UltrasensitivehGH

1、BECKMAN COULTER超敏人生长激素检测步骤用ACCESS ?免疫分析系统对人血清或血浆中的人生长激素进行定量测定内容表检测原理2标本采集2试剂和必须品3定标5质量控制5步骤5检测结果6开始检测6检测注意事项6参考文献8Beckman Coulter, I nc. ? Fullerto n, CA 92834原理 检测原理Access超敏人生长激素分析是同步一步法酶免分析。样品和酶结合物，即标记了碱性磷酸酶的羊抗人生长激 素多抗以及包被了小鼠抗人生长激素单抗的磁性颗粒被一起加入反应管，血清或肝素抗凝血浆中的人生长激 素与固相上的抗人生长激素单抗结合，同时酶结合物与血清或血浆中的人生长激

2、素的不同抗原位点相结合。 而后，反应管被传送到磁性分离区域进行多次冲洗，去处未和固相结合的其它成分。最后在反应管中加入化 学发光底物（Lumi-Phos* 530）,已与固相结合的碱性磷酸酶会使该底物发岀光子并被光电比色计所检测。最后，对照仪器中储存的多点定标曲线中所描述的光量子与标准品的对应关系而计算出样品中的人生长激素浓 度。概述 人生长激素（hGH, somatotropin ），种191个氨基酸的单链多肽类激素，由主要位于垂体前页侧环的生长 激素细胞合成、储存和分泌（1 ），循环中存在的大部分生长激素的分子量为22-KD的蛋白质，大约还有10%的形式是由垂体释放的20-KD的异质体，它

3、缺少氨基酸残基的3246位。血清中生长激素的浓度在24小时内由于情绪的突然发作或生长激素的节律性分泌以及明显的昼夜节律性和生长激素睡眠相关的变化而呈现明显的不同（2）。另外，许多环境因素和代谢因素，包括（但不局限于此）氮的摄入、锻炼、体育活动或运动强度、压力、创伤、年龄，通过影响生长激素的分泌和清除来影响血清中生 长激素存在的浓度。用传统的RIA或IRMA的免疫分析通常不能检测岀血清中基础生长激素，超敏生长激素检测提供的灵敏度最低达0.005 ng/mL，可以区分人群中原先不可检测的那些浓度（2）。超敏检测生长激素可用于评估生长激素轴的功能（2，3）。由于生长激素的低水平和节律性分泌，激发试验

4、最常用来评估生长激素缺乏与否（1）。激发试验包括用药物刺激来刺激垂体生长激素细胞分泌生长激素，胰岛素、可乐定、精氨酸、L-多巴、促生长激素释放激素和普奈洛尔都可用于刺激生长激素的释放，不出现生长激素的峰值提示是刺激无效的。生长激素升高的个体可通过抑制试验来确诊生长激素过量（指端肥大症）（4）。抑制实验可通过用葡萄糖来制造一个高血糖状态，进而测定生长激素水平的改变。高血糖状态不能抑制生长激素的分泌则提示为生长激 素过量。生长激素测定通常用于垂体前页疾病的诊断和治疗。标本米集A. 血清或肝素抗凝血浆是推荐的样品。B. 遵循国家临床实验室标准委员会推荐的以下标本处理、运行和储存步骤（19，10）:1

5、. 用真空采样管采集所有血液标本时须遵守常规注意事项。2. 离心前使标本完全自然形成凝块。3. 全程保证样品管的密闭状态。4. 离心获得血清后的两小时内，至少将500 l血清或血浆转移到一个密闭的储存试管中备用5. 储存样品，保持样品管完全密闭，在室温 （15到30 C）条件下不超过8小时。6. 如果8小时内不能完成检测即应将标本放入2到8 冰箱冷藏。7. 如果24小时内不能完成检测即应将标本放入-20 冰箱冻藏。C. 标本最多复融两次。试剂和必须品Beckma n Coulter, I nc.4300 S. Harbor Blvd.Fullert on, CA 92834A. R1: Acc

