动物胚胎移植技术及体外受精

1、动物胚胎移植技术及体外受精 第四章第四章动物胚胎工程技术及体外受精动物胚胎工程技术及体外受精 动物胚胎移植技术及体外受精动物胚胎移植技术及体外受精现代生物技术现代生物技术家畜育种领域家畜育种领域繁殖生繁殖生物技术物技术分子生分子生物技术物技术人工受精技术人工受精技术胚胎工程技术胚胎工程技术 超数排超数排卵和胚卵和胚胎移植胎移植胚胎性胚胎性别鉴定别鉴定体外体外受精受精胚胎胚胎分割分割克隆克隆技术技术动物胚胎移植技术及体外受精第一节第一节 胚胎工程技术胚胎工程技术o胚胎移植胚胎移植o胚胎融合胚胎融合o胚胎分割胚胎分割o胚胎的冷冻保存胚胎的冷冻保存o早期胚胎培养早期胚胎培养o胚细胞核移植胚细胞核移植

2、动物胚胎移植技术及体外受精动物胚胎移植技术及体外受精一、胚胎移植一、胚胎移植o受精卵移植受精卵移植n把一头雌性动物的早期胚胎从输卵管或子宫把一头雌性动物的早期胚胎从输卵管或子宫中冲洗出来，移植到另一头雌性动物的输卵中冲洗出来，移植到另一头雌性动物的输卵管或子宫内，使之继续发育成新个体的技术。管或子宫内，使之继续发育成新个体的技术。o供体供体n提供胚胎的动物提供胚胎的动物o受体受体n接受和孕育胚胎的动物接受和孕育胚胎的动物动物胚胎移植技术及体外受精o成年母畜卵巢上存在数千到上万个卵泡，在外成年母畜卵巢上存在数千到上万个卵泡，在外源激素作用下，每个发情期的卵泡发育和排卵源激素作用下，每个发情期的卵

3、泡发育和排卵数可达数十个数可达数十个o每个发情周期生殖器官都有一个孕向发育每个发情周期生殖器官都有一个孕向发育o早期胚胎处于游离状态早期胚胎处于游离状态o胚胎发育不存在免疫问题胚胎发育不存在免疫问题o胚胎发育到一定阶段会与子宫发生生理和组织胚胎发育到一定阶段会与子宫发生生理和组织联系联系o胚胎的遗传性不受受体的影响胚胎的遗传性不受受体的影响动物胚胎移植技术及体外受精2. 2. 胚胎移植的基本原则胚胎移植的基本原则o胚胎移植前后所处的环境的同一性胚胎移植前后所处的环境的同一性n供体和受体在分类学上的相同属性供体和受体在分类学上的相同属性n动物生理上的一致性：受体和供体在发情时间上的动物生理上的一

4、致性：受体和供体在发情时间上的同期性同期性n动物解剖位置上的一致性：空间环境的一致性动物解剖位置上的一致性：空间环境的一致性o胚胎的发育期限：胚胎的发育期限：必须处于周期黄体期内必须处于周期黄体期内o胚胎的质量：胚胎的质量：胚胎必须是正常的，并在处理过程中不受胚胎必须是正常的，并在处理过程中不受不良因素的影响不良因素的影响动物胚胎移植技术及体外受精3 3、胚胎移植、胚胎移植o供受体的选择与管理供受体的选择与管理o供体的超数排卵处理和配种供体的超数排卵处理和配种o受体的同期发情处理受体的同期发情处理o胚胎回收胚胎回收o胚胎检查胚胎检查o胚胎移植胚胎移植动物胚胎移植技术及体外受精1 1）供受体的选

5、择与管理）供受体的选择与管理o供体的选择供体的选择n遗传价值：生产性能优秀的母畜遗传价值：生产性能优秀的母畜n健康状况健康状况:身体健康，营养水平中等以上的身体健康，营养水平中等以上的未孕动物未孕动物n繁殖性能：达到配种年龄以上繁殖机能正常繁殖性能：达到配种年龄以上繁殖机能正常的母畜的母畜动物胚胎移植技术及体外受精o受体的选择受体的选择n身体健康，身体状况中上的适繁未孕个体，身体健康，身体状况中上的适繁未孕个体，无生殖道疾病和难产病史无生殖道疾病和难产病史n繁殖状况正常，有正常的发情周期繁殖状况正常，有正常的发情周期n母性良好：泌乳性能、护仔性能母性良好：泌乳性能、护仔性能o供、受的管理供、受

