血清天门冬氨酸氨基转移酶IFCC推荐方法测定.doc

1、血清天门冬氨酸氨基转移酶IFCC 推荐方法测定1.实验原理：国际临床化学学会(IFCC)推荐的紫外连续监测法。L-天门冬氨酸+-酮戊二酸AS T草酰乙酸+L- 谷氨酸+MDH苹果酸脱氢酶+草酰乙酸+NADH+HL- 苹 果 酸 +NAD +H2O2.标 本 ：2.1病人准备：12 小时禁食。2.2类型：血清，肝素或 EDTA血浆。3. 标本存放：3 天内的活性损失：28保存：8%；1525保存：10%；标本稳定性：-20 保存至少可稳定 3个月。4. 标本运输：常温条件下保存运输。5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。6. 实验材料6.1试 剂 ： 申 能 AST 测 定 试 剂 盒

2、（ 货 号 ： 141 260171701试 剂 1 ： 6 64ml ；试 剂 2 ： 6 16ml ）6.1.1试剂组成试 剂 1（ R1）：Tris缓 冲 液pH7.880mmol/LL-天门冬氨酸240mmol/LMDH(苹果酸脱氢酶) 600U/LLDH(乳酸脱氢酶) 600U/L试 剂2(R2) ：a- 酮 戊 二 酸12mmol/LNADH0.18mmol/L磷酸吡哆醛试剂：Good s 缓 冲 液pH9.60.7mmol/L磷酸吡哆醛0.09mmol/L6.1.2试剂准备：试剂为即用式。6.1.3试剂稳定性与贮存试剂保存于 28，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6.1.

3、4变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。6.1.5注 意 事 项 ：试 剂 中 含 叠 氮 钠（ 0.95g/L ）为 防 腐 剂 。不 可 入 口 ！避 免 接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。6.2校 准 品 ： 使 用 DiaSys 公 司 提 供 的 TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。6.3质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。7. 仪器：贝克曼 AU680 生化分析仪8. 操作步骤8.1项目基本参数：参见生化检验贝克曼AU680生化分析仪项

4、目测定参数.SOP 文件8.2仪器操作步骤：参见生化检验贝克曼 AU680 生化分析仪操作规程.SOP 文件9. 检验结果的判断与分析10.质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平 I 与 II 质控做为未知标本进行分析，以 2S 为质控警告限，3S 为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP 文件。11.计 算 方 法 ： 以 TruCal U 复 合 校 准 品 AST 校 准 值 校 准 仪 器 后 ，在 病 人 结 果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。不使用校准品进行 AST 活力检 测 ， 可 以 直 接 使 用A/min均值乘以计算因

5、子得到结果，但是这样所得结果的可靠性不如使用校准品。计算 ALT 活力的计算因子见下表：A/min因 子= AST 活 力 U/L底物起始的反应（37）样品起始的反应（37）340 nm21431745334 nm21841780365 nm3971323512.参考值范围 4 不含磷酸吡哆醛含磷酸吡哆醛女 性31U/L10 35U/L男 性37U/L10 50U/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13. 临床意义1,2丙氨酸氨基转移酶（ ALT）旧称谷丙转氨酶（ GPT），天门冬氨酸氨基转移酶（ AST）旧称谷草转氨酶（ GO

6、T）。它们是氨基转移酶类的典型代表。氨 基转移酶催化氨基从氨基酸转移给-酮酸的反应。ALT 是肝脏的特异性酶，仅在肝胆疾病时显著升高。而 AST 水平的升高和心肌或骨骼肌损伤，以及肝组织损害等都有关。因此同时进行 ALT 和 AST 的检测用于鉴别肝损伤和心肌或骨骼肌损伤。AST/ALT 比率可用于肝病的鉴别诊断。比率1 和严重肝病有关，常见慢性肝病。14. 操作性能14.1线 性 范 围 2-800U/L。14.2 精密度：精密度的评估是根据 NCCLS推荐的标准方法，AU680 批内精密度小于 3%，总精密度小于 3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。不含磷酸吡哆醛

7、批内精密度xsCV天间精密度xsCVn=20(U/L)(U/L)(%)n=20(U/L)(U/L)(%)样品 125.10.823.25样品 0样品 251.31.573.06样品 248.60.671.38样品 31160.900.77样品 31150.800.69含磷酸吡哆醛批内精密度xsCV天间精密度xsCVn=20(U/L)(U/L)(%)n=20(U/L)(U/L)(%)样品 1样品 144.01.593.61样品 274.51.792.41样品 277.03.053.97样品 31743.181.83样品 31873.371.8014

8、.3 方法学比较：不含磷酸吡哆醛本 公 司 不 含 磷 酸 吡 哆 醛 的 试 剂 盒 (y) 与 某 商 品 化 试 剂 盒 (x) ，同 时 对 78 个样品进行 AST活力检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=0.98x-0.51U/L； r =0.999 。含磷酸吡哆醛本 公 司 含 磷 酸 吡 哆 醛 的 试 剂 盒 (y) 与 某 商 品 化 试 剂 盒 (x) ，同 时 对 80 个 样品进行 AST 活力检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=0.97x-0.79U/L； r=0.995 。14.4灵敏度：本试剂的检测限为 2U/L 。14.5病人结果可报

9、告范围 2-800U/L 。15.超出范围结果处理：本法对 AST活力检测的最大A/min 在 340 、 334nm为 0.16 ， 在 365nm 为 0.08。 当 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 ， 应 将 样 品 用 9g/L氯化钠溶液作 1+9 稀释，重新测定，结果乘以 10。16.病危报警值的处理无。17. 方法局限性17.1本 法 对 AST 活 力 检 测 的 最 大 A/min在 340 、334nm 为 0.16, 在 365nm 为0.08。 当 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 ， 应 将 样 品 用 9g/L 氯 化 钠 溶 液 作 1+9 稀 释 ，

10、重新测定，结果乘以 10。17.2干 扰 物 质 ： 当 样 品 中 抗 坏 血 酸 浓 度 1704 mol/L ， 胆 红 素 浓 度684mol/L ， 甘 油 三 酯 浓 度 22.6mmol/L时没有观察到干扰。红细胞内富含18. 补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。19. 参考文献：1.ThomasL.AlanineaminotranSHerase(ALT),AspartateaminotranSHerase (AST) . In： Thomas L, editor. Clinical LaboratoryDiagnostics.1s ted.Frankfurt：

11、TH-BooksVerlagsgesellschaft;1998.p.55-65.2.MossDW, HendersonAR. Clinicalenzymology.In： BurtisCA,AshwoodER.editors.TietzTextbookofClinicalChemistry.3 r ded.Philadelphia： W. B. Saunders Company; 1999. P.617-721.3.BergmeyerHU,HorderM,RejR.InternationalFederationofClinicalChemistry (IFCC) Scientific Committee, Analytical section：approvedrecommendation(1985)on IFCCmethodsforthemeasurementof catalyticconcentrationofenzymes.Part3.IFCCmethodforalanineaminotranSHerase(L-alanine：2-oxoglutarateaminotranSHerase,EC). J Clin Chem Clin Biochem 1986; 24： 481-95.4.LorentzK,RohleG,S