6、ess超敏人生长激素试剂盒Cat. No. 33580: 100个测试，2盒,50个测试/盒。现成可用，在2到10 C冰箱中顶端朝上存放，可一直保存到标签中注明的失效期。试剂盒必须在2到10C冰箱保存2小时后才能放入仪器中使用或保存。试剂盒被吸取使用后，在2到10C条件下可稳定28天，一旦发现有试剂盒上弹性体破裂或质控结果超岀范围等现象岀现即代表试剂盒失效。1. R1a:包被了羊抗小鼠IgG抗体的磁性颗粒，小鼠抗人生长激素混合物，小牛血清白蛋白（BSA ）， 0.1% 的叠氮钠和 0.1% ProClin* 300。2. R1b:羊抗人生长激素碱性磷酸酶（牛源性）酶结合物，小牛血清白蛋白（BS

7、A ），0.1%的叠氮钠和 0.1% ProClin* 300。3. R1c:蛋白缓冲液（牛源性、小鼠源性、羊源性 ），0.1%的叠氮钠和0.5% ProClin* 300 。B. Access超敏人生长激素定标液Cat. No. 33585: S0-S5, 2.0 mL/ 瓶定量检测的定标是用已知分析浓度的标本进行检测以观察光量子值。光量子值和已知浓度之间的数学关系就构成了定标曲线。定标曲线储存于仪器中，可将样本检测中得到的光量子值转化成特定的分析 浓度。提供的是冻干品，每瓶用 2.0ml蒸馏水复溶，静置 30分钟以充分溶解，使用前轻轻混匀。冻干品在210C环境可稳定到定标品瓶标签上标岀的失

8、效期。在210 C冰箱可保存2个月，只能复溶一次，质控结果落到允许的范围之外或定标品不能完全溶解是定标品失效的信号。定标操作步骤请参见 Access免疫分析系统的操作指南和参考手册。1. S0:以小牛血清白蛋白为基质的缓冲液，含0.1%的叠氮钠和0.5% ProClin* 300 ，冻干品。2. S1 -S5:以小牛血清白蛋白为基质的缓冲液，含0.1%的叠氮钠和0.5% ProClin* 300，人生长激素的浓度分别大概为0.1, 1.0, 10, 20, or 50 ng/mL （g/，冻干品。3. 定标卡：1张C. Access 底物货号为81906: 4 瓶x 130 ml/瓶。现成可用

9、，下表注明了储存条件和稳定性，底物本底检测值的增高提示底物的不稳定。Formatted per NCCLS Document GP2-A3Copyright 2001 Beckman Coulter, Inc.105462C前提储存稳定性未开瓶2 到 8C可一直保存到标签注明的 失效期使用前的平衡（未开瓶）15到30 C （室温条件）至少18小时最长14天使用中（已开瓶）内部底物支持位置最长5天使用中（已开瓶）外部液体架的底物位置最长14天R2底物：Lumi-Phos 530 （缓冲液中包含有 dioxetane Lumigen* PPD,荧光素和离子表面活性剂量）。按照Access仪器操作指

10、南中介绍的使用方法使用。D. Access 冲洗缓冲液货号：81907 4 x 1950 ml/ 箱现成可用。在室温条件下（15到30C）可稳定到包装上注明的失效期。底物本底检测值的增高或在“双 抗体夹心法中的0点定标品的相关发光值的增高则提示冲洗缓冲液的不稳定。R3冲洗缓冲液：Tris盐缓冲液，离子表面活性剂， 0.1 %的叠氮钠和0.1% ProClin 300。按照Access仪器操作指南中介绍的使用方法使用。E. Access样品稀释液 A货号：81908: 4 mL/ 瓶病人标本中的浓度可能超过定标品的S5点的值，如果此时需要定量结果须用稀释液稀释标本以得到准确的分析结果。现成可用，

11、在室温下静置10分钟，使用前轻轻混匀，避免产生气泡，在2 10 C可一直保存到瓶标签上标明的失效期。在可检测范围内，样品可被准确定量，如果病人标本中的浓度超过定标品的S5点的值，则按照 特殊检测之“操作注意事项”中注明的稀释方法对样品进行稀释，参见Access系统手册和/或系统帮助来了解如何在要求测试中输入稀释因子。Access样品稀释液 A:以BSA为缓冲基质的缓冲液，含离子表面活性剂， 0.1 %的叠氮钠和0.1%ProClin 300。F. Access免疫分析系统和消耗品G. 注意事项1. 只用于体外诊断。2. 病人样品和血制品应按照阐述的最底危险性的常规操作进行操作，将这些物品当作潜