6、的管理n防疫、记录防疫、记录n饲养管理等饲养管理等动物胚胎移植技术及体外受精2 2）、超数排卵）、超数排卵o超排：以各种外源性促性腺激素诱发动物卵巢超排：以各种外源性促性腺激素诱发动物卵巢的许多卵泡发育并排出具有受精能力的卵子。的许多卵泡发育并排出具有受精能力的卵子。o孕母马促性腺激素、促卵泡素、前列腺素、促孕母马促性腺激素、促卵泡素、前列腺素、促排卵类药物、孕激素排卵类药物、孕激素o超数排卵处理的时期应选择在发情周期的后期，超数排卵处理的时期应选择在发情周期的后期，即黄体消退时期。即黄体消退时期。 动物胚胎移植技术及体外受精o个体对超排处理的反应效果难以预测；个体对超排处理的反应效果难以预测

7、；o产生不良的后果：胚胎死亡产生不良的后果：胚胎死亡o卵母细胞蛋白质合成过程发生改变卵母细胞蛋白质合成过程发生改变o生殖道机能产生影响生殖道机能产生影响动物胚胎移植技术及体外受精 3 3）同期发情（）同期发情（synchronization of synchronization of eatruseatrus）o采用激素或类激素的药物处理，使这一群母采用激素或类激素的药物处理，使这一群母畜在特定时间内集中发情和排卵。畜在特定时间内集中发情和排卵。o即将母畜的黄体期延长或缩短，使母畜摆脱即将母畜的黄体期延长或缩短，使母畜摆脱内、外孕激素对卵巢的控制，在同一时间内内、外孕激素对卵巢的控制，在同一时

8、间内引起全部母畜的卵泡发育，从而达到同期发引起全部母畜的卵泡发育，从而达到同期发情的目的。情的目的。动物胚胎移植技术及体外受精o延长黄体期：孕激素延长黄体期：孕激素 控制卵泡的生长发育和发情表现控制卵泡的生长发育和发情表现o缩短黄体期：前列腺素缩短黄体期：前列腺素 加速黄体退化，使卵巢提前摆脱体内孕加速黄体退化，使卵巢提前摆脱体内孕激素的控制激素的控制o促进卵泡发育、排卵：促性腺激素促进卵泡发育、排卵：促性腺激素 动物胚胎移植技术及体外受精4 4）胚胎回收）胚胎回收o利用冲胚液从供体的生殖道中冲洗出来，利用冲胚液从供体的生殖道中冲洗出来，提供移植或其它胚胎工程用。提供移植或其它胚胎工程用。o手

9、术法手术法o非手术法非手术法动物胚胎移植技术及体外受精动物胚胎移植技术及体外受精5 5）胚胎检查）胚胎检查胚胚胎胎早早期期发发育育动物胚胎移植技术及体外受精动物胚胎移植技术及体外受精胚胎质量评价：胚胎质量评价：o透明带的形态和完整性透明带的形态和完整性o胚胎的发育与胚龄是否一致胚胎的发育与胚龄是否一致o胚胎的形态与匀称性，胚内细胞大小的变化胚胎的形态与匀称性，胚内细胞大小的变化o细胞质的结构及颜色，胚内是否出现空泡，细胞碎片，细胞质的结构及颜色，胚内是否出现空泡，细胞碎片，有无游离细胞有无游离细胞o如如A A级：级： 为优良胚胎，形态典型，卵裂球轮廓清晰，紧密为优良胚胎，形态典型，卵裂球轮廓清

