临床微生物标本的正确采集与运送

1、临床微生物标本临床微生物标本正确采集与运送正确采集与运送正确的微生物标本采集和运送，是正确的微生物标本采集和运送，是准确的病原学诊断的前提！准确的病原学诊断的前提！3基本原则基本原则1.及时采集微生物标本作病原学检查及时采集微生物标本作病原学检查2.在抗菌药物使用前采集标本在抗菌药物使用前采集标本3.采样时严格执行无菌操作采样时严格执行无菌操作4.采样后立即送检采样后立即送检5.5.棉拭子标本宜用运送培养基棉拭子标本宜用运送培养基6.混有正常菌群污染标本，不可置肉汤培养混有正常菌群污染标本，不可置肉汤培养7.标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂。标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂。8.8.送

2、检标本应注明来源和检验目的送检标本应注明来源和检验目的4血培养标本血培养标本采集与运送采集与运送关于血培养关于血培养n怀疑有血液感染时，抽取血培养的次数应是怀疑有血液感染时，抽取血培养的次数应是A 1次次B 至少至少2次次 C 4次次D 越多越好越多越好n如果血培养标本不能及时运送，应暂存何种环境如果血培养标本不能及时运送，应暂存何种环境A 4 B 18 C 室温室温 D 无所谓无所谓 n败血症的血液细菌培养出现阳性结果最快时间是败血症的血液细菌培养出现阳性结果最快时间是A 100/ml 6你认为对吗？你认为对吗？为了提高病人血培养的阳性率，最为了提高病人血培养的阳性率，最好的抽血时间是：好的

3、抽血时间是：nA.发热开始时发热开始时 B.寒战开始时寒战开始时 C.发热最高峰时发热最高峰时 D.寒战结束时寒战结束时 E.预计寒战发热前预计寒战发热前 2021-7-10Dr.HU Bijie7血培养的数量血培养的数量v研究结果研究结果一套血培养的阳性率为一套血培养的阳性率为65二套血培养的阳性率为二套血培养的阳性率为80三套血培养的阳性率为三套血培养的阳性率为96vCLSI(药敏试验标准）建议方针药敏试验标准）建议方针对于每位需要血培养的患者需采取对于每位需要血培养的患者需采取2至至3套。套。对于成年患者的血培养，只采对于成年患者的血培养，只采单一的血培养是不允许的单一的血培养是不允许的

4、。因为单一血培养的结果的临床意义很难解释。因为单一血培养的结果的临床意义很难解释。采血培养后的采血培养后的2至至5天内，不需要重复采血培养，因为治天内，不需要重复采血培养，因为治疗后的疗后的2至至5天内血液中的感染细菌不会马上消失。天内血液中的感染细菌不会马上消失。CLSI指南：指南：血培养的原则和流程血培养的原则和流程血培养的采血量血培养的采血量n对于成年患者，每套血培养瓶推荐的采血对于成年患者，每套血培养瓶推荐的采血量为量为20至至30mln对于婴幼儿患者，采血量不超过患者总血对于婴幼儿患者，采血量不超过患者总血量的量的1血培养中需氧瓶与厌氧瓶的分配血培养中需氧瓶与厌氧瓶的分配n对于常规的

5、血培养，建议采取包括需氧和对于常规的血培养，建议采取包括需氧和厌氧的一套血培养瓶厌氧的一套血培养瓶n当采血量不能满足推荐的采血量时，首先当采血量不能满足推荐的采血量时，首先应进行需氧瓶的培养应进行需氧瓶的培养皮肤消毒与污染防治皮肤消毒与污染防治n碘酊、次氯酸和洗必泰的消毒效果要好于碘酊、次氯酸和洗必泰的消毒效果要好于碘酒碘酒n碘酊和洗必太的消毒效果大致相当碘酊和洗必太的消毒效果大致相当n消毒次序消毒次序n消毒皮肤范围消毒皮肤范围标本的运送标本的运送n血培养瓶在采血接种后必须马上送检血培养瓶在采血接种后必须马上送检n血培养瓶在采血接种后在室温中不得超过血培养瓶在采血接种后在室温中不得超过数小时数

