微生物学实验：微生物的分离纯化及培养

1、微生物学实验微生物学实验微生物学实验微生物学实验微生物学实验微生物学实验 微生物的分离纯化微生物的分离纯化 及培养及培养 吉林大学生物基础实验吉林大学生物基础实验 教学中心教学中心 吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得 只含某一种或某一株微生物的过程。只含某一种或某一株微生物的过程。 为什么要进行纯培养：平板上的单一菌为什么要进行纯培养：平板上的单一菌 落并不一定保证是一种菌。落并不一定保证是一种菌。 常用的分离、纯化方法：常用的分离、纯化方法： 单细胞挑取法、稀释涂布平板法单细胞挑取法、稀释涂布平板

2、法 稀释混合平板法、平板划线法稀释混合平板法、平板划线法 微生物的分离、纯化及培养技术微生物的分离、纯化及培养技术微生物的分离、纯化及培养技术微生物的分离、纯化及培养技术微生物的分离、纯化及培养技术微生物的分离、纯化及培养技术 吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 1目的要求目的要求 2实验原理实验原理 3微生物培养技术微生物培养技术 4结果观察结果观察 吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 1 . 实验目的实验目的 ： 1.11.1 了解微生物分离和纯化的原理了解微生物分离和纯化的原理 。 1.21.2 掌握常用的分离纯化微生物的方法。掌握常用的分离纯

3、化微生物的方法。 吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 2 2 . . 实验原理实验原理 : : 从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某 一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。平一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。平 板分离法普遍用于微生物的分离与纯化。其基板分离法普遍用于微生物的分离与纯化。其基 本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件， 如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求, ,或加入或加入 某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制某种抑制剂造成只利于该微生

4、物生长，而抑制 其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要 的微生物。的微生物。 吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常 是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌 落而获得一种纯培养。获取单个菌落的方法可通过稀释落而获得一种纯培养。获取单个菌落的方法可通过稀释 涂布平板或平板划线等技术完成。值得指出的是，从微涂布平板或平板划线等技术完成。值得指出的是，从微 生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落

5、并不一定保生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保 证是纯培养。因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，证是纯培养。因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外， 还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定，有些微还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定，有些微 生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征 鉴定才能得到。鉴定才能得到。 土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是 数量还是种类都是极其丰富的。因此土壤是微生物多样数量还是种类都是极其丰富的。因此土壤是微生物多样 性的重要场所，是发掘微生

6、物资源的重要基地，可以从性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从 中分离、纯化得到许多有价值的菌株。本实验将采用不中分离、纯化得到许多有价值的菌株。本实验将采用不 同的培养基从土壤中分离不同类型的微生物。同的培养基从土壤中分离不同类型的微生物。 吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 稀释涂布平板法稀释涂布平板法 ： 步骤：步骤： 1 1、倒平板：牛肉膏蛋白胨培养基，高氏、倒平板：牛肉膏蛋白胨培养基，高氏I I号培养基，号培养基， 查氏培养基冷却至查氏培养基冷却至55-6055-60时，混匀后倒平板，牛肉膏蛋时，混匀后倒平板，牛肉膏蛋 白胨培养基倒白胨培养基倒4 4皿

7、，高氏皿，高氏I I号培养基和查氏培养基各倒号培养基和查氏培养基各倒3 3皿。皿。 2 2、制备污水稀释液：、制备污水稀释液：10g10g土样，加入土样，加入90ml90ml无菌水中，无菌水中， 在三角瓶中振摇在三角瓶中振摇20min20min。取。取0.5ml 0.5ml 加入盛有加入盛有4.5ml4.5ml无菌水的无菌水的 试管中，以此类推，制成不同稀释度。试管中，以此类推，制成不同稀释度。 3 3、涂布：将上述每种培养基平板底面标记稀释度，、涂布：将上述每种培养基平板底面标记稀释度， 然后用无菌吸管从最后三种稀释度，即然后用无菌吸管从最后三种稀释度，即1010-4 -4、 、1010-5

8、 -5和 和1010-6 -6的 的 试管中吸取试管中吸取0.1ml0.1ml对号放入平板上，用玻棒涂布。对号放入平板上，用玻棒涂布。 4 4、培养：高氏、培养：高氏I I号和查氏倒置培养于号和查氏倒置培养于2828培养箱中培养箱中 培养培养3-5days3-5days，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在3737培养培养1-1- 2days2days。 5 5、挑菌落：转至斜面，检查是否一致，保存。挑菌落：转至斜面，检查是否一致，保存。 吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 倒平板倒平板倒平板倒平板倒平板倒平板 吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验

9、教学中心 菌悬液的配制菌悬液的配制菌悬液的配制菌悬液的配制菌悬液的配制菌悬液的配制 吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 菌液的稀释菌液的稀释菌液的稀释菌液的稀释菌液的稀释菌液的稀释 吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 接种接种接种接种接种接种 吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 培养培养培养培养培养培养 吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 微生物的纯化培养微生物的纯化培养微生物的纯化培养微生物的纯化培养微生物的纯化培养微生物的纯化培养 吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 吉林大学生物基

10、础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 平板划线法：平板划线法： 1 1、倒平板，标记培养基名称，编号和、倒平板，标记培养基名称，编号和 实验日期。实验日期。 2 2、划线方法、划线方法 稀释混合平板法稀释混合平板法 ： 1 1、先加菌、先加菌 2 2、倒平板时注意培养基温度、倒平板时注意培养基温度 3 3、混合均匀、混合均匀 吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 微生物培养技术：微生物培养技术： 1 1、斜面接种、斜面接种 2 2、液体培养基接种、液体培养基接种 3 3、穿刺接种、穿刺接种 吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 （一）斜面接种：由已