10、晰，紧密充实，大小均一，细胞质致密，色调和分布均一充实，大小均一，细胞质致密，色调和分布均一。动物胚胎移植技术及体外受精o胚胎的降温：使胚胎停止发育，延长其体外生胚胎的降温：使胚胎停止发育，延长其体外生存时间存时间o体外培养：将胚胎置于体温条件下，在培养液体外培养：将胚胎置于体温条件下，在培养液中，使其继续发育中，使其继续发育o胚胎冷冻：通过一定的处理程序，将胚胎降温胚胎冷冻：通过一定的处理程序，将胚胎降温冷冻后，保存于液氮中冷冻后，保存于液氮中6 6）胚胎的保存）胚胎的保存动物胚胎移植技术及体外受精胚胎冷冻的原理胚胎冷冻的原理o胚胎冷冻实际是脱水的过程，冷冻保存的关键胚胎冷冻实际是脱水的过程

11、，冷冻保存的关键是设法减少细胞内冰晶对胚胎的损伤。是设法减少细胞内冰晶对胚胎的损伤。o冷冻过程中，水分形成冰晶造成细胞机械损伤，冷冻过程中，水分形成冰晶造成细胞机械损伤，同时，导致未结冰的细胞内溶液渗透压急剧升同时，导致未结冰的细胞内溶液渗透压急剧升高，造成蛋白质变性，导致死胎。高，造成蛋白质变性，导致死胎。动物胚胎移植技术及体外受精o受精卵移植受精卵移植o一般供体为良种或优良个体，而受体为生产性能一般供体为良种或优良个体，而受体为生产性能较差的个体或品种。较差的个体或品种。o“借劣质动物之腹怀优秀个体之胎借劣质动物之腹怀优秀个体之胎”动物胚胎移植技术及体外受精动物胚胎移植技术及体外受精动物胚

12、胎移植技术及体外受精动物胚胎移植技术及体外受精选择选择供体母牛供体母牛受体母牛受体母牛同期发情处理同期发情处理超数排卵超数排卵供体公牛供体公牛配种配种冲卵冲卵质量检查、培养质量检查、培养胚胎移植胚胎移植妊娠检查妊娠检查分娩（胚胎移植的犊牛）分娩（胚胎移植的犊牛）胚胎移植的基本程序胚胎移植的基本程序动物胚胎移植技术及体外受精 6)6)胚胎移植的应用范围胚胎移植的应用范围o在家畜改良方面的应用在家畜改良方面的应用o在特定品种扩繁上的应用在特定品种扩繁上的应用o在动物生物多样性上的应用在动物生物多样性上的应用o其它方面应用：转基因动物、性别控制、其它方面应用：转基因动物、性别控制、体外受精体外受精动

13、物胚胎移植技术及体外受精在家畜改良方面的应用在家畜改良方面的应用o人工授精技术可成几十到几百倍地提高了人工授精技术可成几十到几百倍地提高了优秀种公畜的配种效能。但对优秀母畜来优秀种公畜的配种效能。但对优秀母畜来说，受其产仔数和世代间隔的限制，尤其说，受其产仔数和世代间隔的限制，尤其是牛羊等繁殖力较低的畜种更是如此。是牛羊等繁殖力较低的畜种更是如此。o通过超数排卵和胚胎移植技术（通过超数排卵和胚胎移植技术（multiple multiple ovulation and embryo transfer: MOET)ovulation and embryo transfer: MOET)牛羊的生长性

14、状年遗传进展可比正常繁殖牛羊的生长性状年遗传进展可比正常繁殖提高提高80%80%和和70%70%；产奶性状提高；产奶性状提高33%33%。动物胚胎移植技术及体外受精在特定品种扩繁上的应用在特定品种扩繁上的应用o牛羊等低繁殖力家畜，从引进到形成一个纯种牛羊等低繁殖力家畜，从引进到形成一个纯种群体需要群体需要7-87-8个世代，个世代，15-2015-20年。而采用年。而采用MEOTMEOT法，法，一次就可获得一个纯种群体。一次就可获得一个纯种群体。o8080年代初，美、澳、新从欧洲引进的大型肉牛年代初，美、澳、新从欧洲引进的大型肉牛品种均采用胚胎移植技术扩繁。品种均采用胚胎移植技术扩繁。o200

