荜茇酰胺通过诱导ROS抗胶质瘤和抗白血病的作用及其机制.doc

1、荜茇酰胺通过诱导 ROSK胶质瘤和抗白血病的作用及其机制荜茇酰胺 (Piperlongumine, PL) 是一种从长柄胡椒中提取的具有药用价值 的天然生物碱。近年来已有研究提示荜茇酰胺对肿瘤细胞具有杀伤作用 , 本实验 室也首次报道了荜茇酰胺对胶质母细胞瘤的杀伤作用。本研究着重于荜茇酰胺对胶质母细胞瘤细胞迁移的作用及其机制 , 进一步探 讨荜茇酰胺抗胶质母细胞瘤的功能及其机制。 本研究采用细胞划伤模型证明了荜 茇酰胺特异性地抑制肿瘤细胞迁移。利用DCFH-DA染色测定细胞内活性氧水平、微量谷胱甘肽试剂盒测定细胞内 谷胱甘肽含量、免疫印迹测钡 Tp-p38/p38、p-JNK/JNK蛋白表达水

2、平,探讨了荜 茇酰胺对胶质母细胞瘤细胞迁移的抑制作用的潜在分子机制 , 并采用 Transwell 迁移实验进行了验证。 在机械划伤后用荜茇酰胺处理胶质母细胞瘤细胞系 (LN229 和U87)能明显抑制划痕的愈合。而在划伤前给予荜茇酰胺(5-10卩M)处理6小时可抑制多种肿瘤细胞株 (LN229, HepG2, Huh7, Hela, T24) 细胞划伤后迁移 , 而对原代培养的大鼠星形胶 质细胞迁移则无影响，EdU实验排除了这一模型中荜茇酰胺对 LN229细胞增殖的 影响。荜茇酰胺能升高LN229细胞内活性氧(ROS冰平，同时降低还原型谷胱甘肽 (GSH)含量但对原代培养的大鼠星形胶质细胞内

3、 ROS水平无影响。抗氧化剂N-乙酰基-L-半胱氨酸(NAC)预处理能完全逆转荜茇酰胺对 LN229 细胞迁移的抑制作用。荜茇酰胺激活 LN229细胞内JNK和p38信号通路,而这种 激活可被NAC阻断。LN229细胞过表达p38后细胞迁移能力下降,而p38特异性抑制剂SB203580和JNK特异性抑制剂SP600125能明显提高LN229细胞的迁移能力。在Tran swell 迁移实验中,荜茇酰胺抑制LN229细胞迁移的作用再次被证实,并且这种作用能 被NAC逆转，被p38和LNK特异性抑制剂减弱。荜茇酰胺还能增高IKBa的表达，降低NFk B的活性，这种变化同样受NAC及 p38和JNK特

4、异性抑制剂的调控。此外，利用免疫印迹检测细胞周期相关蛋白，我 们发现荜茇酰胺降低LN229细胞内细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C(cell division cyclin25homolog C,Cdc25C)及 Cdc2蛋白的表达，且这种降低能被 NAC预处理阻断。自噬相关蛋白LC3也可被荜茇酰胺和NAC调控。这提示草茇酰胺还可通过阻 滞细胞周期和诱导自噬发挥其抗胶质母细胞瘤细胞作用。本实验证明了荜茇酰胺通过诱导活性氧水平升高 ,进而激活JNK和p38,从而 抑制胶质母细胞瘤细胞迁移。 荜茇酰胺抑制肿瘤细胞迁移及其它抗胶质母细胞瘤 的功能可为荜茇酰胺应用于肿瘤预防和治疗提供实验基础。荜茇酰胺对多

5、种肿瘤细胞具有杀伤作用 , 本研究收集了 10 例白血病病人血 液标本,探索荜茇酰胺对白血病病人细胞的作用及其机制。本研究采用MTT勺方法测量荜茇酰胺对白血病病人细胞的活力影响。利用PI染色和流式监测细胞死亡。DCFH-DAAfe色测定细胞内活性氧水平。免疫印迹检测p-p38/p38、p-JNK/JNK蛋白表达水平，证明了荜茇酰胺对白血 病病人细胞的杀伤功能及潜在分子机制。荜茇酰胺(10-20卩M)可抑制白血病病人 细胞活力 , 引起明显的细胞凋亡。荜茇酰胺能升高白血病病人细胞内 ROS水平。NAC预处理能完全逆转荜茇酰 胺诱导的细胞死亡。荜茇酰胺激活白血病病人细胞内 JNK和p38信号通路,而这种激活可被NAC 阻断。p38抑制剂SB203580