14骆丹电子版ppt课件

1、-端粒在皮肤光老化中的端粒在皮肤光老化中的作用作用-改善皮肤光老化的临床改善皮肤光老化的临床与基础与基础PH 空白组空白组1 UVA1 UVA组组 8-MOP+UVA8-MOP+UVA组组空白组空白组 UVA 8-MOP+UVA 8-MOP+UVAUVA 8-MOP+UVA 8-MOP+UVA 8-MOP+UVA组细胞出现了明显的细胞衰老改变组细胞出现了明显的细胞衰老改变:胞浆中可见较多空泡，细胞核中可见较多胞浆中可见较多空泡，细胞核中可见较多絮状物絮状物,核仁不清晰，局部出现核膜内褶核仁不清晰，局部出现核膜内褶,核内染色质凝集且分布不均。线粒体肿胀、粗面内核内染色质凝集且分布不均。线粒体肿胀

2、、粗面内质网扩张质网扩张,脱颗粒，可见较多次级溶酶体。脱颗粒，可见较多次级溶酶体。 MTT法检测法检测细胞活性绘制细胞活性绘制细胞生长抑制细胞生长抑制曲线曲线流式细胞术流式细胞术检测细胞检测细胞周期分布周期分布透射电镜透射电镜观察细胞观察细胞超微结构超微结构细胞化学酶细胞化学酶法检测法检测-半半乳糖苷酶乳糖苷酶 处理后处理后24h，48h, 72h, 7d分光光度法分光光度法检测细胞内检测细胞内氧化应激损伤氧化应激损伤程度程度 ：MDA,SOD及及T-AOC免疫荧光检测免疫荧光检测细胞内氧化细胞内氧化光产物光产物8-oxo-dGReal-Time PCR检测端检测端粒的相对长粒的相对长度：度：

3、T/SWestern Blot检测细胞老化检测细胞老化相关蛋白相关蛋白P53, P21WAF-1及及 P16INK-4a 对照组对照组 8-MOP8-MOP组组 UVA组组 8-MOP+UVA组组照光后照光后24h24h、48h48h、72h72h及及7d7d后后8-MOP+UVA8-MOP+UVA联合处理组联合处理组SA-GalSA-Gal阳性细胞比例较对照组均明显增高（阳性细胞比例较对照组均明显增高（* *P0.01P0.01），），且随时间积累而逐渐增高且随时间积累而逐渐增高r=0.988)r=0.988)。结论：结论： 8-MOP+UVA联合作用可使皮肤联合作用可使皮肤FB出现光老化生

4、物学特性改变出现光老化生物学特性改变SA-Gal 对照组 UVA组*8-MOP+UVA组组8-oxo-dG阳性阳性细胞核比例明显高于对照组细胞核比例明显高于对照组（*P0.01 ）；）；UVA组组8-oxo-dG阳性细胞核比例也明显阳性细胞核比例也明显高于对照组（高于对照组（*P0.05 ） 8-MOP+UVA联合处理组端粒相对长度明显短于对照组联合处理组端粒相对长度明显短于对照组2.570.05 vs 6.630.12，P0.01UVA照射组照射组4.590.07 vs 6.630.12, ）8-MOP+UVA联合处理组联合处理组2.570.05 vs 4.590.07端粒相对长度端粒相对长

5、度经经t检验比较均短于对照组检验比较均短于对照组P0.05） *各组老化相关蛋白表达水平比较各组老化相关蛋白表达水平比较 8-MOP+UVA联合处理组联合处理组P53, P21WAF-1 及及 P16INK-4a蛋蛋白白表达水平明显高于对照组表达水平明显高于对照组P值均值均0.01），而），而UVA辐射组相关辐射组相关蛋白水平也有明显增高蛋白水平也有明显增高P值均值均0.05），），8-MOP+UVA联合处联合处理组及理组及UVA照射组两组间经照射组两组间经t检验比较，前者相应蛋白表达水平检验比较，前者相应蛋白表达水平均高于后者均高于后者P值均值均0.05）。）。在在UVA照射下，外源性光敏剂

6、照射下，外源性光敏剂8-MOP使细胞的基因氧化应激损使细胞的基因氧化应激损伤显著加重，产生大量氧化光产物伤显著加重，产生大量氧化光产物8-oxo-dG ；oxodeoxyguanosine 8-MOP+UVA联合作用后，细胞端粒结构上由于较多氧化光产联合作用后，细胞端粒结构上由于较多氧化光产物的产生，使其端粒缩加速，提前到达临界长度；物的产生，使其端粒缩加速，提前到达临界长度； 8-MOP+UVA联合作用后由于端粒缩短加速，提前激活联合作用后由于端粒缩短加速，提前激活P53老老化检查点，并依次激活下游信号蛋白化检查点，并依次激活下游信号蛋白-细胞周期激酶抑制剂细胞周期激酶抑制剂P21WAF-1

