9抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt生物技术实验教学中心

1、 1. 抗菌药物敏感性试验是测定抗生素或其他抗微生物制剂在体外抑制细菌生长的能力。这种能力可以通过稀释或扩散方法来测定。 1）稀释法敏感性试验 为了定量测定抗菌药物的活性，抗菌药物与肉汤或琼脂培养基混合进行稀释，然后种入试验细菌，孵育过夜，能抑制细菌生长的最低浓度称为该制剂的最低抑菌浓度(mic) ，然后将mic 与机体血清或体液中可获得药物浓度相比较，来确定恰当的临床疗效。2）纸片扩散法敏感性试验 将含有一定量抗菌药物的纸片贴在已接种试验菌的琼脂平板上，通过纸片上抗生素的扩散形成不同的药物浓度梯度，在距离纸片一定距离的范围内试验菌的生长受到抑制。这种抑制作用与细菌的敏感性及其他因素相关。抗菌

2、药物敏感性试验目的：1）指导临床医师对各类患者选择最佳抗菌药物。2）在一定区域内积累对公共卫生有关的重要耐药的微生物流行病学资料。内酰胺类：内酰胺类：抑制细胞壁合成。抑制细胞壁合成。青霉素类：青霉素类： 青霉素青霉素g、苯唑西林、阿莫西林、氨苄西林、苯唑西林、阿莫西林、氨苄西林头孢菌素类：头孢菌素类： 头孢拉定等；头孢呋辛头孢拉定等；头孢呋辛 ；头孢他啶；头孢吡肟；头孢他啶；头孢吡肟其他：其他： 亚胺培南、氨曲南、头孢西丁、氨苄西林亚胺培南、氨曲南、头孢西丁、氨苄西林/舒巴坦舒巴坦 氨基糖苷类：氨基糖苷类： 大环内酯类：大环内酯类： 喹诺酮类：喹诺酮类： 1）敏感：）敏感： 由被测细菌引起的感

3、染，除禁忌症外，可用该抗菌药物常用推荐剂量通过恰当治疗而达到治疗目的。2）中介：）中介： 被测菌株对该药物的mic 接近于血液、组织中通常可达到的浓度，而治疗反应率可能低于敏感菌株。3）耐药：）耐药： 被测菌株不能被该抗生素的常用剂量，在组织内或血液中达到的浓度所抑制，提示该菌可能存在特定耐药机制(如产-内酰胺酶) ，而且治疗研究表明其临床疗效不可靠。抗菌药物敏感性试验结果判断：用用水解酪蛋白（水解酪蛋白（mh）培养基）培养基将抗生素作不同浓度将抗生素作不同浓度的稀释，然后接种待测细菌，定量测定抗菌药物对被的稀释，然后接种待测细菌，定量测定抗菌药物对被测菌的最低抑菌浓度测菌的最低抑菌浓度(mi

4、c)或最低杀菌浓度（或最低杀菌浓度（mbc）。）。 是一种结合稀释法和扩散法原理对微生物药敏试验直接定量是一种结合稀释法和扩散法原理对微生物药敏试验直接定量的技术。的技术。8.联合药物敏感试验联合药物敏感试验1）方法很多，其中纸片法最为常用。先将试验菌均）方法很多，其中纸片法最为常用。先将试验菌均匀涂布于培养基表面，盖好平皿，放置匀涂布于培养基表面，盖好平皿，放置5分钟，待分钟，待平板表面水分吸收后，将两种含药纸片贴于平板平板表面水分吸收后，将两种含药纸片贴于平板上，两纸片中心距离上，两纸片中心距离2-4mm左右。然后左右。然后35 孵育孵育过夜，取出观察结果。过夜，取出观察结果。2）结果判断

5、）结果判断联合药物敏感试验可出现四种结果：联合药物敏感试验可出现四种结果：a.无关作用：无关作用： 甲甲+乙乙=甲单或乙单甲单或乙单b.拮抗作用：拮抗作用： 甲甲+乙甲单或乙单乙甲单或乙单c.相加作用：相加作用： 甲甲+乙乙=甲单甲单+乙单乙单d.协同作用：协同作用： 甲甲+乙甲单乙甲单+乙单乙单1. m-h平板：直径为90mm，厚度 4mm。2. 菌悬液制备：无菌挑取菌落于无菌生理盐水中，校 正浊度至0.5 麦氏。3. 用无菌棉签浸入细菌悬液中，将棉签在试管壁上轻 轻挤压以挤去过多的菌液，用棉签以连续划线的方式均匀涂抹琼脂平板表面三次（每次转60）使菌液均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。盖上

6、平板的盖子，放置310min。 1.菌液稀释： 将已稀释好的0.5麦氏的待测菌做200倍稀释；2.抗生素稀释： 取无菌离心管11支，每管加入250ul m-h液体培养基，在第1孔内加入浓度为5120ug/ml的抗生素250ul，混匀；吸取250ul此液体至第2孔中，混匀；依次倍比稀释至第11孔.3.每人取无菌聚苯乙烯板条一条，共12孔；第1-11孔每孔加入100ul加抗生素，第12孔加100ulm-h液体，做对照；4.每个孔加入100ul浓度为105菌悬液（大肠或金葡），混匀，胶布封口，37c培养。 5.观察浊度，凡孔底清晰或不出现细菌沉淀的最低药物浓度即为该抗生素对被测菌的最低抑菌浓度（mic）。五、质量控制：五、质量控制：每批或每次实验时应根据测试菌种类分别选用标准每批或每次实验时应根据测试菌种类分别选用标准菌株在同一试验条件下进行测定。菌株在同一试验条件下进行测定。 如：金黄色葡萄球菌如：金黄色葡萄球菌atcc25923 大肠埃希菌大肠埃希菌atcc25922 粪肠球菌粪肠球菌atcc29212 铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌atcc27853等等六、影响因素：六、影响因素：1. 培养基：培养基：厚度，厚度，ph，离子浓度，成份，添加剂；，离子浓度，成份，添加剂；2. 抗菌药物的配制方法，抗菌药物的配制方法，纸片