常用培养基概念及配方

1、PDA培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基，即Potato Dextrose Agar(Medium，依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。宜培养酵母菌、 霉菌、蘑菇等真菌。改良MC培养基：用于乳酸菌饮料中乳酸菌的菌落计数；原理：大豆蛋 白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖和乳 糖为可发酵糖类提供碳源；乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳酸钙溶解， 以辨别乳酸菌；琼脂是培养基的凝固剂；中性红为pH指示剂。MRS培养基：乳酸菌培养基，由多种成分组成，适用于乳酸菌的生长， 用来分离培养乳酸菌的一类培养基，一种常用的培养基，宜培养分离乳 酸菌。由于该培养基十分适于乳酸菌的生长，而且抑制其他菌的

2、生长， 因此具有分离乳酸菌的功能。当乳酸菌长成后在培养基上显黄色，之后 会变淡黑色。以此分离乳酸菌。乳酸菌：凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳 酸菌。这是一群相当庞杂的细菌，目前至少可分为18个属，共有200多种。除极少数外，其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生 理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。目前已被国内外生物学家 所证实，肠内乳酸菌与健康长寿有着非常密切的关系。乳酸菌指发酵糖 类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。常见菌 种有双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和嗜酸乳杆菌等自配高浓度污水：葡萄糖 5550 mg/L+(NH) 2SO,

3、117O mg/ L+KHPO, 170 mg/ L+CO 为 5000 mg/ L。自配污水：葡萄糖 555 mg/ L+(NH4) 2SO, 117m/L+KHPO 17 mg/L+CaC120, 08 mg/L+MgSO, 1, 534 mg/L+NaHCO3 550 8 mg/L+FeC1 6H2O0. 25 mg/L+COD 500 mg/L+氨氮为 30 mg/L.一、LB培养基配制1升LB培养培养基需: 蛋白胨 10g/L ;酵母粉 5 g/L、NacllO g/L、单/ 双去离子水、琼脂1520g/L （配制液体培养基不需要加，配制固体培养 基时加入）。pH值用5mol/L N

4、aOH溶液调至（用精密pH试纸测定）。配置完后在高压锅内高压灭菌 21mi n。二、YPD培养基配制（酵母菌培养基）1）溶解酵母膏/酵母粉（yeast extract ）10g/L、蛋白胨（peptone）20g/L于单/双去离子水中，如制平板加入 20g/L琼脂粉（配制固体培养 基）；2）高压灭菌?121 C 20min ；3加入20g/L葡萄糖（dextrose 或glucose，葡糖糖溶液灭菌后加入、防止与蛋白胨反应）；注：葡萄糖、酵母粉、蛋白胨溶液混合后在高温下可能会发生化学反应， 导致培养基成分变化，所以要分别灭菌后再混合。葡萄糖可以过滤除菌， 也可以115C 15min灭菌。三、M

5、RS养基配制（乳酸菌培养基）蛋白胨（peptone） 10g/L、牛肉膏（beef extract）10g/L 、酵母菌粉（yeast extract）5g/L 、醋酸钠（乙酸钠）5g/L、磷酸氢二钾2g/L、柠檬酸铵 2g/L、硫酸镁L、硫酸锰L、琼脂20g/L、吐温80 1ml/L、葡萄糖20g/L（因葡萄糖与蛋白胨发生反应因此需单独配制）、pH值用冰乙酸调至（用pH试纸、仪器均可）250微升/L。四、琼脂糖凝胶配制凝胶板大孔为60ml,两小孔为30ml，梳子有5微升、10微升等 琼脂糖粉10g12g/L, x （Tris硼酸，是一种PCF技术中用到的缓冲液。 成分及终浓度（5X）最终pH

6、我用蒸馏水稀释至x）1）琼脂糖凝胶的制备：称取0.3g琼脂糖，置于三角瓶中，加入30ml TBE 或TAE缓液，置于三角瓶中，加入30ml TBE或TAE缓液，置于三角瓶中，加入30ml TBE或TAE缓液，将该三角瓶置于微波炉加热至琼脂糖 溶解。将冷却至65C左右的琼脂糖凝胶液，加入溴化乙锭（凝胶染料）， 充分混匀。2）胶板的制备：取有机玻璃内槽，洗净、晾干；将有机玻璃内槽置于一水平位置模 具上，安好挡板，放好梳子。吸取少量琼脂糖溶液封固胶膜边缘，任其 凝固，在距离底板的位置上放置梳子，以便加入琼脂糖后可以形成完 好的加样孔。如果梳子距离玻璃板再近，则拔出梳子时孔底将有破裂的 危险，破裂后将

7、使样品在凝胶与玻璃板之间渗漏；将剩余的温热琼脂 糖溶液倒入胶膜中，使胶液缓慢地展开，直到在整个有机玻璃板表面形 成均匀的胶层。凝胶的厚度在 35mn之间，检查一下梳子的齿下或齿 间是否有气泡；室温下静置30min左右，待凝固完全后，轻轻拔出梳 子，在胶板上即形成相互隔开的上样孔。制好胶后将铺胶的有机玻璃内 槽放在含有1xTAE（Tris-乙酸）或TBE（Tris-硼酸）工作液的电泳 槽中使用，没过胶面1mm以上。五、培养基是人们对马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称，即PotatoDextrose Agar（Medium），依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。一种常用的培养基，宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇

8、等真菌。配制配方：马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂1520克、自来水1000毫升、 自然PH配制步骤：其做法是称取200g马铃薯，洗净去皮切成小块，加水煮 烂（煮沸2030分钟，能被玻璃棒戳破即可），用四层纱布过滤，再据 实际实验需要加葡萄糖和琼脂，继续加热搅拌混匀，稍冷却后再补足水 分至1000毫升，分装试管，加塞、包扎，灭菌（121C） 20分钟左右后 取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。其他事项：1.培养基经灭菌后，必须放在37C温箱培养24h,无菌生长者方可使 用。培养基一般不需要调pH对于要调节pH的培养基，一般用pH试纸 测定其pH。如果培养基偏酸或偏碱时，可用Imol / LNaOH或 Imol /LHCL 溶液进