豆制品、火锅、麻辣烫等食品中喹诺酮类化合物测定(BJS,09)

1、豆制品、火锅、麻辣烫等食品中囈诺酮类化合物测定 (BJS.09)豆制品、火锅、麻辣烫等食品中唾诺酮类化合物的测定BJS2021091范围本标准 规定了豆腐、豆干、火锅底料、麻辣烫底料及火锅和麻辣烫的食材中诺氟沙 星、氧氟 沙星、洛美沙星、培氟沙星、氟罗沙星、沙拉沙星、双氟沙星、司 帕沙星、环丙 沙星、达氟沙星、恩诺沙星的高效液相色谱-串联质谱检测法。本标准适用于豆腐、 豆干、火锅底料、 麻辣烫底料及火锅和麻辣烫的食材中诺氟 沙星、 氧氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、氟罗沙星、沙拉沙星、双氟沙星、 司帕沙星、 环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星的测定和确证。2 原理采用 0. lmol/LEDTA-Mcl

2、lvaine 缓冲溶液提取样品中的喳诺酮类化合物， 经离心和过滤后，上清液经 HLB 固相萃取柱净化后，用高效液相色谱 - 串联 质谱仪检测 和确证，内标法定量。3 试剂和材料以下所用的试剂，除特别注明外均为分析纯，水为 GB/T6682 规定 的一级水。3. 1 乙睛 (CH3CN) ：色谱纯。3.2 甲醇 ( CH30H) ：色谱纯。3. 3甲酸(CHOOH):色谱纯。3. 4 甲醇(CH30H)。3. 5 氨水(NH40H):浓度 25%? 28%。3.6 乙二胺四乙酸二钠 (C10H14N2Na208 ? 2H20)。3. 7 柠檬酸(C6H807 ? H20)。3. 8 磷酸氢二钠

3、(Na2HP04 ? 12H20)。3.9氢氧化钠 (NaOH)o3. 10 盐酸(HC1):含 HCI38%。3. 11 乙酸铁 (CH3COONH4) ：色谱纯。3. 12磷酸氢二钠溶液(0. 2mol/L):称取71. 63g磷酸氢二钠(3.8),用水溶解 并定容至lOOOmLo3. 13柠檬酸溶液0. Imol/L:称取21.01g柠檬酸3.7,用水溶解并定容至lOOOmLo3. MMcllvaine 缓冲溶液：将 lOOOmLO. lmol/L 柠檬酸溶液 3. 13与 625mL0. 2mol/L 磷酸氢二钠溶液 3.12混合，用盐酸或氢氧化钠调节 pH 至 4.00. 1。3.

4、15EDTA-Mcllvaine 缓冲溶液0. Imol/L :称取 60. 5g 乙二胺四乙酸二钠 3. 6至 1625mLMcllvaine 缓冲溶液 3. 14中, 超声使其溶解。3. 165%甲醇水溶液:取 5mL 甲醇 3.4 ,用水稀释至 100mLo3. 1725%氨水甲醇溶液:取 25mL M 水 3.5 ,用甲醇 3.4稀释至 100mLo3. 1 8标准品:标准品中文名称、英文名称、CAS 登录号、分子式、相对分子质量 见附录 A 表 A. 1, 纯度 299%。3. 19标准储藏液配制：分别精密称取标准品3. 18约10mg,置10mL容量瓶中， 加 入 0. 2mL 甲

5、酸 3.3 ,超声使溶解，用乙 . 腌 3. 1定容至刻度，摇匀，配制成浓度为1. Omg/mL的标准储藏液，转移至溶剂瓶中于-181以下避光保 存，有效期 6 个月。3. 20混合标准溶液的配制：准确吸取标准储藏液3. 19 ImL于100mL容量瓶中，用 甲醇 3.2定容至刻度， 配制成浓度为 O.Olmg/mL 的混合标准溶液环 丙沙星、 沙拉沙星浓度约0.015mg/niL ，于 QC以下避光保存，有效期 3个 月。3.21混合标准中间溶液的配制：准确吸取混合标准溶液3.20 lmL至10mL容 量瓶中，用甲醇3.2定容至刻度， 配制成浓度为 l.Oug/mL 的混合标准 中间溶液环

6、丙沙星、沙拉沙星浓度约l.Sug/mL，于 4工以下避光保存，临用新配。3. 22内标标准储藏液配制：分别称取笊代同位素标准品3. 18约10mg,至 10mL容量瓶中，参加 0. 2mL 甲酸 3.3,超声溶解，用乙脯 3. 1稀释至刻度， 配制 成浓度为1. Omg/mL的标准储藏液，于-18T以下避光保存，有效期6个月。3.23混合内标标准中间溶液的配制： 准确吸取内标标准储藏液 3.22 O.OlmL 于 10mL 容量瓶中，用甲醇 3.2定容至刻度，配制成浓度为 1.0ug/mL 的混合内标标准 中间溶液，于 4工以下避光保存，临用新配。3.24固相萃取小柱 500mg, 6mL：

