《微生物的培养基》ppt课件

1、定义：指由人工配制的、适宜微生物生长繁衍或定义：指由人工配制的、适宜微生物生长繁衍或产生代谢产物用的的营养基质，混合养料。产生代谢产物用的的营养基质，混合养料。特点：任何培育基都应具备微生物所需求的六大营特点：任何培育基都应具备微生物所需求的六大营养要素碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、养要素碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水，且应比例适当。所以一旦配成必需立刻灭菌。水，且应比例适当。所以一旦配成必需立刻灭菌。第二节第二节 微生物的培育基微生物的培育基用途：促使微生物生长；积累代谢产物；分别微生用途：促使微生物生长；积累代谢产物；分别微生物菌种；鉴定微生物种类；微生物细胞计数；菌种物菌种

2、；鉴定微生物种类；微生物细胞计数；菌种保藏；制备微生物制品。因此，它是进展科学研讨，保藏；制备微生物制品。因此，它是进展科学研讨，发酵消费微生物制品等的根底发酵消费微生物制品等的根底 一、培育基的配制原那么一、培育基的配制原那么一培育基组分应适宜微生物的营养特点目的明确一培育基组分应适宜微生物的营养特点目的明确二营养物的浓度与比例应恰当营养协调二营养物的浓度与比例应恰当营养协调三物理化学条件适宜条件适宜三物理化学条件适宜条件适宜四根据培育目的选择原料及其来源经济节约四根据培育目的选择原料及其来源经济节约培育基的配制培育基的配制4 4个原那么个原那么1 1、目的明确、目的明确 培育何菌？培育何菌

3、？ 自养菌？异养菌？；自养菌？异养菌？； 种子种子菌？发酵菌？；菌？发酵菌？； 实验用？消费用？实验用？消费用？ 收获何物？收获何物？ 收获菌体？收获产物？产收获菌体？收获产物？产物成分含氮如何？物成分含氮如何？例如枯草芽孢杆菌：例如枯草芽孢杆菌：普通培育：肉汤培育基或普通培育：肉汤培育基或LB培育基；培育基；自然转化：根底培育基；自然转化：根底培育基；察看芽孢：生孢子培育基；察看芽孢：生孢子培育基；产蛋白酶：以玉米粉、黄豆饼粉为主的产酶培产蛋白酶：以玉米粉、黄豆饼粉为主的产酶培育基；育基； 根据不同的任务目的，微生物不同的营养需根据不同的任务目的，微生物不同的营养需求，运用本人丰富的生物化学

4、和微生物学知识来求，运用本人丰富的生物化学和微生物学知识来配制最正确的培育基。配制最正确的培育基。2 2、营养协调、营养协调 根本遵照根本遵照1010倍递减关系倍递减关系 注重注重C/NC/N比比 H20 H20 10-110-1 C C 10-210-2 N N 10-310-3 P P、S S 10-410-4 K K、Mg Mg 10-510-5 生长因子生长因子10-610-6培育基的配制培育基的配制4 4个原那么个原那么实验室的常用培育基：实验室的常用培育基：细菌：细菌： 牛肉膏蛋白胨培育基或简称普通肉汤培育基；牛肉膏蛋白胨培育基或简称普通肉汤培育基；放线菌：高氏放线菌：高氏1号合成

5、培育基培育；号合成培育基培育；酵母菌：麦芽汁培育基；酵母菌：麦芽汁培育基；霉菌：霉菌： 查氏合成培育基；查氏合成培育基；实验室普通培育：普通常用培育基；实验室普通培育：普通常用培育基；遗传研讨：成分清楚的合成培育基；遗传研讨：成分清楚的合成培育基；1 1选择适宜的营养物质选择适宜的营养物质营养物质的浓度适宜；营养物质的浓度适宜；营养物质之间的配比适宜；营养物质之间的配比适宜； 高浓度糖类物质、无机盐、重金属离子等不仅高浓度糖类物质、无机盐、重金属离子等不仅不能维持和促进微生物的生长，反而起到抑制或杀不能维持和促进微生物的生长，反而起到抑制或杀菌作用。菌作用。2 2营养物质浓度及配比适宜营养物质