6、小时n血培养瓶不得在采血接种后放入冰箱或冷血培养瓶不得在采血接种后放入冰箱或冷冻冻2021-7-10Dr.HU Bijie12添加剂添加剂（树脂、活性炭、抗凝剂）（树脂、活性炭、抗凝剂）n和无添加剂的血培养瓶相比，拥有添加剂和无添加剂的血培养瓶相比，拥有添加剂的血培养瓶的阳性率更高的血培养瓶的阳性率更高n含有添加剂的血培养瓶的阳性率更高，但含有添加剂的血培养瓶的阳性率更高，但同时污染菌的生长也会更迅速同时污染菌的生长也会更迅速2021-7-10Dr.HU Bijie13常见问题常见问题n厌氧菌厌氧菌培养有价值吗？培养有价值吗？n真菌真菌培养需要另开单子吗？培养需要另开单子吗？n分枝杆菌分枝杆菌

7、培养有专门的培养瓶吗？培养有专门的培养瓶吗？n骨髓培养能增加阳性率吗？骨髓培养能增加阳性率吗？n开始治疗后，间隔多少长时间复查？开始治疗后，间隔多少长时间复查？真菌血培养真菌血培养n有三种自动化的血培养系统可以进行真菌有三种自动化的血培养系统可以进行真菌血培养血培养n真菌血培养最好在需氧瓶进行真菌血培养最好在需氧瓶进行n能够中和能够中和灭活抗生素的血培养瓶可以提高灭活抗生素的血培养瓶可以提高真菌的检出率真菌的检出率婴幼儿的血培养婴幼儿的血培养n不必像成年患者一样采取不必像成年患者一样采取2至至3套血培养瓶套血培养瓶n一些研究建议只采取一瓶需氧瓶进行培养一些研究建议只采取一瓶需氧瓶进行培养n对于

8、婴幼儿患者，采血量不超过患者总血量的对于婴幼儿患者，采血量不超过患者总血量的1特别注意：感染性心内膜炎特别注意：感染性心内膜炎u抽取血培养的时机抽取血培养的时机nABEABE：必须在根据经验使用抗生素前：必须在根据经验使用抗生素前3030分钟之内抽取血培养分钟之内抽取血培养nSBESBE：(1)(1)在在30min-1h30min-1h之内连续抽取数套血培养之内连续抽取数套血培养;(2);(2)皮肤消毒皮肤消毒尤为重要，因为其主要的病原菌为皮肤定植菌如凝固酶阴性尤为重要，因为其主要的病原菌为皮肤定植菌如凝固酶阴性的葡萄球菌。必须取自外周静脉而非留置的静脉装置的葡萄球菌。必须取自外周静脉而非留置

9、的静脉装置, ,否则会否则会判有很高的污染风险从而导致错误的心内膜炎结论；判有很高的污染风险从而导致错误的心内膜炎结论；u抽取血培养的数量抽取血培养的数量n最佳的血培养数量不确定，但只抽单瓶血培养是不够的最佳的血培养数量不确定，但只抽单瓶血培养是不够的n多套血培养可以帮助区别血培养假阳性（如皮肤污染等）多套血培养可以帮助区别血培养假阳性（如皮肤污染等）n建议：起始采集建议：起始采集3 3套血培养，如套血培养，如2424小时内仍报告阴性，则继续小时内仍报告阴性，则继续采集采集2 2套血培养，全部培养为套血培养，全部培养为5 5套。套。2021-7-10Dr.HU Bijie17痰培养标本痰培养标

10、本采集与运送采集与运送2021-7-1018病原体种类繁多而复杂病原体种类繁多而复杂使下呼吸道感染病原诊断成为难题使下呼吸道感染病原诊断成为难题细菌（包括放线菌与奴卡菌，厌氧菌与分枝杆菌）细菌（包括放线菌与奴卡菌，厌氧菌与分枝杆菌）真菌（包括肺孢子菌）真菌（包括肺孢子菌）病毒病毒支原体、衣原体与立克次体支原体、衣原体与立克次体原虫原虫寄生虫寄生虫2021-7-10Dr.HU Bijie19我国痰细菌培养现状我国痰细菌培养现状n标本送检率低标本送检率低n培养菌检出率极低培养菌检出率极低n结果重复性差结果重复性差n报告速度慢报告速度慢n感染菌与污染菌不易区分感染菌与污染菌不易区分n药敏结果与治疗反

