CD44v3和CD44v5在口腔黏液表皮样癌中的表达及临床意义

1、cd44v3和cd44v5在口腔黏液表皮样癌中的表达及临床意义摘要目的：通过检测细胞表面黏附分子cd44v3和cd44v5在口 腔黏液表皮样癌（ oral mucoepidermoid carcinoma, omc）中的表达，探讨二者与omc的发生、病理分级和临床分期的关系。方法：利用免疫组织化学方法检测40例omc石蜡标本中 cd44v3和cd44v5蛋白表达，并且分组进行统计学分析。结果：cd44v3和cd44v5在omc中表达率与正常对照组相比有显著升高（ p0.05） 。 结论：在 omc的淋巴结转移中，cd44v3和cd44v5可能起着重要作用，cd44v3、cd44v5可能成为了解

2、omc病变发生发展生物学行 为及淋巴结转移重要的生物学指标之一。关键词口腔黏液表皮样癌；cd44v3; cd44v5;免疫组 化中图分类号r739.85 文献标志码a 文章编号1008-6455 （2015） 04-0032-03expression and clinical significance of cd44v3 and cd44v5 in oral mucoepidermoid carcinomama zuo1 ， hu shan-shan2，zhou yang1，sun hao-liang1，li hui1， li qiao-ling1( 1.department of stoma

3、tology ， 2.department ofophthalmology ， red flag hospital， mudanjiang medicaluniversity ， mudanjiang 157011 ， heilongjiang ， china） abstract ： objective to detect the expression of the cellsurface adhesion molecule cd44v3 and cd44v5 in oral mucoepidermoid carcinoma （ omc） ， and to explore the relati

4、onship between the two and the occurrence ， pathological grade and clinical stage of omc. methods immunohistochemical staining was used to detect the exprssion of cd44v3 and cd44v5 protein in 40 cases of omc in paraffin embedded specimens ， and were statistically analyzed. results cd44v3 and cd44v5

5、expression rates in omc compared with the control group was significantly higher （ p0.05） . conclusion omc in the lymph node metastasis ， cd44v3 and cd44v5 may play an important role ， cd44v3， cd44v5 may be one of the important indexesto understand the transfer of omc lesion development and the biol

6、ogical behavior of lymph node.key words： oralmucoepidermoid carcinoma ； cd44v3； cd44v5； immunohistochemistry口腔黏液表皮样癌（ oral mucoepidermoid carcinoma ， omc）是临床十分常见的口腔恶性肿瘤之一1,临床研究表明其细胞学行为与肿瘤的生物学行为高度相似。临床上将这一类广泛分布的细胞表面黏附分子均称为cd44,由于cd44亚型是拼接有外显子的变异亚型码，因此研究人员将cd44家族中含有变异型外显子 v3 和 v5 编码序列的 cd44 分子依次命名为cd4

7、4v3和cd44v5,且其多在上皮源性或肿瘤细胞中表达，故临床报道较多，报道多集中讨论于其与胆囊癌、肾癌、非小细胞肺癌、肠癌以及口腔鳞状细胞癌等癌症的相关性2-3。通过以cd44v为关键词搜索国内外相关文献，发 现其中关于cd44v3和cd44v5与口腔黏液表皮样癌的报道十 分罕见，但相关学者的研究表明cd44v3和cd44v5对口腔黏液表皮样癌的诊断和治疗具有一定的临床价值4 。 故本课题应用免疫组织化学方法对cd44v3和cd44v5在omc中的表达进行检测，并探讨两者表达的临床意义。1 材料和方法1.1 材料选取 2009 年-2014 年在牡丹江医学院附属红旗医院治疗的40例口腔黏液表

8、皮样癌患者为研究对象，纳入标准： 均经病理切片确诊；病理科均有带有癌旁组织的原发口腔 黏液表皮样癌蜡块存档；所有患者均仅实施手术治疗； 所有患者均未于术前接受放疗等辅助性治疗措施。 其中男 26 例，女14例；年龄2879岁，平均年龄（456）岁。依 据 2005 年世界卫生组织制定的有关口腔黏液表皮样癌病理分级标准对所有患者进行病理分级。 同时， 选取同时期的 10 例正常涎腺组织作为对照组。1.2 试验方法1.2.1 试剂：本研究以免疫组织化学方法检测样本组织中的cd44v3及cd44v5表达，检测所需的 cd44v3抗体、cd44v5抗体、免疫组化试剂盒均购自福州博尔生物技术开发 公司。

9、1.2.2免疫组化染色：采用二甲苯进行蜡切片脱蜡，并以梯度酒精充分脱去样本中的水分，充分脱水后采用清水及封闭液冲洗10min ， 并采用柠檬酸高压修复样本，持续2min ;以pbs缓冲液冲洗样本3min ,并反复冲洗3 次，冲洗后于每份样本中加入50以l 一抗，并将处理的样本置于4 c试验箱恒温过夜；将样本取由，并用pbs缓冲液持续冲洗 5min ， 并连续冲洗3次， 冲洗完成仔细吸除样本表面残留的pbs缓冲液，并在每份样本中滴加 50“放大剂（鼠 或兔），室温孵育10min;用pbs缓冲液持续冲洗样本 3min , 并连续冲洗3 次，冲洗完成仔细吸除样本表面残留的pbs，并在每份样本中滴加