11、长好微生物的斜面中挑取少量菌种（一）斜面接种：由已长好微生物的斜面中挑取少量菌种 接种至另一空白斜面培养基上。接种至另一空白斜面培养基上。 （1 1）接种前用记号笔在距试管口）接种前用记号笔在距试管口23cm23cm位置上，注明菌名、位置上，注明菌名、 接种日期等。接种日期等。 （2 2）将试管放于手掌中，并用手指夹住，使两支试管呈）将试管放于手掌中，并用手指夹住，使两支试管呈 “V”V”字形。字形。 （3 3）用火焰将接种环烧红，然后将接种环来回通过火焰数）用火焰将接种环烧红，然后将接种环来回通过火焰数 次。次。 （4 4）用小指、无名指和手掌拔下试管塞，并持于手中。）用小指、无名指和手掌拔

12、下试管塞，并持于手中。 （5 5）将试管口在火焰上微烧一周。）将试管口在火焰上微烧一周。 （6 6）将烧过的接种环伸入菌种管内，先将环接触一下没有）将烧过的接种环伸入菌种管内，先将环接触一下没有 长菌的培养基部分，使其冷却，长菌的培养基部分，使其冷却， 以免烫死菌体，然后用以免烫死菌体，然后用 环在菌苔上轻轻地接触，刮下少许培养物，并将接种环慢环在菌苔上轻轻地接触，刮下少许培养物，并将接种环慢 慢的从试管中抽出，并迅速地伸入另一试管中，在斜面上慢的从试管中抽出，并迅速地伸入另一试管中，在斜面上 划线（波浪或直线），使菌体沾附在培养基上。划线（波浪或直线），使菌体沾附在培养基上。 （7 7）将接

13、种环抽出，灼烧管口。）将接种环抽出，灼烧管口。 （8 8）塞上棉塞。）塞上棉塞。 （9 9）将接种环经火焰灼烧灭菌。）将接种环经火焰灼烧灭菌。 吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 （二）液体接种：由斜面菌种接种在液体培养基中（二）液体接种：由斜面菌种接种在液体培养基中 （1 1）接种前用记号笔在距试管口）接种前用记号笔在距试管口23cm23cm位置上，注明菌名、位置上，注明菌名、 接种日期等。接种日期等。 （2 2）将试管放于手掌中，并用手指夹住，使两支试管呈）将试管放于手掌中，并用手指夹住，使两支试管呈 “V”V”字形。字形。 （3 3）用火焰将接种环烧红，然后将接种环

14、来回通过火焰）用火焰将接种环烧红，然后将接种环来回通过火焰 数次。数次。 （4 4）用小指、无名指和手掌拔下试管塞，并持于手中。）用小指、无名指和手掌拔下试管塞，并持于手中。 （5 5）将试管口在火焰上微烧一周。）将试管口在火焰上微烧一周。 （6 6）参照图（）参照图（7-17-1） （7 7）将接种环抽出，灼烧管口。）将接种环抽出，灼烧管口。 （8 8）塞上棉塞。）塞上棉塞。 （9 9）将接种环经火焰灼烧灭菌。）将接种环经火焰灼烧灭菌。 吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 （三）穿刺接种：这是常用来接种厌氧菌，检查细菌运动（三）穿刺接种：这是常用来接种厌氧菌，检查细菌运

15、动 性，或保藏菌种的一种接种方法，接种工具用接种针。性，或保藏菌种的一种接种方法，接种工具用接种针。 （1 1）接种前用记号笔在距试管口）接种前用记号笔在距试管口23cm23cm位置上，注明菌名、位置上，注明菌名、 接种日期等。接种日期等。 （2 2）将试管放于手掌中，并用手指夹住，使两支试管呈）将试管放于手掌中，并用手指夹住，使两支试管呈 “V”V”字形。字形。 （3 3）用火焰将接种环烧红，然后将接种环来回通过火焰数）用火焰将接种环烧红，然后将接种环来回通过火焰数 次。次。 （4 4）用小指、无名指和手掌拔下试管塞，并持于手中。）用小指、无名指和手掌拔下试管塞，并持于手中。 （5 5）将试

16、管口在火焰上微烧一周。）将试管口在火焰上微烧一周。 （6 6）参照图（）参照图（7-17-1） （7 7）将接种环抽出，灼烧管口。）将接种环抽出，灼烧管口。 （8 8）塞上棉塞。）塞上棉塞。 （9 9）将接种环经火焰灼烧灭菌。）将接种环经火焰灼烧灭菌。 吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 将已接种的斜面、半固体和液体将已接种的斜面、半固体和液体 培养基放置培养箱中培养将生长好的培养基放置培养箱中培养将生长好的 菌种用牛皮纸包好，置菌种用牛皮纸包好，置44冰箱中保冰箱中保 存。存。 吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 吉林大学生物基础实验教学中心吉林大

17、学生物基础实验教学中心 结果与观察：结果与观察： 1. 1.检查接种后培养物的生长情况和染菌情况。检查接种后培养物的生长情况和染菌情况。 2. 2.将实验结果填入下表将实验结果填入下表 3. 3.绘出平板上出现的菌落的生长和分布情况。绘出平板上出现的菌落的生长和分布情况。 4. 4.观察与记录以下内容：观察与记录以下内容： 序号序号 来源来源 大小大小 形状形状 边缘边缘 颜色颜色 表面表面 代谢物代谢物 种类种类 培 养 物 生长情况（+或-） 染菌情况（+或-） 斜 面 液 体 半 固 体 吉林大学生物基础实验教学中心吉林大学生物基础实验教学中心 思考题思考题思考题思考题思考题思考题 1、如何确定平板上某个单菌落是否是纯培养？、如何确定平板上某个单菌落是否是纯培养？ 请写出主要的实验