试验九IMViC与硫化氢试验

1、实验九IMViC 与硫化氢试验一、实验目的了解IMViC与硫化氢反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义和方法。二、基本原理IMViC :? I 吲哚（indol test）? M 甲基红（methyl red test）? V 伏-普（Voges-Prolauer test）? C柠檬酸盐（citrate test）? 硫化氢（H2S）I-吲哚（indol test）色氨酸+出0 色氨酸酶.吲哚+ NH3 +丙酮酸吲哚+对二甲基氨基苯甲醛 玫瑰吲哚（红色）部分细菌能产生色氨酸酶，从而具有分解色氨酸产生吲哚的能力，因此吲哚实验可以作为一个生化检测指标。大肠杆菌产色氨酸酶阳性（红色）产气肠杆菌不产色氨

2、酸酶阴性（无色）M-甲基红（methyl red test）? 甲基红指示剂? 橘黄色（pH6.3）红色（pH4.2）细菌代谢糖产生酸使培养基变酸（pH下降），使甲基红指示剂变色。所有肠道微生物都能发酵葡萄糖产生有机酸，但大肠杆菌和产气肠杆菌有区别：两者在培养早期产生有机酸，但大肠杆菌在培养后仍能维持酸性pH4,而产气肠杆菌则将有机酸转化为非酸性产物，使pH上升至6左右。大肠杆菌阳性（红色）产气肠杆菌阴性（黄色）V-伏-普（Voges-Prolauer test）葡萄糖丙酮酸-CO2缩合 乙酰乳酸-CO2脱羧 乙酰甲基甲醇 +OH-2H 胍基+二乙酰红色化合物测定细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性

3、末端产物（如丙酮酸）的能力。大肠杆菌不产丙酮酸阴性（无色）产气肠杆菌产丙酮酸阳性（红色）碱性条件；加入少量含胍基的化合物可使反应更明显。C-柠檬酸盐（citrate test）? 有些细菌以柠檬酸钠为碳源，培养基中的柠檬酸和磷酸铵被分解后，产生碱性化合 物，使 pH 升高。? 培养基（ 1溴麝香草酚蓝） ：绿色 深蓝色? 溴麝香草酚蓝：pH v 6黄色pH 67绿色pH 7蓝色大肠杆菌不能利用柠檬酸盐阴性（绿色） 产气肠杆菌能利用柠檬酸盐阳性（蓝色） 硫化氢实验含硫有机物（如胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸）能被部分细菌分解产生H2S， H2S 和培养基中的铅盐或铁盐反应，形成黑色的硫化铅或硫化铁沉

4、淀。大肠杆菌不能分解阴性（无沉淀） 产气肠杆菌能分解阳性（黑色沉淀）三、实验器材1 菌种：大肠杆菌、产气肠杆菌2 培养基： 蛋白胨水培养基、 葡萄糖蛋白胨水培养基、 柠檬酸盐斜面培养基、 醋酸铅培养基。四、操作步骤1 接种与培养? 穿刺法分别接种两菌于 2支醋酸铅培养基（H2S）, 37 C培养48h。? 分别接种两菌于 2 支蛋白胨水培养基（ I）、 2 支葡萄糖蛋白胨水培养基（ M V）， 37C培养2d。? 划S曲线法分别接种两菌于 2支柠檬酸盐斜面培养基（C） , 37 C培养2d。2 结果观察? H2S 实验：观察是否有黑色硫化铅沉淀产生。? 吲哚实验： 2d 后的培养物内加 3 4 滴乙醚，摇动数次，静至 1 3min ，待乙醚上升 后，沿管壁徐徐滴加 2 滴吲哚试剂，产生红色环状物者为阳性反应（注意最好选用 色氨酸含量高的蛋白胨培养基） 。? 甲基红实验： 2d 后的培养物内加 2 滴甲基红试剂，培养物变为红色者为阳性，黄 色者为阴性（注意甲基红不要过量，以免出现假阳性） 。? 伏普实验： 2d 后的培养物内加 5 10 滴 40KOH ，然后加入等量的 5-萘酚溶 液，用力振荡，37C保温1530min，以加快反应速度。红色为阳性。? 柠檬酸盐实验： 观