12、在的传染物 品，按照常规操作注意点和优秀实验室的操作常规进行处理，无论该些物质是原型、处理物或得 到保证前。用合适的消毒剂进去污。按照各实验室规定和操作规程存放和处理该些物品及其容 as3. 试剂中所含的叠氮钠可以和铅和铜反应形成有高度腐蚀性的重氮金属盐，如果被溅到含该物质的液体，则可用大量水冲洗来防止重氮的堆积（7）。4. Xi.刺激物：0.5% ProCiin 300.R 43:皮肤接触后会引起致敏。S 28-37:皮肤接触后立即用大量的肥皂和水冲洗，可戴合适的手套来避免接触。5. 病人样品和血制品应按照阐述的最底危险性的常规操作进行操作，将这些物品当作潜在的传染物 品，按照常规操作注意点

13、和优秀实验室的操作常规进行处理，无论该些物质是原型、处理物或离 心前。用合适的消毒剂进去污。按照各实验室规定和操作规程存放和处理该些物品及其容器（8 ）。6. 底物暴露在空气中容易衰变，应保持瓶口紧盖，不要将不同瓶的底物相混后使用。7. 提供材料安全数据表（MSDS ）备索。定标对所有的测试来讲，有效的定标曲线是必须的。Access超敏人生长激素分析的定标曲线有效期为56天，参见Access系统手册和/或系统帮助来得到关于定标理论、设置定标品、定标要求的输入和定标曲线的回顾等 资料。提供的Access超敏人生长激素定标品包括6个浓度，0和大概0.1,1.0,10, 20 or 50 ng/mL

14、，溶解在以BSA为基质的缓冲液中。定标品由WHO的垂体激素人生长激素80/505加入到人血清中制备而得，定标曲线的有效期为56天。定标品须双份检测。质控 质控品与样品的性质类似，是监测免疫化学分析正常工作的必须品。因为样品可在有随机检测能力的仪器中随机检测而非批量检测，所以质控品应该包含在整个24小时的时间段内（9）。质控品包括 Access AFP三浓度质控品（货号：33219）或至少包括三各浓度值的其它可购得得商用质控品，按照厂家规定进行复溶和保存。在正式使用前每个实验室均应建立各自得平均值和可接受范围，质控结果没有落在可接收范围提示检验结果 无效。重新检查位于上一次有效质控值到这次无效质

15、控值之间所有得检测结果。参见系统手册和系统帮助来 了解如何回顾质控结果。操作步骤A. Access 仪器参见Access免疫分析系统的系统手册和系统帮助来准备和操作。B. 分析步骤1. 从主菜单进入测试要求屏幕。2. 对每个样品，设置一个样品架上的位置，输入样品信息和需检测的测试名称3. 将样品管（杯）放入样品架中已设定的位置。Formatted per NCCLS Document GP2-A3Copyright 2001 Beckman Coulter, Inc.105462C4. 按下运行键(Run )开始检测5. 仪器会提醒操作者运行所需的定标。8. 系统会自动计算检测结果检测结果A.

16、 病人的检测结果由仪器软件自动通过通过加权四参数曲线计算方式进行统计，样品中检测到的光量子值会与储存的标准曲线对应求得相应结果，病人检测结果可通过“样品结果菜单” (SampleResults screen )回顾，详情请参见Access系统手册和/或系统帮助，B. 参考值1. 每个实验室均应针对各种有代表性的特殊人群建立自己的参考范围。2. 用Access超敏人生长激素分析方法对当前健康的男性和女性的血清和血浆标本进行检测，得到 的各人群的人生长激素的浓度如下所述：参考人群例数平均年龄(岁)年龄范围平均检测结果(n g/mL)95%可信区间女性2324321 -730.8250.014 -5

