直链淀粉,支链淀粉测定试剂盒

1、直链淀粉/支链淀粉测定试剂盒用于测定淀粉中的直链淀粉和支链淀粉含量amyl 11/99简介:决定谷物淀粉最终的特殊用途取决于淀粉众多特性中的直链淀粉/支链淀粉比率，因此，对于淀粉加工企业，淀粉中直链淀粉含量是一项非常重要的指标。测定谷物淀粉中的直链淀粉通常采用电位测定法、糊化染色法或旋光分析法，即通过测定碘与直链淀粉结合生成直链淀粉-碘复合物的方法来评估直链淀粉含量，然而由于支链淀粉-碘复合物在此过程中同样会形成，因此这些方法的准确性常遭到质疑。利用非比色方法测定游离碘离子的减少和通过比色测定直链淀粉-碘复合物的方法会导致高估直链淀粉的含量，是用此方法可能出现的更多问题请参考gibson et

2、 al11。目前，国际上普遍采用结果更加准确的利用伴刀豆凝集素a(con a)沉降支链淀粉，然后测定直链淀粉含量的方法，在特定的温度、ph和离子强度下，con a可以特定的连接含吡喃葡萄糖基a-d-glucosepyranosyl或吡喃甘露基a-d-mannopyranosyl的支链多聚糖，因此会优先于直链淀粉与支链淀粉形成沉淀复合物。原理:加入二甲基亚砜(dmso)的淀粉样品通过加热被完全溶解，乙醇洗脱样品中的油脂，回收洗涤后的淀粉样品，并用醋酸/钠盐溶液溶解，加入con a后支链淀粉被特异性的沉降，离心分离支链淀粉，保存于悬浮液中的直链淀粉被酶水解生成葡萄糖，利用葡萄糖氧化酶/过氧化物酶测

3、定葡萄糖的含量。溶解于醋酸/钠盐溶液中的总淀粉同样可以被水解成葡萄糖，并利用萄糖氧化酶/过氧化物酶测定葡萄糖。在510nm测定利用con a沉降后悬浮液中gopod吸光度的比率变化来计算直链淀粉的浓度，同样道理可计算出总淀粉浓度。此方法适用于所有的纯净淀粉样品和谷物面粉。精确性:对于纯净淀粉和10%的谷物面粉，批内偏差 12,000 u/升过氧化物酶 650 u/升4-氨基安替比林 0.4 mm稳定性：4c保存，2-3个月或-20c保存，12个月葡萄糖标准溶液葡萄糖标准溶液（100g/0.1ml；保存于0.2%的苯甲酸中），室温保存 5年。淀粉参考标样瓶签上标注有直链淀粉含量缓冲液（试剂盒中未

4、提供）1. 醋酸钠缓冲液(100mm, ph 4.5)5.9ml冰醋酸(,1.05g/ml)加入900ml蒸馏水，用1m naoh(4g/100ml)调节ph到4.5（大约需要30ml），然后加入叠氮化钠(0.2g)并补液至1l。室温中保存。注意：叠氮化钠是一种有毒化学物质应妥善保存。叠氮化钠是葡萄糖缓冲液稳定剂，稀释操作过程中必须带防护手套进行操作。二甲基亚砜对皮肤具有刺激性，应谨慎使用。2. 浓缩con a缓冲液(ph 6.4, 600mm)无水醋酸钠(bdh cat no: 10236) -49.2g氯化钠(bdh cat. no: 10241)- 175.5gcacl2.2h2o (m

5、allinckrodt cat. no: 4160)-0.5gmgcl2.6h2o (bdh cat. no: 10149) -0.7gmncl2.4h2o (ajax cat. no: 307) -0.7g将上述试剂溶解于900ml蒸馏水中，滴加冰醋酸调节ph到6.4，用蒸馏水补液至1l，4c保存。注意：调节ph时必须谨慎小心，如果该溶液的ph低于6.4，将会产生沉淀物，重新调节ph沉淀物不会再溶解，因此，必须重新配置新的溶液。3. con a缓冲液(工作液):使用当天，用100ml蒸馏水稀释30ml浓缩con a缓冲液。4. 二甲基亚砜(dmso)分析纯试剂(bdh analar cat.