6、浓度及配比适宜培育基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响培育基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响微生物的生长繁衍和或代谢产物的构成和积微生物的生长繁衍和或代谢产物的构成和积累，其中碳氮比累，其中碳氮比C CN N的影响较大。的影响较大。 发酵消费谷氨酸时：发酵消费谷氨酸时：碳氮比为碳氮比为4/1时，菌体大量繁衍，谷氨酸积累少；时，菌体大量繁衍，谷氨酸积累少；碳氮比为碳氮比为3/1时，菌体繁衍遭到抑制，谷氨酸产量那么大量添加。时，菌体繁衍遭到抑制，谷氨酸产量那么大量添加。3 3、理化适宜、理化适宜 1 1pH pH 2 2浸透压与水活度浸透压与水活度 3 3氧化复原电位氧化复原电位培育基的配制

7、培育基的配制4 4个原那么个原那么细菌：细菌： pH 7.08.0放线菌：放线菌：pH 7.58.5酵母菌：酵母菌： pH 3.86.0霉菌：霉菌：pH 4.05.8藻类：藻类： pH 6.07.0原生动物：原生动物： pH 6.08.0初始初始pHpH通常培育条件：通常培育条件：1 1 pH pH生长过程需求及时调理：缓冲液、生长过程需求及时调理：缓冲液、CaCO3CaCO3、NaHCO3NaHCO3及外及外源调理源调理2 2浸透压和水活度浸透压和水活度浸透压浸透压osmotic pressureosmotic pressure是某水溶液中是某水溶液中一个可用压力来量度的一个物化目的。一个可

8、用压力来量度的一个物化目的。与微生物细胞浸透压相等的等渗溶液最适宜微生物的与微生物细胞浸透压相等的等渗溶液最适宜微生物的生长；生长；高渗溶液会使细胞发生质壁分别；高渗溶液会使细胞发生质壁分别；低渗溶液那么会使细胞吸水膨胀，构成很高的膨压，低渗溶液那么会使细胞吸水膨胀，构成很高的膨压，这对细胞壁脆弱或丧失的各种缺壁细胞，例如原生质这对细胞壁脆弱或丧失的各种缺壁细胞，例如原生质体、球状体或支原体来说，那么是致命的。体、球状体或支原体来说，那么是致命的。 表示在天然或人为环境中，微生物可实践利用的表示在天然或人为环境中，微生物可实践利用的自在水或游离水的含量。自在水或游离水的含量。水活度即水活度即a

9、wawwateractivitywateractivity水活度定量涵义为：在同温同压下，水活度定量涵义为：在同温同压下，某溶液的蒸汽压某溶液的蒸汽压纯水蒸汽压纯水蒸汽压awaw该溶液的百分相对湿度值该溶液的百分相对湿度值ERHERH，equilibrium relative equilibrium relative humidityhumidityawaw3 3氧化复原电位氧化复原电位 Eh Eh 好氧性微生物：好氧性微生物：+0.1伏以上时可正常生长，伏以上时可正常生长， 以以+0.3+0.4伏为宜；伏为宜；厌氧性微生物：低于厌氧性微生物：低于+0.1伏条件下生长；伏条件下生长；兼性厌氧微

10、生物：兼性厌氧微生物：+0.1伏以上时进展好氧呼吸，伏以上时进展好氧呼吸， +0.1伏以下时进展发酵。伏以下时进展发酵。复原剂释放电子与氧化剂接受电子的趋势复原剂释放电子与氧化剂接受电子的趋势4 4、经济节约、经济节约 以粗代精、以废代好、以简代繁以粗代精、以废代好、以简代繁 以国代进等等以国代进等等培育基的配制培育基的配制4 4个原那么个原那么二二 培育基的配制培育基的配制4 4种方法种方法l生态模拟生态模拟 l参阅文献参阅文献 l精心设计精心设计 l实验比较实验比较根据成分分：根据成分分：根据形状分：根据形状分：根据主要成分或运用目的分：根据主要成分或运用目的分：根据消费工业的要求分：根据

