hplc定量分析及其黄酮类成分的指纹图谱研究j.药物分析杂志， 2003，23（2）：83-86. 9 张雯洁，张斌华，李忠琼.三七不同部位皂苷成分的hplc的特征研究j.中药材， 2003，26（3）：181-182. 10 李晓蒙，何新荣.水牛角与羚羊角的hplc法鉴别j.广东药学院学报 ，2003，19 （2）：97-98. 11 杨义芳，蔡定建.中药指纹图谱研究概况j.中草药，2003，34（6）：附2-附5. 12 陈仁江，尹定华.钟国跃.半野生与野生冬虫夏草化学成分的比较j.中药材，