7、 及及 P16INK-4a蛋白，相应蛋白表达水平明显增高；蛋白，相应蛋白表达水平明显增高； 综上所述：综上所述： 8-MOP+UVA联合作用可导致基因的氧化应激损联合作用可导致基因的氧化应激损伤，端粒受损严重，缩短加速，并激活老化相关蛋白表达。伤，端粒受损严重，缩短加速，并激活老化相关蛋白表达。GS-Rg1各浓度干预组基因氧各浓度干预组基因氧化产物化产物8-oxo-dG及及SA-Gal阳阳性率均明显低于光老化模型组性率均明显低于光老化模型组P0.05且与药物剂量负相且与药物剂量负相关关r值依次为值依次为0.968, 0.943）。）。 *各组细胞于照光后第各组细胞于照光后第7 7日端粒长度比较

8、日端粒长度比较 GS-Rg1各浓度干预组端粒相对长度各浓度干预组端粒相对长度2.570.05）明显长于明显长于8-MOP+UVA联合处理组联合处理组6.630.12，P0.01），），且各浓度组之间端粒相对长度与且各浓度组之间端粒相对长度与GS-Rg1浓度有明显的正相关，浓度有明显的正相关，表现出一定的剂量依赖性表现出一定的剂量依赖性P0.05） * -Actin照光后第照光后第7日老化相关蛋白表达水平日老化相关蛋白表达水平 GS-Rg1各浓度干预组老化相关蛋白各浓度干预组老化相关蛋白P53, P21WAF-1 及及 P16INK-4a的表达的表达水平明显低于水平明显低于8-MOP+UVA组组

9、（P值均值均0.01），且各浓度组之间），且各浓度组之间蛋白表达水平与蛋白表达水平与GS-Rg1药物浓度有药物浓度有明显的负相关明显的负相关(r1=0.981，r2=0.916，r3=0.914)。 GS-Rg1预处理的人真皮成纤维细胞显示出较强的氧化应激耐预处理的人真皮成纤维细胞显示出较强的氧化应激耐受性，细胞内基因氧化产物受性，细胞内基因氧化产物8-oxo-dG产生明显减少；产生明显减少； GS-Rg1预处理的细胞端粒结构中相应碱基损伤较光老化模型预处理的细胞端粒结构中相应碱基损伤较光老化模型组明显减弱，端粒结构稳定性加强，端粒缩短减缓；组明显减弱，端粒结构稳定性加强，端粒缩短减缓； GS

10、-Rg1预处理的细胞由于端粒缩短减缓，其对老化检查点的预处理的细胞由于端粒缩短减缓，其对老化检查点的激活受抑制，老化相关蛋白表达水平明显降低；激活受抑制，老化相关蛋白表达水平明显降低； 综上所述：综上所述：GS-Rg1预处理可阻止基因损伤后对细胞老化预处理可阻止基因损伤后对细胞老化P53检查点的激活，抑制其后细胞周期激酶抑制剂检查点的激活，抑制其后细胞周期激酶抑制剂P21WAF-1 及及 P16INK-4a的表达，减弱两者对细胞周期激酶的表达，减弱两者对细胞周期激酶CDK的抑制作用，的抑制作用，使得使得CDK得以和核因子得以和核因子Rb蛋白结合，蛋白结合，Rb蛋白磷酸后促进细胞蛋白磷酸后促进细胞生长周期相关基因进行转录，使得细胞恢复分裂活性。生长周期相关基因进行转录，使得细胞恢复分裂活性。 对照黄芩苷UVAUVA+黄芩苷01234#端粒长 度端粒长 度对照黄芩苷UVAUVA+黄芩苷01234#p53对照黄芩苷UVAUVA+黄芩苷0.00.51.01.52.02.5#p16对照黄芩苷UVAUVA+黄芩苷0.00.51.01.5#c-mycp53p16c-myc对照黄芩苷UVAUVA+黄芩苷02468#p16蛋白表达 水 平对照黄芩苷UVAUVA+黄芩苷0.00.51.01.5#c-myc蛋白表达 水 平“Traditonal 激