银叶杜鹃组织培养抑制褐变研究

1、银叶杜鹃组织培养抑制褐变研究 摘要：以3年生银叶杜鹃为供试材料，研究不同外植体、培养条件、培养基质以及抗褐化剂等对银叶杜鹃褐变的影响。结果表明：生长旺盛季节选取幼嫩组织作为外植体的褐变程度较轻，适宜的培养条件能显著减轻褐变；在培养基中添加0.5g/l活性炭，能有效抑制银叶杜鹃在组织培养过程中的褐化现象，培养物能正常生长发育。 关键词：银叶杜鹃；组织培养；褐变 银叶杜鹃（rhododendronargyrophyllum）属杜鹃花科（eri-caceae）杜鹃花属（rhododendron），为常绿小乔木，分枝细密，株形紧凑，叶背银白色而有光泽，叶面绿色、色调鲜明、花色奇特。银叶杜鹃一般通过播种

2、、扦插、压条等方式繁殖，但繁殖系数低、繁殖速度慢、生根困难。运用组织培养技术是繁育银叶杜鹃最为有效的方法，但在组织培养中褐化现象比较严重，影响培养物的生长发育，增殖率低，甚至导致培养物死亡。 1材料与方法 1.1材料 试验材料取自宜宾职业技术学院农业科技园3年生银叶杜鹃苗，取材时间为2014年35月。 1.2试验方法 1.2.1外植体预处理。对所取茎尖，采用无菌水冲洗2次后，用0.1%hgcl2浸泡，再用无菌水冲洗56次进行消毒处理；对种子，用70%酒精浸泡30s后，用0.1%hgcl2浸泡，最后再用无菌水冲洗56次做消毒预处理，接种到培养基中，接种后13天内转换接种材料在三角瓶培养基的位置。

3、 1.2.2培养基。anderson（培养基）+6-ba0.1mg/l+naa0.05mg/l+暗培养1周。 1.2.3培养条件。无特别说明，培养温度均为25，光照强度为2000lx，光照时间为14h/d，ph值为5.35.6。 1.2.4试验设计。（1）以茎尖、种子2种类型的外植体进行接种试验，研究不同外植体类型的褐化反应。（2）设置23、25、273种温度，研究不同温度对外植体褐化的影响。（3）培养基中添加0.5g/l、1.0g/l、1.5g/l活性炭，研究添加不同浓度活性炭对外植体褐化的影响。 1.2.5统计方法。依据培养袋中培养基的褐化直径将褐化程度分为4个等级：（1）无褐化。培养基中

4、未出现褐色。（2）轻度褐化。培养基褐色直径5cm。 褐化率（%）=褐化外植体数/（接种外植体总数一被污染的外植体数）100；各级褐化率（%）=各级褐化数/（接种外植体总数-被污染的外植体数）100；中度及以上褐化率（%）=中度褐化率（%）+重度褐化率（%）。 2结果与分析 2.1银叶杜鹃不同外植体的褐化反应 2种外植体接种数均为60后，3d内出现不同程度的褐化现象，4周时统计其褐变率，统计结果见表1。 从表1可以看出，2种外植体褐化程度不同，茎尖外植体的褐化程度相对较轻，无褐化和轻度褐化率合计为43.94%，中度及以上褐化率为56.06%；而种子外植体的褐化现象相对严重，无褐化和轻度褐化率合计

5、为33.67%，中度及以上褐化率为66.33%，比茎尖外植体高出10.27%。 2.2不同培养温度对外植体褐化的影响 由表2可以看出，当温度为25时，中度及以上褐化率最低，为55.49%；22、28时，中度及以上褐化率分别为57.50%、62.88%，可见温度对银叶杜鹃褐化的影响较大。根据试验结果表明，银叶杜鹃组织培养的温度以25为宜。 2.3不同hgcl2浓度对外植体褐化的影响 在植物组织培养过程中，抗褐化剂均能不同程度地抑制外植体的褐化，其中在培养基中添加活性炭对外植体褐化的抑制起到了良好作用，不同浓度的活性炭对外植体褐化影响不同。 试验结果表明：随着在培养基中添加的hgcl2浓度的升高，其褐变率增大，特别是中度以上褐变率。添加浓度为1.5g/l比添加0.5g/l的活性炭中度以上褐变率高出14.51%。因此，在培养基中添加0.5g/l的活性炭对银叶杜鹃褐化抑制能起到较好的作用。 3讨论 本研究结果表明，在银叶杜鹃的组织培养过程中，培养物的褐化现象不能完全控制和消除，影响褐变的因素较多。但采用综合措施在培养基中添加抗褐化剂以及调控培养条件，能更有效地降低培养物的褐化率和褐化程度。本试验证实，选