7、HLB 柱或相当者。使用前依次以 6mL 甲醇、6mL 水活化，保持柱体湿润。4 仪器和设备 4.1 液相色谱 - 串联质谱仪：配有电喷雾离子源 ESI o4. 2分析天平：感量 0. 001g和O.OOOOIg。4. 3涡旋振荡器4. 4超声仪4. 5离心机：转速8000r/min4. 6均质器4. 7氮气浓缩仪 5 测定步骤 5.1 试样制备与保存豆制品、火锅和麻辣烫的食材从待检样 品中 取出样品约500g,用组织捣碎机充分捣碎混匀，装入洁净容器中，密封，并标明标记，于-18 “C冷冻存放。火锅底料、麻辣烫底料固体状：从待检样品中取出样品约500g,用组织捣碎机 充分捣碎混匀，装入洁净容器

8、中，密封，并标明标记，于 4工冷藏存放。半固体状：从待检样品中取出样品约500g,放入研钵中，迅速研磨均匀，装入洁净容器中，密封，并标明标记于 4C 冷藏存放。液体状：从待检样品中取出样品约500g,搅拌均匀后装入洁净容器中，密封，并标明标记，于 4工冷藏存放。5. 2样品溶液制备提取：称取 5. 0g均匀样品精确至0. 001g,置50mL离心管中，精密参加混合内标标准中间溶液3.23 0. ImL,参加20mL0. Imol/LEDTA-Mcllvaine 缓冲溶液3. 15涡旋混匀 Imin,超声提取 15min, 8000r/min离心5min,上淸液转移至 50mL容量瓶中，残渣用

9、EDTA-Mcllvaine缓冲 溶液3.15同法重复提取两次，每次 10mL,合并上 淸液至同一容量瓶中，用 EDTA-Mcllvaine 缓冲溶液 3.15定容至刻度，混匀。用滤纸过滤必要时10000r/min 离心 5min 后过滤，续滤液待净化。净化：精密吸取上述待净化液 25.0mL,以约lmL/min的流速全部通过固相小柱3.24，用 3mL5%甲醇水溶液3.16淋洗，抽干，先后以 6mL甲醇、3mL氨 水甲醇 3.17洗脱，合并甲醇及氨水甲醇洗脱液，45*氮吹至近干，准 确参加2.0mL流动相初始比例复溶液溶解残渣，过0.22uni滤膜，续滤液供 液相色谱-串联质谱仪分析。5.

10、3基质标准工作溶液的制备称取 5.0g空白试样精确至0. 001g,置50mL离 心管 中，除不参加混合内标标准中间溶液外，其余同 5.2操作处理后得到空 白基质， 共制备 6份。分别精密吸取混合标准中间溶液 3. 21 0mL、 0. 010mL、 0. 020mL、 0. 050mL、 0. lOOmL、0. 200mL及混合內标标准中间溶液3. 230. 025mL于试管中，氮吹至近 干， 精密参加 l.OmL 空白基质复溶，过 0.22um 滤膜，制成浓度为 Ong/mL.lOng/mL, 20ng/mL. 50ng/mL. lOOng/mL. 200ng/mL 的基质标准工作溶液环

11、丙沙 星、沙拉沙星浓度为 Ong/mL, 15ng/mL. 30ng/mL, 75ng/mL 、 150ng/mL. 300ng/mL, 同位素内标浓度约 25ng/mL 05.4测定5. 4. 1液相色谱参考条件1色谱柱:C18色谱柱,2. lmmX50nunX1.7uni,或性能 相当者。2柱温： 40Co3流速： 0. 25mL/mino4进样量： 2uLo5 流动相：A-5mmol/L乙酸铁水溶液含0. 1%甲酸，B-乙睛。梯度洗脱条件见表 lo表1梯度洗脱条件时间 minA % B % 质谱 参考条件 1电离方式:电喷雾电离 ESI；2扫描方式：正离子扫描；3检测方式：多反响监测 M

12、RM ；4离子源参数参考条件：离子源接口电压， 4000V ；离子源接口温度， 3509；脱溶剂温度， 25 TC；离子源加热温度， 40CTC;雾化气流速， 2. 9L/min ；枯燥气流速 , 10.0L/min；加热气流速， 10. OL/mino5 定性离子对、定量离子对参见表2。表 2 喳诺酮类药物主要质谱参数序号组分母离子子离子Q1 预四极杆电压碰撞电 压 Q3预四极杆电压 m/z m/z V V eV 1 诺氟沙星320. 2*302. 0-16-21-21231. 1-15-39-252 氧氟沙星362. 2*318. 2-30-18-24261. 1-30-28-193 洛美

