I型超敏反应实验设计PPT学习教案

1、会计学1I型超敏反应实验设计型超敏反应实验设计第1页/共19页 IgE的产生依赖于细胞因子IL-4，Th2细胞受变应原刺激活化分泌IL-4等细胞因子,可诱导变应原特异性B细胞增殖、分化成浆细胞，通过调节Ig类别转换等机制产生特异性IgE抗体。 IL-12可刺激NK细胞分泌IFN-，并诱导Th0向Th1细胞方向分化，抑制向Th2细胞分化，减少Th2细胞以及其生成的IL-4。同时，IFN-还具有抑制B细胞合成IgE的潜在活性。从而可以达到下调IgE的效果。 IFN-是Th1的特征性细胞因子，IL-4是Th2的特征性细胞因子。利用酶联免疫吸附法（ELISA)检测致敏大鼠脾淋巴细胞分泌IFN-、IL-

2、4的表达水平,以及血浆中IgE的水平。即可验证IL-12对Th2型免疫应答向Th1型转换，下调IgE的作用。第2页/共19页IL-12刺激Th2向Th1转化，下调IgE第3页/共19页实验原理实验原理第4页/共19页n仪器:心机。3Al(OH)第5页/共19页第6页/共19页ps：模型组和实验组均是用鸡卵白蛋白与氢氧化铝悬液的混合液致敏和诱发，制成的型超敏反应动物模型。分组分组第7页/共19页药物的制备药物的制备稀释稀释比比1:1:1001001:1:2002001:1:4004001:1:8008001:1:160016001:1:320032001:1:640064001:1:128001

3、28001:1:25600256001:1:5120051200浓度ug/ml16168 84 42 21 10.50.50.250.250.1250.1250.06250.06250.031250.03125第8页/共19页药药物注射物注射正常组模型组和实验组鸡卵清蛋白IL-1250L第9页/共19页外周血采集及IL-4、IFN-、IgE的测定（ELISA）2、ELISA 检测血浆中IL-4、IFN-和IgE的滴度第10页/共19页1、包被抗体：抗体（抗鼠IgE抗体）用包被液稀释好后100l/孔加样，37孵育1或者4过夜，之后用超纯水洗三遍，在干燥的吸水纸上拍除多余的水分。2、封闭：加1%的

4、脱脂奶粉，200l/孔，37放置1或者4过夜，之后甩干，不洗，此时的抗体板子可以直接使用。3、加抗原IgE：每孔加100l需要检测的IgE于已经封闭好的酶标板，小心吹除气泡，37孵育1或者4过夜，之后用PBS洗三遍，在干燥的吸水纸上拍除多余的水分。4、加酶标抗体：酶标抗体50l/孔加于酶标板，37放置1，之后用PBS洗三遍，必要时要进行适当的浸泡，在干燥的吸水纸上拍除多余的水分。5、显色：显色底物加于酶标板，100l/孔，37孵育15min后用1滴的硫酸终止显色反应。6.重复ELISA实验，检测小鼠血清中IFN-和IL-4的浓度变化7.数据分析，用酶标分析仪读出血清中IgE、IFN-和IL-4的效价ELISA(ELISA(以以IgEIgE为为例例) )第11页/共19页特定浓度的IL-12对下调IgE效果最明显IL-4变化趋势与IgE相同,IFN-相反第12页/共19页一、预期外的结果IL-12IL-12浓度过低浓度过低IL-12IL-12浓度过高浓度过高第13页/共19页