11、消费工业的要求分：合成培育基高氏培育基、察氏培育基等合成培育基高氏培育基、察氏培育基等 半合成培育基牛肉膏蛋白胨、土豆葡萄糖培育基半合成培育基牛肉膏蛋白胨、土豆葡萄糖培育基天然培育基麦芽汁、玉米粉、麸皮、锯末等天然培育基麦芽汁、玉米粉、麸皮、锯末等 根底培育基根底培育基增殖培育基增殖培育基鉴别培育基鉴别培育基选择培育基选择培育基孢子培育基孢子培育基供制备孢子用；供制备孢子用；种子培育基种子培育基满足菌种生长；满足菌种生长；发酵培育基发酵培育基满足大消费中大量菌体生长和繁衍以及代谢产物积累满足大消费中大量菌体生长和繁衍以及代谢产物积累固体培育基固体培育基半固体培育基半固体培育基液体培育基液体培育

12、基一按培育基成分的了解作分类一按培育基成分的了解作分类1 1、天然培育基、天然培育基 用天然成分制成的培育基用天然成分制成的培育基 优点：营养丰富、价钱低廉优点：营养丰富、价钱低廉 缺陷：成分不清楚、不稳定缺陷：成分不清楚、不稳定 适于：菌种培育、发酵消费适于：菌种培育、发酵消费 例如，培育酵母菌的麦芽汁培育基等。例如，培育酵母菌的麦芽汁培育基等。2 2、组合培育基合成培育基、组合培育基合成培育基 高纯度化学试剂配制的培育基高纯度化学试剂配制的培育基 优点：成分准确、重现性高优点：成分准确、重现性高 缺陷：价钱较高、微生物生长普通缺陷：价钱较高、微生物生长普通 适于：生理、生化、代谢、菌种鉴定

13、研讨等适于：生理、生化、代谢、菌种鉴定研讨等例如，培育细菌的葡萄糖铵盐培育基，例如，培育细菌的葡萄糖铵盐培育基， 培育放线菌的淀粉硝酸盐培育基即高氏一号培育基，培育放线菌的淀粉硝酸盐培育基即高氏一号培育基， 培育真菌的蔗糖硝酸盐培育基即察氏培育基等。培育真菌的蔗糖硝酸盐培育基即察氏培育基等。3 3、半组合培育基、半组合培育基 化学试剂化学试剂 + + 天然成分天然成分 实践运用过程中大多数为半组合培育基实践运用过程中大多数为半组合培育基例如，培育真菌的马铃薯蔗糖培育基例如，培育真菌的马铃薯蔗糖培育基 等。等。四种菌的实验室常用培育基四种菌的实验室常用培育基1 1牛肉膏蛋白胨培育基牛肉膏蛋白胨培

14、育基-细菌细菌 牛肉膏牛肉膏 3g 3g ，蛋白胨，蛋白胨 10g 10g，氯化纳，氯化纳 5g 5g，琼脂，琼脂1520g1520g，水，水 1000ml 1000ml，pH7.0-7.2 pH7.0-7.2 2 2 高氏一号培育基高氏一号培育基-放线菌放线菌 可溶性淀粉可溶性淀粉 20g 20g，KNO3 1gKNO3 1g，K2HPO4 0.5g K2HPO4 0.5g ，NaCL 0.5gNaCL 0.5g，MgSO4.7H2O 0.5gMgSO4.7H2O 0.5g，FeSO4 0.01g FeSO4 0.01g ，琼脂琼脂1520g1520g，水，水1000ml pH7.2-7.4

15、 1000ml pH7.2-7.4 4种菌的实验室常用培育基种菌的实验室常用培育基3 3 马丁氏培育基马丁氏培育基-霉菌霉菌 K2HPO4 Ig K2HPO4 Ig，MgSO4.7H2O 0.5gMgSO4.7H2O 0.5g，蛋白胨，蛋白胨 5g 5g，葡，葡萄糖萄糖 10g 10g ，H2O 1000ml H2O 1000ml ，各成分溶解后，参，各成分溶解后，参与与1 1孟加拉红孟加拉红3.3ml,3.3ml,琼脂琼脂1520g 1520g 自然自然PHPH 4 4马铃薯葡萄糖培育基马铃薯葡萄糖培育基-酵母菌酵母菌 马铃薯马铃薯200g,200g,葡萄糖葡萄糖 20g , 20g ,琼脂

