《SOD生产汇报》ppt课件

1、SOD酶的消费指点教师：张立秋组员：高亚平 李婷 洪丽 魏颖 宋雪君SOD简介 SOD是一种金属酶，含有铜和锌两种离子，需氧生物中，SOD催化使对抗体有关的超氧阴离子变成双氧水，随后被双氧水酶分解，维护机体免受超氧阴离子的影响，是一种新型的抗氧化酶。 超氧化物歧化酶，别名肝蛋白，SOD是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。对人体不断地补充SOD具有抗衰老的特殊效果。目录工程一. SOD酵母菌的鉴定与挑选工程二. SOD酵母菌的发酵工程三. SOD的分别提取 SOD酵母菌的鉴定与挑选 经振荡培育后的诱变菌种运用正交实验设计的方法采用四个要素三 个程度选出最适的菌

2、种培育基，进展进一步的发酵培育。在发酵罐中参与最适培育基成分和 适宜的酵母菌诱变菌种进展发酵扩培，最终获得大量的菌种和发酵产物。 SOD酵母菌的发酵1固体培育基的制备2接种培育3液体培育基的制备4 发酵培育，察看记录1、固体培育基的制备1称量 按培育基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或外表皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。2溶化在上述烧杯中可先参与少于所需求的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。3调pH在未调pH前，先用 精细pH试纸丈量培育基的原始pH值，假设pH偏酸，用滴管向培育基中逐滴参与1mol/L NaOH，边加边搅拌

3、，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达76。4过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利结果的察看。普通无特殊要求的情况下，这一步可以省去(本实验无需过滤)。 5分装 按实验要求，可将配制的培育基分装入试管内或三角烧瓶内 6加塞 培育基分装终了后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培育基内而呵斥污染，并保证有良好的通气性能。 7包扎 加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。 8标志 用记号笔注明培育基称号、组别、日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结方式扎好，运用时容易解开，同样用记号笔注明培育基称号、组别、

4、日期。 9灭菌 将上述培育基以105kg/cm215磅/英寸2，1213， 20分钟高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，那么应放入冰箱内暂存。3、液体培育基的制备 1、牛肉膏蛋白胨培育基 成分：牛肉膏1.5g、蛋白胨5g、NaCl2.5g由于没有加糖而导致未能培育出酵母菌 2、麦芽汁培育基的制备 1破碎麦芽不宜过碎，否那么影响过滤 2糖化，将破碎后的麦芽参与500ml的蒸馏水，参与淀粉水解酶，在45水浴中保温30min，升温至70，保温1h，其间不断搅拌。 3检测，用碘液检测糖化程度。糖化液未变色表示糖化完全。 4过滤，运用多层纱布过滤糖化液，将滤液煮沸。 5参与鸡蛋清高温后过滤， 6灭菌

5、，在高压蒸汽灭菌锅中，121，0.1兆帕，20min4、 发酵培育，察看记录10倍倍100倍倍后续又用碘液进展了染色，察看到淀粉粒，查阅资料后得知为酵母肝糖，但未记录sod的提取1菌液和搜集，将三角瓶中的菌液分装至离心管中，3000rpm离心10min，搜集沉淀用pbs缓冲液冲洗1次。菌液分装时发现酵母菌具有产气的特性，导致离心管的盖子不能盖上，故改为用少量多次的方法进展离心。 2破碎，每克菌液参与氯仿-异丙醇1：33ml，搅拌2h，3000rpm离心30min，搜集上清。 3纯化，将清液缓慢参与硫酸铵至 75%饱和度 8.7g/100ml过程充分搅拌5至分层，离心3000rpm 取沉淀。so

6、d的检测利用邻苯三酚在碱性条件下能迅速自氧化，释放出O2-，生成带色的中间产物。反响开场后先变成黄绿色，几分钟后转为黄色，线性时间维持在34min。参与酶液那么抑制其自氧化速度，在325nm处测定溶液的吸光度。酶活性单位采用1mL反响液中每分钟抑制邻苯三酚自氧化速率达50%时的酶定量为一个活力单位。试液试液空白空白酶提取液酶提取液1 1C C液液/mL/mL2.352.352.352.35磷酸缓冲液磷酸缓冲液/mL/mL2 21.51.5样液样液/mL/mL0 00.50.5D D液液/mL/mL0.150.150.150.15于于10mL10mL比色管中立刻混合均匀然后倾入比色比色管中立刻混

7、合均匀然后倾入比色皿皿SOD活性测定加样表式中式中: :U/mLU/mL一一SODSOD酶活力单位酶活力单位; ;A325A325一邻苯三酚自氧化速率一邻苯三酚自氧化速率; ;A325A325一样液或一样液或SODSOD酶液抑制邻苯三酚自氧化速率酶液抑制邻苯三酚自氧化速率; ;V V一所加酶液或样液体积，单位为毫升一所加酶液或样液体积，单位为毫升(mL);(mL);D D一酶液或样液的稀释倍数一酶液或样液的稀释倍数; ;V1V1一样液总体积，单位为毫升一样液总体积，单位为毫升mLmL；m m一样液质量，单位为克一样液质量，单位为克g g4.54.5一反响液总体积，单位为毫升一反响液总体积，单位

8、为毫升(mL)(mL)。计算结果保管三位有效数字。计算结果保管三位有效数字。检测数据1组组2组组3组组4组组平均值平均值空白0.1310.1160.1330.940.119样液0.1010.1090.1050.1100.106SOD活力 =1*0.21*4.5*500.1190.01300=5.175 电泳那么采取垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳。既可采用SOD活性正染色呈现棕色区带也可采取SOD活性负染色呈现无色透明区带。根据凝胶上电泳分别的SOD区带的着色深浅与面积大小，对样品进展半定量分析，也可制造校正曲线计算样品中的SOD含量。染色定位法常用于鉴定SOD，很少为了定量，主要缘由是它不及化学法简便，但鉴定SOD却较化学法为优。用电泳法可鉴定SOD能否掺有杂质蛋白，有无同工酶，且可半定量地确定SOD的活性