11、应存在差距药敏结果与治疗反应存在差距2021-7-10Dr.HU Bijie20关于咳痰标本关于咳痰标本n在抗生素应用前采集痰标本在抗生素应用前采集痰标本;n标本采集后标本采集后12h内必须立即进行实验室处理；内必须立即进行实验室处理；n咳痰标本应用最早且广泛，但也是最受争议的标本咳痰标本应用最早且广泛，但也是最受争议的标本 ;n取标本前应摘去牙托，清洁口腔如刷牙和漱口取标本前应摘去牙托，清洁口腔如刷牙和漱口;n深咳，采集标本过程中要有专业的医务人员指导深咳，采集标本过程中要有专业的医务人员指导;n无痰可用无痰可用35NaCl 5ml雾吸约雾吸约5min导痰；导痰；n也可用物理疗法、体位引流、

12、鼻导管抽吸等法取痰；也可用物理疗法、体位引流、鼻导管抽吸等法取痰；n对于细菌性肺炎，对于细菌性肺炎，痰标本送检每天痰标本送检每天1次，连续次，连续23天天。不。不建议建议24h内多次采集，除非痰液外观性状出现改变；内多次采集，除非痰液外观性状出现改变；n怀疑分枝杆菌感染者，应连续收集怀疑分枝杆菌感染者，应连续收集3天清晨痰液送检天清晨痰液送检2021-7-10Dr.HU Bijie21n标本采集方法标本采集方法医师或护士直视下采集标本医师或护士直视下采集标本病人先漱口，去除表面的菌群病人先漱口，去除表面的菌群教育病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液教育病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液n临床上约

13、半数咳痰标本不合格！临床上约半数咳痰标本不合格！咳痰标本咳痰标本2021-7-10Dr.HU Bijie22咳痰标本不合格，你退检吗？咳痰标本不合格，你退检吗？n如果低倍视野下鳞状上皮细胞大于如果低倍视野下鳞状上皮细胞大于1010个，个，应不做或仅在特殊要求时做培养。应不做或仅在特殊要求时做培养。n如做培养，报告中注明如做培养，报告中注明“镜检结果表明标镜检结果表明标本口咽分泌物污染明显本口咽分泌物污染明显”。n复旦大学中山医院的做法复旦大学中山医院的做法痰液外观：脓性，粘脓，粘液，水样痰液外观：脓性，粘脓，粘液，水样.镜检：镜检：WBC？，？，SEC？痰标本质量评价：合格，不理想（建议重送）

14、痰标本质量评价：合格，不理想（建议重送）2021-7-10Dr.HU Bijie23哪些实验室因素，影响检验结果哪些实验室因素，影响检验结果n痰标本的洗涤与匀化痰标本的洗涤与匀化n质量评估（细胞学筛选）质量评估（细胞学筛选）n接种平板：质量，血、巧克力、麦康凯，选择性接种平板：质量，血、巧克力、麦康凯，选择性n培养环境：培养环境：CO2CO2n培养时间：培养时间：24h24h，48h48hn菌落观察水平菌落观察水平n结果报告形式：所有菌种结果报告形式：所有菌种/ /群（群（? ?），半定量），半定量2021-7-10Dr.HU Bijie24几种下呼吸道直接采集的标本几种下呼吸道直接采集的标本

15、n经气管穿刺吸引经气管穿刺吸引transtracheal aspiration,TTA n经胸壁针刺吸引经胸壁针刺吸引transthoracic needle aspiration, TNA n经支气管镜采样经支气管镜采样 支气管肺泡灌洗支气管肺泡灌洗bronchoalveolar lavage, BAL经支气管镜直接吸引经支气管镜直接吸引防污染样本毛刷防污染样本毛刷protective specimen brush, PSBn开胸肺活检开胸肺活检open-lung biopsy，OLBn经人工气道吸引分泌物经人工气道吸引分泌物 endotracheal aspirates，ETA操作：操作：

16、质量评价与退检，洗涤与消化，质量评价与退检，洗涤与消化，(半半)定量与增菌培养定量与增菌培养2021-7-10Dr.HU Bijie25经人工气道采样经人工气道采样n导管吸痰（导管吸痰（ETAETA）n防污染毛刷防污染毛刷(PSB)(PSB)n防污染灌洗防污染灌洗(PBAL)(PBAL)2021-7-10Dr.HU Bijie26常见问题常见问题n下呼吸道吸出的痰可以做增菌培养吗？下呼吸道吸出的痰可以做增菌培养吗？n哪些标本可以做厌氧菌培养？哪些标本可以做厌氧菌培养？n常规涂片检查能检出什么？常规涂片检查能检出什么？n痰真菌培养应该几天出报告？痰真菌培养应该几天出报告？n结核快速培养需要另开单