15、02000年前后，我国的波尔山羊也是采用胚胎移年前后，我国的波尔山羊也是采用胚胎移植进行扩繁的。植进行扩繁的。动物胚胎移植技术及体外受精在动物生物多样性上的应用在动物生物多样性上的应用o在保护动物遗传资源，提高家畜生产性能，挽救在保护动物遗传资源，提高家畜生产性能，挽救濒临灭绝的野生动物方面，胚胎移植技术越来越濒临灭绝的野生动物方面，胚胎移植技术越来越发挥出重要作用。发挥出重要作用。o冷冻能够很好地保存濒临灭绝动物的胚胎或生殖冷冻能够很好地保存濒临灭绝动物的胚胎或生殖细胞，但该种动物雌性个体的减少，也是这种动细胞，但该种动物雌性个体的减少，也是这种动物的胚胎或生殖细胞无法得到移植，科学家开始物

16、的胚胎或生殖细胞无法得到移植，科学家开始研究在该种动物的亚种或亲缘种中试验，并取得研究在该种动物的亚种或亲缘种中试验，并取得一些成功。如斑马胚胎移植给马，蒙古马胚胎移一些成功。如斑马胚胎移植给马，蒙古马胚胎移植给驴，白肢野牛移植给荷斯坦牛。植给驴，白肢野牛移植给荷斯坦牛。动物胚胎移植技术及体外受精其它方面应用其它方面应用o胚胎移植是克隆技术的必须过程胚胎移植是克隆技术的必须过程o体外受精必须借助胚胎移植实现体外受精必须借助胚胎移植实现“试管婴试管婴儿的继续发育儿的继续发育o转基因及动物生物反应器的研究也必须借转基因及动物生物反应器的研究也必须借助胚胎移植助胚胎移植动物胚胎移植技术及体外受精二、

17、胚胎分割技术二、胚胎分割技术1 1）. .概念概念: : 采用显微手术（机械方法）的方法将早期胚胎分采用显微手术（机械方法）的方法将早期胚胎分割成割成2 2分胚分胚,4,4分胚或分胚或8 8分胚分胚, ,经体内或体外培养后植经体内或体外培养后植入受体，以得到同卵双胎或同卵多胎的技术入受体，以得到同卵双胎或同卵多胎的技术. . 胚胎分割以增加优秀遗传性状的动物数量为主要目的，胚胎分割以增加优秀遗传性状的动物数量为主要目的，可提高胚胎移植技术的效率和效益。可提高胚胎移植技术的效率和效益。动物胚胎移植技术及体外受精2 2）胚胎分割的理论依据）胚胎分割的理论依据o大多数哺乳动物早期胚胎属调整发育类型，

18、去大多数哺乳动物早期胚胎属调整发育类型，去掉早期胚胎的一半，剩余的部分仍发育成完整掉早期胚胎的一半，剩余的部分仍发育成完整的胚胎。至少在的胚胎。至少在8 8细胞前，每个分裂球都有相细胞前，每个分裂球都有相同的发育能力。同的发育能力。o到晚桑椹胚时，胚胎发生初步分化，这时进行到晚桑椹胚时，胚胎发生初步分化，这时进行胚胎分割，可以重新发育到囊胚。胚胎分割，可以重新发育到囊胚。动物胚胎移植技术及体外受精2 2）. .特点特点: : 后代具有相同的遗传物质后代具有相同的遗传物质. . 胚胎克隆胚胎克隆. .3 3）. .选择的胚胎选择的胚胎: : 发育良好的发育良好的, ,形态正常的桑椹胚或囊胚形态正

19、常的桑椹胚或囊胚. .4 4）. .使用的主要仪器：使用的主要仪器： 实体显微镜和显微操作仪实体显微镜和显微操作仪5 5）. .应用应用: : 为转基因技术、性别控制技术提供活胚材料为转基因技术、性别控制技术提供活胚材料动物胚胎移植技术及体外受精注意：注意：对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要将内细胞团均对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要将内细胞团均等分割。等分割。原因：内细胞团一般到囊胚阶段才出现，它是发育为胚胎本原因：内细胞团一般到囊胚阶段才出现，它是发育为胚胎本身的基础细胞，其他细胞为滋养细胞，只为胚胎和胎儿发育身的基础细胞，其他细胞为滋养细胞，只为胚胎和胎儿发育提供营养。若分割时不能将内细胞团均

