ELISA法检测HBV血清标志物影响因素分析

1、elisa法检测hbv血清标志物影响因素分析【摘 要】 目的：探讨在日常检验工作时，人工操作过程中存在哪些因素会对酶联免疫吸附实验（ elisa） 检测乙肝病毒（hbv）血清标志物有影响。方法：选取我院门诊、住院或体检人员血液样本中hbsag为阳性的患者45例作为研究对象，并随机分为三组，分别从洗板次数、反应温度、以及延时比色时间等三个方面来综合分析其对结果的影响。结果：随着洗板次数的增加，样本的吸光度值反而降低（ p0.05） ， 且其组间差异有统计学意义； 当反应温度在25 时其样本的吸光度值则低于37时样本的吸光度（ p0.05） ，差异有统计学意义；随着延时比色时间的延长，样本的吸光度

2、值也会随之下降（p hbeag.hbeab以及hbcab,即表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体以及核心抗体。酶联免疫吸附实验，即elisa法，因其特异性强、灵敏度高、操作方便等优点被广泛运用于临床实验中1 。然而，在临床工作中却经常会出现患者临床表现和实验室结果相矛盾的地方，或者不同医院在相近的时间点上对同一个患者的检测结果出现误差，这些都是因为各种影响因素的存在，使得 elisafe检测结果的可靠性得不到保证。因此，怎样避免这些影响因素，确保实验结果的准确性显得至关重要。本研究针对酶联免疫吸附实验操作过程中易于出现的三种影响因素进行分析，观察其对样本的最终检测结果的影响，为各实验室建立起自己

3、的标准化操作程序确保实验结果的准确性提供参考依据2 。1 资料与方法1.1 一般资料病例来自2015年3月2015年4月我院门诊、住院或 体检人员血液样本查hbv血清标志物中hbsa以阳性的患者45 例，并随机分为三个实验组。患者年龄范围控制在 25-60 岁，患者的年龄、性别等一般资料间差异无统计学意义（ p0.05） 。1.2 纳入标准本次研究已上报院伦理委员会批准，本次实验的研究对象需符合下述条件：患者均需自愿参加本研究，且已签署 知情同意书；患者年龄需控制在25-60岁。1.3 排除标准以下情况的患者需排除：排除有严重肝肾疾病的患者；排除处在妊娠和哺乳期的女性。1.4 研究方法1.4.

4、1 洗板次数随机选取15份hbsag阳性的样本制作成混合样本，将其加入反应板中，共10 孔；再将质控品加入同一块反应板中，亦做 10 孔，设置好反应条件，在保证其他操作步骤相一致的情况下，设定洗板次数分别为 4 次、 5 次和 6 次，分别测定各个孔的吸光度值。1.4.2 反应温度再次随机选取15份hbsag阳性的样本制作成混合样本，将其加入反应板中，共做10 孔；在同一块反应板中再加入10 孔质控品，设置好反应条件，设定其他操作步骤相一致，将反应温度分别调为25 和37 ，测定各个孔中的吸光度值。1.4.3 延时比色与上述操作步骤相同，将15份hbsag阳性标本制成的混合血清样本与质控品一起

5、加入同一块反应板中， 分别做 10孔， 其他操作步骤均保持一致， 分别于加入终止液后的 0、 4 、8、 12 、 16 和 20 分钟时，测定各个孔中的吸光度值。1.5 统计学分析所有数据均采用spss17.豌计学软件处理，计数资料采用x 2检验，计量资料采用t检验，组间均值比较使用 f检验，以p0.05表示有统计学差异。2 结果2.1 洗板次数对样本吸光度值的影响随着洗板次数的增加，质控品和混合样本的吸光度值均降低，且其组间差异有统计学意义（p0.05） ，见表1 。2.2 反应温度对样本吸光度值的影响反应温度设定为25 和37 ，质控品和混合样本的吸光度值亦有变化，且其组间差异有统计学意

6、义（p0.05） ，见表 2。2.3 延时比色对样本吸光度值的影响延时比色的时长分别设定为 0、 4、 8、 12 、 16 和 20 分钟，随着时间的延长质控品和混合样本的吸光度值均降低，且其组间差异有统计学意义（ p0.05） ，见表 3 。3 讨论酶联免疫吸附实验（elisa常用的方法包括夹心法、竟争法和间接法等 3 。具有特异性强和灵敏度高等特点，但因其操作步骤多而易于受到其它因素的影响。由上述结果可以看由，随着洗板次数的增加，质控品和混合样本中hbsag的吸光度均下降，其组间差异的p 值0.05 ，有统计学意义。其次， 酶反应的最适温度是37 ，表 2 的结果正好反应了这一点，质控品

7、和混合样本中hbsag的吸光度在25c条件下明显低于其在37反应条件下的结果，各组间差异的p 值 0.05 ，有统计学意义。最后，随着比色时间的延长，质控品和混合样本中hbsag的吸光度呈下降趋势，虽然差异不大，但经过方差分析计算其p 值 0.05， 各组整体均数间的差异有统计学意义。影响elisafe检测乙肝病毒（hbv）血清标志物的因素非常多，还包括试剂盒质量以及标本本身内源或外源物质的干扰等因素4 。本次研究提醒我们，在临床实际工作当中，检验人员要严格遵照实验室制定的标准化操作程序，减少外在因素对实验结果的影响，提高实验结果的可靠性和稳定性5。参考文献1 丁文， 薛庆欢， 吴文金， 等 . 人为操作因素对酶联免疫吸附法检测乙肝病毒血清标志物影响的探讨 j. 中国实验诊断学 . 2010 ， 14 （7） ：1019-1022.2彭静，孙自铺，殷波涛，等.elisa法检测乙肝标志物影响因素的探讨j. 华中医学杂志， 2006 ， 30 （ 1） ：12-14.3 王兰兰， 吴健民， 主编 . 临床免疫学与检验m. 第4 版. 北京： 人民卫生出版社， 2007：103-105.4许斌，