10、50以l多聚酶结合物，于室温下持续孵 育10min;用pbs缓冲液持续冲洗样本 3min ,并连续冲洗 3次，冲洗完成仔细吸除样本表面残留的pbs缓冲液，并在每份样本中滴加50以l新鲜配制的dab溶液，并将样本置于 显微镜下仔细观察 35min,用自来水反复冲洗样本后，用 苏木素对样本进行复染，采用 0.1% hcl分化样本，并用氨水 将样本返蓝；采用梯度酒精充分脱去样本中的水分并干燥 后，采用透明二甲苯中性树胶将样本封固。1.3 结果判定标准本研究采用双盲法进行结果判定，所有样本均由两名病理学专业人员对样本进行阅片和计数。阳性样本特征：cd44v3及cd44v5蛋白均为棕黄色，且因具有定位于

11、细胞膜表面的特性，故多以连续的棕黄色线状或者带状分布于阳性细胞周围 5。阅片人员随即选取10 个高倍视野进行观察，当细胞膜表面出现完整的色板时则视为阳性样本，仔细分辨并记录该视野下阳性细胞所占细胞总数的百分数（ %） 。 样本阳性诊断标准：膜染色较间质背景染色深，细胞染色数 量a 5%即为阳性。采用半定量积分法进行结果判断，阅片人员应以染色较好的 10 个高倍视野进行评分， 评分标准如下：计数着色细胞比例，1/3以下为1分，1/32/3为2分，2/3 以上为3分；计数着色程度，无着色为。分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；将同一样本的上述两 种计分结果相乘，a.0分则为阴性（-）;b

12、. 14分则为弱阳 性（ +）； c.4 分则为强阳性（+）。1.4 统计分析所得数据采用spss13.豌计软件，计数用x 2检验或校 正x 2检验或fisher精确检当以及 spearman等分析，当 p0.05）; omc分化程度依次为高、中、低的患者中，cd44v5 阳性率依次为45.5%、 69.2%、 87.5%， 由表 1 可看出， cd44v3在高、中、低分化中 omc 的表达随着分化程度越低其阳性率上升，故随着 omc分化程度增高，cd44v5表达率依次下 降，但其表达与 omc分化程度无明显关系。cd44v5在高、中、低分化中omc的表达阳性率分别为 45.5%、69.2%、

13、87.5%, 且两者间未呈正相关性（p0.05） ，详细数据请见表1 。2.2 omc患者中cd44v3、cd44v5表达的相关性分析在28例cd44v3阳性表达 omc标本中，有26例样本同 时为cd44v5阳性表达，约占样本总数的92.8%;在15例cd44v3阴性omc标本中，有11例样本同时为 cd44v5阴性 表达，约占样本总数的 73.3%； sperman 分析结果表明两者之间呈正相关（r=0.724， p0.01） ，详细数据请见表2。2.3 omc淋巴结转移与 cd44v3、cd44v5表达相关性分析由表3可知，伴有淋巴结转移的 omc样本中cd44v3及cd44v5 阳性表

14、达率依次为72.4%、 79.3%，均明显高于无淋巴结转移样本中的 18.1%（ p0.05） 、 18.1%（p0.05） 。本研究通过对我院 40 例 omc 患者样本分析表明， omc不同病理分级患者间以及 omc 淋巴转移患者以及为转移患者问cd44v3和cd44v5的表达率均具有统计学差异（ p参考文献1mchugh ch ， roberts db， el-naggar ak， et al.prognostic factors in mucoepidermoid carcinoma of the salivary glandsj.cancer， 2011 ， 118： 3928-39

15、36.2 胡玉坤，张令达，后军，等.细胞黏附分子cd44s、cd44v5在口腔鳞癌中的表达及意义j.安徽医科大学学报，2012， 4（47） ： 438-441.3 郑军，邬丽苹，王天霆，等.mcl-1 在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义j.中国美容医学，2014,23 （15）:1257-1260.4makrydimasg ， zagorianakou n， zagorianakou p， et al. cd44 family and gynaecological cancerj.in vivo ， 2003 ， 17（ 6） ： 633-640.5jonsson pf， bates pa.global topological featuresofcancer proteins inthehuman interactomej.bioinformatics ， 2006， 22（18） ： 2291-2297.6李薇薇，张一鸣.cd44及其配体ha在瘫痕及胎儿皮肤成纤维细胞中表达的比较研究j.中国美容医学，2003,12（ 4 ） ： 346-348.7刘偌颉，谭文华，胡雪芬.ki-67和cd44v5在卵巢癌中 的表达和临床意义j.中国优生与遗传杂志，2007, 15 （4）: 36-37.8王茜，潘朝斌，王建广，等.cd44v3及c