17、子吗？结核快速培养需要另开单子吗？2021-7-10Dr.HU Bijie27尿培养标本尿培养标本采集与运送采集与运送2021-7-10Dr.HU Bijie28临床案例临床案例n某男，某男，90岁，脑梗后，因咳嗽、发热入院，岁，脑梗后，因咳嗽、发热入院，痰粘咳不出，胸片示两肺纹理增加，尿常痰粘咳不出，胸片示两肺纹理增加，尿常规见规见WBC150 。多种抗生素治疗无效，。多种抗生素治疗无效，改用头孢他啶和环丙沙星也仍低热。改用头孢他啶和环丙沙星也仍低热。 如何诊断和治疗？如何诊断和治疗？ 尿培养：肺克尿培养：肺克10万万/ml，ESBL2021-7-10Dr.HU Bijie29你知道吗？你知

18、道吗？n尿液通常是无菌的或一过性有少量微生物，但是尿道尿液通常是无菌的或一过性有少量微生物，但是尿道内或尿道周围皮肤的菌群会污染尿液标本，从而可能内或尿道周围皮肤的菌群会污染尿液标本，从而可能导致错误的培养结果。导致错误的培养结果。n诊断症状明显的病人（如尿急、尿频、尿痛），一份诊断症状明显的病人（如尿急、尿频、尿痛），一份标本就已足够，治疗标本就已足够，治疗48-7248-72小时后再采集第二份标本。小时后再采集第二份标本。对于症状不明显的病人，需采集对于症状不明显的病人，需采集2-32-3份标本。怀疑肾结份标本。怀疑肾结核时，应连续核时，应连续3 3天采集晨尿。天采集晨尿。n多次收集或多次

19、收集或2424小时尿不能用作培养。小时尿不能用作培养。n申请单上必须注明病人症状是否明显，这对于定量培申请单上必须注明病人症状是否明显，这对于定量培养分析非常重要，尤其只有少量尿液标本。养分析非常重要，尤其只有少量尿液标本。n室温都有利于病原菌和污染菌会生长繁殖，因此若室温都有利于病原菌和污染菌会生长繁殖，因此若30min30min内不能及时培养尿液则必须冷藏，但也不能超过内不能及时培养尿液则必须冷藏，但也不能超过2424小时。小时。2021-7-1030尿液尿液n中段尿中段尿n导尿管导尿导尿管导尿n经耻骨上皮肤穿刺采集膀胱内尿液经耻骨上皮肤穿刺采集膀胱内尿液n送检标本以晨起第一次尿液为佳送检

20、标本以晨起第一次尿液为佳n不能立即送检者，可暂存不能立即送检者，可暂存44冰箱冰箱2021-7-10Dr.HU Bijie31清洁中段尿液清洁中段尿液n尽量取早晨第一次尿液尽量取早晨第一次尿液n弃去开始流出的尿液，以冲刷尿道口的细弃去开始流出的尿液，以冲刷尿道口的细菌，取能代表膀胱部位病原菌的中段尿菌，取能代表膀胱部位病原菌的中段尿2021-7-10Dr.HU Bijie32导尿管尿液导尿管尿液n集尿袋内的尿液不能用作培养；集尿袋内的尿液不能用作培养；n导尿管末端的尿液也不能用于培养，因为很难避免没有尿导尿管末端的尿液也不能用于培养，因为很难避免没有尿道菌群污染。道菌群污染。n除非是流行病学调查，长期留置导管病人常规尿培养没有除非是流行病学调查，长期留置导管病人常规尿培养没有临床意义，大量病原菌常可在这类病人中检出。临床意义，大量病原菌常可在这类病人中检出。n留置导管尿液标本常通过专门的采样端口采集，不能把导留置导管尿液标本常通过专门的采样端口采集，不能把导尿管与尿袋拔开后收集尿液。尿管与尿袋拔开后收集尿液。n采样端口用酒精消毒；必要时，可先夹住导尿管但不能超采样端口用酒精消毒；必要时，可先夹住导尿管但不能超过过3030分钟；将注射器针头插入