实验2、沉淀反应

1、实验二实验二 沉淀反应沉淀反应 定义：定义： 可溶性Ag + 相应Ab 形成肉眼 可见的沉淀物质 （Ag-Ab复合物） 实验内容实验内容 对流免疫电泳对流免疫电泳 双向琼脂扩散试验双向琼脂扩散试验试剂和器材 对流实验：对流实验： 对流Ag、Ab（抗白蛋白）、pH8.6的巴比妥缓冲液、 1.2%的琼脂、电泳仪、电泳槽、加样器 双扩实验：双扩实验： 标本1、标本2、阳性对照、阴性对照、Ab （抗白蛋白）、 1.2%的琼脂、湿盒、37度温箱等 对流免疫电泳 原理原理： 利用利用电场电场的作用的作用加强加强和和加快加快双向扩散双向扩散的一种的一种方法。方法。 在pH8.6的碱性缓冲液琼脂中进行电泳，带

2、有较多负电荷的Ag泳向阳极，而Ab球蛋白等电点偏高（约为67），在pH8.6时带负电荷较少，加上分子量较大，泳动慢，受电渗（指电场中液体对固体支持物的相对移动）干扰后向阴极倒退，这样抗原抗体作相对运动，在较短时间内即可相遇，在孔间两者分子比例合适的地方形成沉淀线。 意义：意义： 对流免疫电泳主要用于检测标本中的抗原如抗原如AFP、HBsAg等。本法较双向琼脂扩散时间大为缩短（一般只需30分钟到1小时），且灵敏度比双扩高约数十倍。 实验实验方法方法（1）制板）制板：吸取融化的热琼脂：吸取融化的热琼脂4ml，均匀加在平坦的载玻片上，待，均匀加在平坦的载玻片上，待 冷却后再移动。冷却后再移动。（2）

3、打孔）打孔：孔径：孔径3mm，孔间距，孔间距5mm（3）加样）加样 （10ul）： 1. Ag 2.Ab（4）电泳）电泳: 稳压稳压100V, 30min。（5）结果观察：在）结果观察：在Ag和和Ab之间出现一条白色沉淀线。之间出现一条白色沉淀线。+1结果判断结果判断 1. 有沉淀线：+ 无沉淀线：- 2. 沉淀线的位置与Ag、Ab分子电荷情况有关，也与 Ag、Ab比例有关。 3. 特点： 优：操作简便，观察结果快，敏感度比双扩高8-16倍。 缺：分辨率差，当有多种Ag、Ab 系统存在时，形成 的沉淀线位置易重叠，难以分辨，所以用此目的 时，不如双扩。 双向琼脂扩散试验双向琼脂扩散试验 原理：

4、原理： 定性试验定性试验。将可溶性抗原与相应抗体分别加入琼脂板上相对应的孔内，抗原抗体从孔内向四周扩散，在两者对应比例适宜处形成沉淀线。 意义意义：可用已知抗原（抗体）来检测未知的抗体（抗原），同时检测抗原抗体的纯度。临床上常用来检测甲胎蛋白（AFP），作为原发性肝癌等的辅助诊断。实验方法实验方法（1）制板）制板：4ml/块块 （2）打孔）打孔：孔径：孔径3mm，孔间距，孔间距5mm。 （3）加样）加样 （各（各10ul）： ：标本：标本1 ：标本：标本2 ：阳性对照阳性对照 ：Ab （4）扩散）扩散：置湿盒置湿盒37C、24小时观察结果小时观察结果。231123结果判断结果判断 1.在阳性对照孔与中间的抗体孔之间出现一条或多条白色沉淀线（一对抗原抗体系统即可出现一条沉淀线，如有多对抗原抗体可出现多条沉淀线）。 2.观察标本孔与中间的抗体孔之间有无出现沉淀线，有即为阳性，无即为阴性。注注 意意 事事 项项 1、浇琼脂板时注意动作要迅速，琼脂不要溢出玻、浇琼脂板时注意动作要迅速，琼脂不要溢出玻 片，成品琼脂板平整无气泡，片，成品琼脂板平整无气泡，打孔时，不