16、琼脂1520g , H2O 1520g , H2O 1000ml,1000ml,自然自然PH.PH.马铃薯去皮马铃薯去皮, ,切成小块切成小块, ,煮沸煮沸0.50.5小时小时, ,用纱布过用纱布过滤滤, ,再加糖或琼脂再加糖或琼脂, ,融化后补水至融化后补水至1000ml1000ml1 1固体培育基：外观呈固态的培育基固体培育基：外观呈固态的培育基 1 1天然固体培育基：天然固体状基质直接制成的培育天然固体培育基：天然固体状基质直接制成的培育基。如，麸皮、米糠、稻草粉配制的真菌培育基基。如，麸皮、米糠、稻草粉配制的真菌培育基 2 2非可逆性固体培育基：由血清凝固成或无机硅胶配非可逆性固体培育

17、基：由血清凝固成或无机硅胶配制的培育基。适宜于分别自养型微生物。制的培育基。适宜于分别自养型微生物。 3 3凝固培育基：液体培育基中参与凝固培育基：液体培育基中参与1-2%1-2%琼脂或琼脂或5-12%5-12%明胶作凝固剂，加热融化，冷却后凝固。明胶作凝固剂，加热融化，冷却后凝固。 固体培育基为微生物提供了一个营养外表，可以构固体培育基为微生物提供了一个营养外表，可以构成单个菌落，在微生物的分别、鉴定、计数、保藏成单个菌落，在微生物的分别、鉴定、计数、保藏等方面起重要作用。等方面起重要作用。 二按培育基外观的物理形状作分类二按培育基外观的物理形状作分类2 2半固体培育基：半固体培育基： 普通

18、用普通用0.2%-0.7%0.2%-0.7%琼脂作凝固剂琼脂作凝固剂 用作察看细菌的运动特征、噬菌体效价、各种用作察看细菌的运动特征、噬菌体效价、各种厌氧菌的培育机菌种保藏等。厌氧菌的培育机菌种保藏等。 3 3液体培育基：液体培育基： 不含任何凝固剂，它常用于大规模的工业不含任何凝固剂，它常用于大规模的工业消费及实验室进展微生物生理代谢等研讨。消费及实验室进展微生物生理代谢等研讨。 凝固剂必需具有的特点：凝固剂必需具有的特点：a. a. 不被微生物液化、分解和利用不被微生物液化、分解和利用b. b. 在微生物生长的范围内坚持固在微生物生长的范围内坚持固体形状体形状c. c. 凝固点的温度对微生

19、物无害凝固点的温度对微生物无害d. d. 不因消毒灭菌的高温处置而破不因消毒灭菌的高温处置而破坏坏e. e. 配制方便、价钱低廉配制方便、价钱低廉f. f. 透明度好、粘着力强透明度好、粘着力强常用的凝固剂常用的凝固剂琼脂琼脂agaragar、明胶明胶gelatingelatin、海藻酸钠海藻酸钠alginatealginate、 琼脂是最优良的凝固剂，自琼脂是最优良的凝固剂，自18801880年代开场用于配制年代开场用于配制微生物培育基以来，至今经久不衰。微生物培育基以来，至今经久不衰。1.1.根底培育基根底培育基minimum mediaminimum media 在一定条件下含有某类微生

20、物生长繁衍所需的在一定条件下含有某类微生物生长繁衍所需的根本营养物质的培育基，也称为根本培育基。根本营养物质的培育基，也称为根本培育基。三按培育基对微生物的功能分类三按培育基对微生物的功能分类2.2.加富培育基加富培育基enriched mediaenriched media 在普通培育基中参与某些特殊营养物质制成的在普通培育基中参与某些特殊营养物质制成的一类营养丰富的培育基。用来培育营养要求比较苛一类营养丰富的培育基。用来培育营养要求比较苛刻的异养型微生物。刻的异养型微生物。Eg. 培育百日咳博德氏菌培育百日咳博德氏菌Bordetella pertussis需需求含有血液的加富培育基。求含有