6、 no: 10323)设备:1. 玻璃器具-试管(圆底; 16x120 mm, 15ml)-容量瓶(25ml)-螺口戴帽样品管(10ml)2. 离心机（2,000g）3. 微量移液器(50-1000l).4. 连续分配器5. 分析天平.6. 分光光度计510 nm.7. 漩涡混合器8. 定时钟9. 沸水浴锅10. 微量离心机（14,000g）11. 控温水浴箱（40c）12. 微量离心管(2.0ml)注意事项1、淀粉样品必须用乙醇进行处理以去除油脂，如果样品不能用乙醇处理，样品中的直链淀粉含量可能会被低估50%实验步骤a. 淀粉前处理1、 准确称取淀粉和面粉样品20-25mg，加入到螺口试管中

7、，记录样品重量（精确到0.1mg）。注意：每批试验必须包括参考标样 每第五个样品设定重复管2、 加入1ml的dmso，用漩涡混合器低速的轻轻振荡，盖住试管帽在沸水中加热直到完全溶解（大约1分钟），确保没有凝胶块残留。3、 用漩涡混合器高速混合，再次将试管置于沸水浴锅中加热15分钟，并间断性的用漩涡混合器高速混合。4、 室温下放置大约5分钟，加入2ml乙醇（95%），漩涡混合器混合，并再次加入乙醇4ml，振荡，将形成淀粉沉淀物，静置试管15分钟（或过夜）。5、 离心5分钟（2,000g），弃去悬浮液，并用吸水纸吸干试管中的液体，确保去除所有的乙醇溶液。6、 加入2ml的dmso，用漩涡混合器低速

8、振荡，沸水浴锅中加热15分钟，并间断性的混合，以避免凝胶形成。7、 加入4ml稀释的的con a缓冲液（工作液），混合均匀，然后转移到25ml的容量瓶中，并用con a缓冲液反复冲洗试管并一同加入容量瓶中，用con a缓冲液定溶至刻度线。（此溶液为溶液1）注意：必须在60分钟之内对此溶液进行测定。b. 用con a沉淀支链淀粉，并测定直链淀粉1、 取1ml 溶液1到2.0ml的微量离心管中，加入0.50ml的con a缓冲液(4mg/ml)，盖紧试管，轻轻的反复颠倒混合，避免样品起泡。2、 在室温中静置1小时，20c下离心10分钟（14,000g）。3、 转移1ml的上层液到15ml的离心管中

9、，加入3ml的醋酸钠缓冲液（100mm; ph 4.5），轻轻的盖住试管盖，在沸水中加热5分钟。4、 将试管置于40c的水浴箱中孵育5分钟，加入0.1ml的淀粉葡萄糖苷酶/-淀粉酶，并继续在40c的水浴箱中孵育30分钟，2,000g下离心5分钟。5、 加入4ml 的gopod试剂，在40c下孵育20分钟，同时孵育空白对照和葡萄糖质控。6、 相对于空白对照在510nm下读取每个样品和葡萄糖质控的吸光度值。注意：空白对照：1.0ml醋酸那缓冲液+4ml 的gopod试剂，在40c下孵育20分钟葡萄糖质控：0.1ml的葡萄糖标准液(1mg/ml)+0.9ml醋酸那缓冲液+4ml 的gopod试剂，在

10、40c下孵育20分钟c. 测定总淀粉1、 取0.5ml 溶液1，加入4ml的醋酸钠缓冲液（100mm; ph 4.5）。2、 加入0.1ml的淀粉葡萄糖苷酶/-淀粉酶，在40c的水浴箱中孵育10分钟。3、 转移1.0ml（两份）到测定试管中，加入4ml 的gopod试剂，在40c下孵育20分钟，同时孵育空白对照和葡萄糖质控。计算直链淀粉含量（%）con a悬浮液吸光度 6.15 100直链淀粉,% = x x 总淀粉吸光度 9.2 1con a悬浮液吸光度 = x 66.8总淀粉吸光度注释：6.15和9.2分别代表con a和总淀粉在提取时的稀释系数注意:1、 加入con a缓冲液的样品（如：

11、在试验步骤a中的溶液1）中的直链淀粉有衰退和沉淀倾向，因此不能放置过长时间。2、 为了达到con a沉淀支链淀粉的效果必须在室温中放置60分钟（步骤b1），但是不能超过120分钟，因为直链淀粉有衰退倾向。3、 利用乙醇可去除样品中可溶性的糖，因为可溶性的糖会干扰试验。参考文献:2. juliano, b.o. (1971) cereal sci.today 16, 334-338, 340, 360.3. berry, c.s., lanson, k., miles, m.j., morris,v.j. and russel, p.l.j. (1988) cereal sci. 8, 203-

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