17、.219男性2424118 -660.1660.004 -1.406开始检测A.关于安装介绍、开机、操作原理、系统主要特点、操作指导、定标步骤、操作限制和注意事项、危险 事项、保养和故障的排除等请参见操作指南和参考手册。B. 在装入仪器前，将试剂轻轻的颠倒混匀几次，不要颠倒已用试剂，通过轻轻旋转的方式混匀试剂。C. 每次测试使用25 I的样品，但要考虑到样品杯和样品管的死体积，各种容器的死体积大小请参见操作 手册中的的样品容器章节。D. 样品结果的报告单位为ng/ml，另外，系统也可按照国际单位4/L)报告结果。设置请参见系统手册和/或系统帮助的详细描述。手工进行单位换算时将ng/ml乘以1即

18、可得到国际单位。检测注意事项A.样品可在分析范围内被准确测定大概为0.003 -50 ng/mL ( /L)。?如果样品含量低于最低检测限，则报告结果为小于该最低检测限如 0.003 ng/mL ( g/L)。?如果样品含量超过Access超敏人生长激素的S5定标品上所标明的数值则报告结果为大于该值如 50 ng/mL ()/L)。或者用S0定标品或样品稀释液A按1: 1稀释后重新检测，以得到确切数值。参见Access系统手册和/或系统帮助来设置稀释系数，系统将自动进行稀释校正而直接报告最 终结果。B.人抗大鼠抗体(HAMA)可能会岀现在已接受大鼠源性单抗免疫药物治疗的病人体内(13，14)。

19、这个分析方法已通过特殊的方法来尽量减少这些抗体对该分析方法的影响。但是，在已知病人含有这些抗体 时须小心评估检测结果。Formatted per NCCLS Document GP2-A3105462CCopyright 2001 Beckman Coulter, Inc.C. Access 超敏生长激素测试的结果应结合病人所有的的临床表现来使用，包括临床病史、其它试验结 过和其它有用的信息。D. 样品中至多含有 20mg/dl 的胆红素和脂血标本中含有相当于 3000mg/dl 的甘油三脂、 溶血标本含有 最多 1000mg/dl 的血红蛋白外不影响生长激素检测的结果。另外，在标本中的内源性

20、白蛋白基础上加 入 6 g/dl 的人白蛋白也不影响检测结果。Access is a trademark of Beckman Coulter, Inc.*Lumi-Phos 530 and Lumigen are trademarks of Lumigen, Inc.*ProClin 300 is a trademark of Rohm and Haas Company, or its subsidiaries or affiliates.Formatted per NCCLS Document GP2-A3Copyright 2001 Beckman Coulter, Inc.105462

21、C参考文献Beckma n Coulter, I nc. Access Ultrase nsitive hGH product in sert, Fullert on, CA 92834, 105435.Beckman Coulter, Inc. Access Substrate product insert, Fullerton, CA 92834, 170279.Beckman Coulter, Inc. Access Wash Buffer product insert, Fullerton, CA 92834, 170278.1. Melmed S, Adashi EY, Rock J

22、A, Rose nwaks Z. (Eds) Reproductiveen docri no logy,surgery, andtechnology, Volume 1, Lippincott-Raven, Philadelphia, Pennsylvania, 1996, page 784-8002. Iranmanesh A, Grisso B, Veldhuis JD. Low basal and persistent pulsatile growth hormone secretion arerevealed in normal and hyposomatotropic men stu

23、died with a new ultrasensitivechemiluminesceneeassay. J Clin En docr inol Metab 1994; 78: 526-5353. Veldhuis JD. What have we learned so far from ultrasensitive growth hormone (GH) Assays? J Clin Chem 1996; 42: 1731-17324. Metz, Larson, Blue book of endocrinology, WB Saunders Co., 1985, page 88-915.

24、 Approved Stan dard Procedures for the collecti on of diag no stic blood specime ns by ven ipu ncture H3-A4. 1998. National Committee for Clinical Laboratory Standards, 4th edition.6. Approved Guideli ne- Procedures for the han dli ng and process ing of blood specime ns, H18-A2. 1999.National Committee for Clinica