20、等分割，会出现含内提供营养。若分割时不能将内细胞团均等分割，会出现含内细胞团多的部分正常发育的能力强，少的部分发育受阻或发细胞团多的部分正常发育的能力强，少的部分发育受阻或发育不良，甚至不能发育等问题。育不良，甚至不能发育等问题。动物胚胎移植技术及体外受精胚胎分割技术也是动物克隆的方法之一胚胎分割技术也是动物克隆的方法之一 胚胎分割的份数越多，操作的难度会越大，移植胚胎分割的份数越多，操作的难度会越大，移植的成功率也越低。的成功率也越低。 早期胚胎的体积很小，只有在显微镜下才能看到；早期胚胎的体积很小，只有在显微镜下才能看到； 细胞数目是有限的：分割的份数越多，不但难以做到均等细胞数目是有限的

21、：分割的份数越多，不但难以做到均等分割，每一份的细胞数会越少，作为囊胚期的胚胎内细胞团分割，每一份的细胞数会越少，作为囊胚期的胚胎内细胞团细胞所受的影响会更大；细胞所受的影响会更大； 分割的份数越多，技术的难度会越大，移植后的恢复和发分割的份数越多，技术的难度会越大，移植后的恢复和发育的难度会越大，移植成功率自然会降低。育的难度会越大，移植成功率自然会降低。动物胚胎移植技术及体外受精 三、胚胎细胞核移植三、胚胎细胞核移植将未着床的早期胚胎分散成单个的细胞，用电融合将未着床的早期胚胎分散成单个的细胞，用电融合方法，使单个细胞与去除细胞核的未受精的成熟的方法，使单个细胞与去除细胞核的未受精的成熟的

22、卵母细胞融合。体外培养发育成胚胎后，移入受体卵母细胞融合。体外培养发育成胚胎后，移入受体妊娠产子。妊娠产子。已在小鼠、兔、山羊、牛、猴等动物上成功。已在小鼠、兔、山羊、牛、猴等动物上成功。动物胚胎移植技术及体外受精四、性别控制与胚胎性别鉴定四、性别控制与胚胎性别鉴定o动物的性别控制动物的性别控制(sex control)技术是通过对动物技术是通过对动物的正常生殖过程进行人为干预，使成年雌性动物的正常生殖过程进行人为干预，使成年雌性动物产出人们期望性别后代的一门生物技术。产出人们期望性别后代的一门生物技术。oX、Y精子分离技术：流式细胞仪精子分离技术：流式细胞仪o胚胎性别诊断胚胎性别诊断动物胚胎

23、移植技术及体外受精 早期胚胎的性别鉴定早期胚胎的性别鉴定1 1）、核型分析：分析部分胚胎细胞的染）、核型分析：分析部分胚胎细胞的染色体的组成色体的组成2 2）、）、SRYSRY片段的片段的PCRPCR扩增扩增Y染色体上染色体上的特异片段的特异片段动物胚胎移植技术及体外受精3）、）、H-YH-Y抗原：雄性特异性弱组织相容性抗原：雄性特异性弱组织相容性Y Y抗原抗原o只有只有Y Y 精子才能表达精子才能表达H-YH-Y抗原。抗原。o利用利用H-Y H-Y 抗体检测精子质膜上存在的抗体检测精子质膜上存在的H-YH-Y抗原，再通抗原，再通过一定的分离程序，就能将精子分离成过一定的分离程序，就能将精子分