13、沙星352. 0*265. 0-25-23-29308. 0-25-17-224 培氟沙星334. 0290. 1-25-18-20*316. 2-25-21-225 氟罗沙星370. 0*326. 0-30-20-23269. 0-29-28-266 沙拉沙星386. 2342. 0-15-19-25299. 1-29-30-20*368. 1-14-22-267 双氟沙星400. 0*356. 0-17-20-25299. 0-17-28-288 司帕沙星393. 0*349. 0-30-21-28292. 0-30-21-249 环丙沙星332. 1*314. 1-25-21-22287

14、. 8-24-17-30231. 0-25-40-4010 达氟沙星358. 0*340. 1-26-23-24283. 2-14-24-3082. 1-26-44-1511 恩诺沙星360. 0*342. 1-27-20-25316. 0-13-20-22245. 2-28-27-1712D8- 环丙沙星340. 3322. 1-10-21-2213D5-恩诺沙星 365. 1321. 1-11- 19-2214D5-诺氟沙星 325.3307. 2-10-20-21 注: 1. “* 表示定量离子；2?所列质谱参考条件是在岛津 LC/MS-8050 质谱仪上完成的，此处所列试验用 仪 器型

15、号仅供参考， 不涉及商业目的， 鼓励方法使用者尝试不同厂家或型号 的仪器； 3?对不同质谱仪，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最正确；4. 由于喽诺酮类化合物离子化受基质干扰较为显著，方法使用者可根据实际情况选择表中所列离子对进行定性定量测定。5. 4. 3标准曲线绘制取基质标准工作溶液5. 3按浓度由低到高依次进样检测，内标法绘制标准曲线。5. 5定性在相同实验条件下，试样中待测物质的保存时间与标准工作溶液中对应的保留时间偏差应在 2. 5%之内；且试样谱图中各组分定性离子的相对丰度与标准工作溶液定性离子的相对丰度， 其允 许偏差不超过表 3 规定的范围时，那么可确定为样品中存

16、在此种待测物。 基质标准 溶液多反响监测 MRM 典型图谱见附录 B。表 3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度,%50%20%? 50% 10%? 20%八10%允许的相对偏差， 20% 5% 0%芳0%5. 6定量待测样 液中唾诺酮药物的响应值应在标准曲线线性范围内，诺氟沙星、氧氟沙星、 培氟沙星、氟 罗沙星以氛代诺氟沙星为内标，洛美沙星、双氟沙星、环丙沙 星、达氟沙星以氛 代环丙沙星为内标，司帕沙星、沙拉沙星、恩诺沙星以氛 代恩诺沙星为内标，内 标法定量。本方法中所列内标能根本满足方法要求， 如条件允许，可采用各化合 物的对应同位素化合物作为内标。6 结果计算试样测定结果按公

17、式 1 计算目标物的含量： . 1式中：X 试样中被测组分的含量，单位为微克每千克ug/kg；m 试样的称样量，单位为克 g;C 由工作曲线计算得到的试样中被测组分的浓度，单位为纳克每亳升昭/mL；V 定容体积，单位为毫升 mL。F稀释倍数计算结果需扣除空白值空白基质，并保存三位有效数字。7 检测方法灵敏度、准确度、精密度 7. 1 灵敏度诺氟沙星、氧氟沙星、洛美沙星、 培 氟沙星、氟罗沙星、双氟沙星、司帕沙星、达氟沙星、恩诺沙星检出限均 为 5 u g/kg, 环丙沙星检出限为7. 5 u g/kg,沙拉沙星检出限为7. 5 R g/kg。诺氟沙星、氧氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、氟罗沙星、双

18、氟沙星、司帕沙星、达氟沙星、恩诺沙星定量限均为 15ug/kg,环丙沙星定量限为 22.5U g/kg,沙拉沙星定量限为 22.5ug/kg07. 2准确度本方法在 15. 0? 100. Ou g/kg 的添加水平上的回收率范围为 65. 0%? 120. 0%o7. 3 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术 平均值 的 15%0附录 A 标准品信息表 A.1 标准品中文名称、英文名称、 CAS 登录号、分子式、相 对分 子质量序号化合物名称英文名 CAS 登录号分子式相对分子质量 1 诺氟沙 星 Norfloxacin70458-96-7C16H18FN3033

19、19. 332 氧氟沙星 0floxacin82419-36-lC18H20FN304361. 373 洛美沙星Lomef 1 oxacin98079-51-7C17H19F2N303351. 354 培氟沙星Pefloxacin70458-92-3C17H20FN303333. 365 氟罗沙星F1 eroxacin79660-72-3C 17H18F3N303369. 346 盐酸沙拉沙星SarafloxacinHydrochloride91296-87-6C20H18ClF2N303421. 817 盐酸双氟 沙星 D 辻 loxacinHydrochloride91296-86-5C2