21、血液的加富培育基。 这些特殊营养物质包括血液、血清、酵母浸膏、动植这些特殊营养物质包括血液、血清、酵母浸膏、动植物组织液等。物组织液等。3.3.增殖培育基增殖培育基complete mediacomplete media 在普通培育基中参与一些某种微生物特别喜欢的营养在普通培育基中参与一些某种微生物特别喜欢的营养物质，添加这种微生物的繁衍速度，逐渐淘汰其他微生物，物质，添加这种微生物的繁衍速度，逐渐淘汰其他微生物，这种培育基称为增殖培育基。常用于菌种挑选。这种培育基称为增殖培育基。常用于菌种挑选。Eg. 要分别出能利用石蜡油进展发酵的酵母菌，要分别出能利用石蜡油进展发酵的酵母菌，只需在配方里运

22、用石蜡油作碳源。只需在配方里运用石蜡油作碳源。4.4.选择性培育基选择性培育基selected mediaselected media 一类根据某微生物的特殊营养要求或其对某化学、一类根据某微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理要素的抗性而设计的培育基，具有使混合菌样中的物理要素的抗性而设计的培育基，具有使混合菌样中的优势菌变成优势菌的功能，广泛用于菌种挑选等领域。优势菌变成优势菌的功能，广泛用于菌种挑选等领域。例如，在培育基中参与链霉素、氯霉素可以抑例如，在培育基中参与链霉素、氯霉素可以抑制原核微生物的生长，这种培育基用于分别真制原核微生物的生长，这种培育基用于分别真菌。菌。 用于鉴别某种或

23、某一类微生物的培育基。用于鉴别某种或某一类微生物的培育基。 普统统过参与某些试剂，使某种或某类微生物普统统过参与某些试剂，使某种或某类微生物的菌落发生颜色变化，便于区别。的菌落发生颜色变化，便于区别。 5.5.鉴别培育基：鉴别培育基：EMBEMB培育基培育基 伊红伊红 美蓝美蓝-苯胺染料，抑制苯胺染料，抑制G+G+菌菌 低酸下低酸下-两种染料结合两种染料结合 大肠杆菌分解乳糖产酸大肠杆菌分解乳糖产酸 - -菌落深紫色、菌落外表有绿色金属光泽菌落深紫色、菌落外表有绿色金属光泽 鉴别培育基也具有选择革兰氏阴性菌的作用。鉴别培育基也具有选择革兰氏阴性菌的作用。 四发酵工厂的培育基四发酵工厂的培育基1

24、. 1.孢子培育基孢子培育基: :供菌种繁衍孢子供菌种繁衍孢子2.2.种子培育基种子培育基: :供孢子发芽、生长和大量繁衍供孢子发芽、生长和大量繁衍菌丝体，并使菌丝体长得粗壮，成为活力强菌丝体，并使菌丝体长得粗壮，成为活力强的的种子种子. . 3.3.发酵培育基发酵培育基: :是供菌体生长、繁衍和合成产是供菌体生长、繁衍和合成产物之用。物之用。 三、培育基的配制三、培育基的配制配料配料溶解溶解调调pHpH过滤过滤分装分装灭菌灭菌包扎包扎摆斜面摆斜面储存储存1.1.配料配料 在容器中参与少量水在容器中参与少量水按照配方正确称取各种药品依次参与按照配方正确称取各种药品依次参与自然水自然水蒸馏水蒸馏

25、水加足所需水量加足所需水量2.2.溶解溶解 加热溶解，特别是加有琼脂的培育基，一定要加热溶解，特别是加有琼脂的培育基，一定要煮沸，琼脂的熔解温度煮沸，琼脂的熔解温度9597 ，且需求边加热边，且需求边加热边搅拌以防止烧焦搅拌以防止烧焦(小火煮沸小火煮沸2030分钟分钟,沸腾期间留意沸腾期间留意补水补水)3.3.调调pHpH 用用1N的盐酸或的的盐酸或的1N NaOH把培育基调理到把培育基调理到所要求的值。所要求的值。4.4.过滤过滤滤纸或棉花进展过滤。滤纸或棉花进展过滤。5.5.分装分装普通培育基放在三角瓶或试管中灭菌运用普通培育基放在三角瓶或试管中灭菌运用静置培育静置培育:那么那么100 ml培育基培育基250 ml的三角瓶，最多的三角瓶，最多不能超越不能超越150 ml培育基培育基250 ml的三角瓶，否那么灭的三角瓶，否那么灭菌时培育基沸腾容易污染棉塞，