24、离成H-YH-Y+ +(Y(Y精子精子) )和和H-YH-Y- -(X(X精子精子) )两类，将所需性别的精子进行人工受两类，将所需性别的精子进行人工受精，即可获得预期性别的后代。精，即可获得预期性别的后代。o测定胚胎上测定胚胎上H-YH-Y抗原的存在与否对胚胎的性别作出鉴抗原的存在与否对胚胎的性别作出鉴定定动物胚胎移植技术及体外受精意义o通过控制后代的性别比例，可充分发挥受性别限制通过控制后代的性别比例，可充分发挥受性别限制的生产性状的生产性状( (如泌乳如泌乳) )和受性别影响的生产性状和受性别影响的生产性状( (如生如生长速度、肉质等长速度、肉质等) )的最大经济效益。的最大经济效益。o

25、控制后代的性别比例可增加选种强度，加快育种进控制后代的性别比例可增加选种强度，加快育种进程。程。o控制胚胎性别还可克服牛胚胎移植中出现的异性孪控制胚胎性别还可克服牛胚胎移植中出现的异性孪生不育现象，排除伴性有害基因的危害。生不育现象，排除伴性有害基因的危害。动物胚胎移植技术及体外受精五、早期胚胎培养五、早期胚胎培养o发育阻断：早期胚胎停顿在某个特定发育发育阻断：早期胚胎停顿在某个特定发育时期，不能继续发育。时期，不能继续发育。o时间随动物种不同而异时间随动物种不同而异o培养条件不完备培养条件不完备o添加各种生长因子可促进胚胎发育添加各种生长因子可促进胚胎发育o与某些体细胞共同培养与某些体细胞共

26、同培养 饲养性细胞，通过饲养性细胞，通过分泌某些有利于胚胎发育所需的营养因子分泌某些有利于胚胎发育所需的营养因子动物胚胎移植技术及体外受精o体外受精体外受精(In Vitro Fertilization)(In Vitro Fertilization)是指哺乳动物的是指哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术，英文简称为技术，英文简称为IVFIVF。o在生物学中，把体外授精胚胎移植到母体后获得的动在生物学中，把体外授精胚胎移植到母体后获得的动物称试管动物物称试管动物(test-tube animal)(test-tube ani

27、mal)。 第二节体外受精第二节体外受精动物胚胎移植技术及体外受精我国奶牛问题.人工授精人工授精(AI)动物胚胎移植技术及体外受精一、基本原理：人工模拟体一、基本原理：人工模拟体内环境（包括营养、温度、内环境（包括营养、温度、PHPH等），使初级卵母细胞成等），使初级卵母细胞成熟，同时使精子获能，最终熟，同时使精子获能，最终完成受精作用，并有计划地完成受精作用，并有计划地保存胚胎保存胚胎动物胚胎移植技术及体外受精动物胚胎移植技术及体外受精动物胚胎移植技术及体外受精二、体外受精技术发展的历史二、体外受精技术发展的历史 体外受精研究有体外受精研究有100100多年历史多年历史o18781878年德

28、国年德国SehenkSehenk在家兔和豚鼠进行了尝试在家兔和豚鼠进行了尝试o19541954年张民觉获得首例体外受精兔年张民觉获得首例体外受精兔o19631963年金黄仓鼠体外受精获得成功，开创了精子体年金黄仓鼠体外受精获得成功，开创了精子体外获能成功的先例外获能成功的先例o19901990年我国钱菊芬获得首例试管山羊年我国钱菊芬获得首例试管山羊o旭日干、范必勤等获得试管牛犊旭日干、范必勤等获得试管牛犊动物胚胎移植技术及体外受精三、意义o体外受精技术对动物生殖机理研究、畜牧生产、医体外受精技术对动物生殖机理研究、畜牧生产、医学和濒危动物保护等具有重要意义。学和濒危动物保护等具有重要意义。o在

29、家畜品种改良中，体外受精技术为胚胎生产提供在家畜品种改良中，体外受精技术为胚胎生产提供了廉价而高效的手段，对充分利用优良品种资源，了廉价而高效的手段，对充分利用优良品种资源，缩短家畜繁殖周期，加快品种改良速度等有重要价缩短家畜繁殖周期，加快品种改良速度等有重要价值。值。o哺乳动物胚胎移植、克隆、转基因和性别控制等现哺乳动物胚胎移植、克隆、转基因和性别控制等现代生物技术不可缺少的组成部分。代生物技术不可缺少的组成部分。动物胚胎移植技术及体外受精四、体外受精技术环节四、体外受精技术环节o卵母细胞的获得和体外成熟卵母细胞的获得和体外成熟o精子的体外获能精子的体外获能o成熟卵母细胞与获能精子的体外受精

30、成熟卵母细胞与获能精子的体外受精o受精卵的体外培养受精卵的体外培养o受精卵的移植受精卵的移植动物胚胎移植技术及体外受精体外受精获能次级卵母细胞减数第二次分裂中期动物胚胎移植技术及体外受精1 1卵母细胞的获得与体外成熟卵母细胞的获得与体外成熟1 1）卵细胞的采集方法）卵细胞的采集方法获得足够数量的卵母细胞是生产试管动物的前提。获得足够数量的卵母细胞是生产试管动物的前提。（1 1）从屠宰场家畜卵巢中采集，）从屠宰场家畜卵巢中采集，（2 2）从超数排卵的卵巢获得卵泡。借助腹腔镜，手）从超数排卵的卵巢获得卵泡。借助腹腔镜，手术法取卵术法取卵（3 3）阴道超声波监视穿刺法直接从牛卵巢收集卵母）阴道超声波

31、监视穿刺法直接从牛卵巢收集卵母细胞和内窥镜借助套筒穿刺阴道穹隆获得。细胞和内窥镜借助套筒穿刺阴道穹隆获得。动物胚胎移植技术及体外受精卵母细胞的采集.动物胚胎移植技术及体外受精2 2）卵母细胞的成熟）卵母细胞的成熟o未成熟的卵母细胞的核在细胞中央，成熟过程未成熟的卵母细胞的核在细胞中央，成熟过程中迁移到动物极质膜下，核变得膨大，改称发中迁移到动物极质膜下，核变得膨大，改称发生泡，接着进行第一次成熟分裂，减数分裂的生泡，接着进行第一次成熟分裂，减数分裂的完成标志着卵母细胞核的成熟。完成标志着卵母细胞核的成熟。（1 1） 细胞核成熟细胞核成熟动物胚胎移植技术及体外受精（2 2） 细胞质的成熟细胞质的

32、成熟o显著的蛋白质合成发生在生发泡破裂前后，这些新合成的蛋显著的蛋白质合成发生在生发泡破裂前后，这些新合成的蛋白质不仅与卵细胞自身成熟有关（激活成熟促进因子），而白质不仅与卵细胞自身成熟有关（激活成熟促进因子），而且与卵母细胞输精后的发育能力直接有关。所以细胞质成熟且与卵母细胞输精后的发育能力直接有关。所以细胞质成熟的质量如何直接影响到早期胚胎的发育能力。的质量如何直接影响到早期胚胎的发育能力。o胞质成熟主要表现为细胞器变化和纺锤体的形成。胞质成熟主要表现为细胞器变化和纺锤体的形成。o卵母细胞成熟后期细胞器完成重新组装，如高尔基体消失，卵母细胞成熟后期细胞器完成重新组装，如高尔基体消失，线粒体

33、分布核的周围，胞质内有线粒体分布核的周围，胞质内有PASPAS阳性的囊膜和脂滴。阳性的囊膜和脂滴。动物胚胎移植技术及体外受精（3 3）细胞膜和透明带的成熟）细胞膜和透明带的成熟o细胞膜稳定性发生改变，膜微绒毛发生重细胞膜稳定性发生改变，膜微绒毛发生重排，表现密集而有弯曲，并从透明带内退排，表现密集而有弯曲，并从透明带内退出或断裂出或断裂o透明带外层呈网状，变软。透明带外层呈网状，变软。动物胚胎移植技术及体外受精2、体外获能o指精子在体外获得受精能力的过程。指精子在体外获得受精能力的过程。o包括在体外环境中除去精浆和精子表面吸包括在体外环境中除去精浆和精子表面吸附的大分子物质，减少表面阴性电荷，提附的大分子物质，减少表面阴性电