制造工培训鸡胚

1、鸡胚接种与抗原收获鸡胚接种与抗原收获 一一 鸡胚接种鸡胚接种学习目标：了解胚蛋接种的方法和要求，能学习目标：了解胚蛋接种的方法和要求，能 正确接种。正确接种。1、接种途径及接种日龄、接种途径及接种日龄 尿囊腔接种：尿囊腔接种：911日龄日龄绒毛尿囊膜接种：绒毛尿囊膜接种：1012日龄日龄 卵黄囊接种：卵黄囊接种：57日龄日龄 羊膜接种：羊膜接种：10日龄日龄 静脉接种：静脉接种：1213日龄日龄 脑内接种：脑内接种：10日龄日龄（1）尿囊腔接种尿囊腔接种：取：取911日龄蛋胚，在灯光照射下日龄蛋胚，在灯光照射下画气室和接种部位，消毒气室和接种部位，打孔，画气室和接种部位，消毒气室和接种部位，打

2、孔，自接种孔注入接种物，封孔，放入孵化器孵化，不自接种孔注入接种物，封孔，放入孵化器孵化，不翻蛋。翻蛋。*（2）绒毛尿囊膜接种绒毛尿囊膜接种：取：取1012日龄蛋胚，在灯光照日龄蛋胚，在灯光照射下确定接种孔的位置，射下确定接种孔的位置， 打孔，做人工气室，自接打孔，做人工气室，自接种孔接入接种物，封孔，放入孵种孔接入接种物，封孔，放入孵 化器孵化，不翻蛋。化器孵化，不翻蛋。*2、手工接种方法手工接种方法 单孔接种：在胚蛋气室的中心位置打一单孔接种：在胚蛋气室的中心位置打一小孔，垂直刺入针头小孔，垂直刺入针头2cm,注入接种物，封孔，注入接种物，封孔，放孵化器孵化。放孵化器孵化。 双孔接种：在离

3、气室双孔接种：在离气室0.30.5cm无大血无大血管处作一标记，作为接种孔的位置，管处作一标记，作为接种孔的位置， 在气室在气室和标记处各打一个孔，自接种孔注入接种物，和标记处各打一个孔，自接种孔注入接种物，封上封上 两个孔，放入孵化器孵化。两个孔，放入孵化器孵化。气室鸡胚卵黄囊尿囊腔羊膜腔绒毛尿囊膜卵白卵膜尿囊腔鸡胚接种图尿囊膜接种羊膜鸡胚接种图卵黄囊鸡胚接种图3、蛋胚消毒、蛋胚消毒常用的消毒方法：常用的消毒方法： 喷雾消毒、表面擦拭消毒脱喷雾消毒、表面擦拭消毒脱碘的消毒方法、浸泡消毒法。碘的消毒方法、浸泡消毒法。 喷雾消毒：将消毒剂喷于蛋胚表面的消毒方法。喷雾消毒：将消毒剂喷于蛋胚表面的消

4、毒方法。 表面擦拭消毒：表面擦拭消毒： 用用4%的碘酒擦拭蛋壳接种的碘酒擦拭蛋壳接种部位和气室部位，在用部位和气室部位，在用75%的酒精脱碘的消的酒精脱碘的消毒方法。毒方法。浸泡消毒：将胚蛋浸泡在消毒液中的消毒法。浸泡消毒：将胚蛋浸泡在消毒液中的消毒法。【操作技能】【操作技能】手工接种手工接种常用物品的准备常用物品的准备：注射器、锥子、止血钳、碘：注射器、锥子、止血钳、碘酒棉、酒精棉、酒精灯、酒棉、酒精棉、酒精灯、 喷壶、废弃缸、冰喷壶、废弃缸、冰袋、种毒，稀释液、白蜡。袋、种毒，稀释液、白蜡。操作步骤操作步骤: 按要求取出适龄的胚蛋，画接种点，按要求取出适龄的胚蛋，画接种点，进行表面消毒。在

5、胚蛋的接种部位和气室部进行表面消毒。在胚蛋的接种部位和气室部位打孔，绒毛尿囊膜接种要做人工室。位打孔，绒毛尿囊膜接种要做人工室。 安装连续注射器，调节使用刻度，排出空气。安装连续注射器，调节使用刻度，排出空气。 在胚蛋的接种部位接种。在胚蛋的接种部位接种。 将稀释好的种毒放入冰桶中。接种后封孔，双将稀释好的种毒放入冰桶中。接种后封孔，双孔的先封接种孔在封气室孔。放入孵化器孵孔的先封接种孔在封气室孔。放入孵化器孵化，调好温湿度，不翻蛋。化，调好温湿度，不翻蛋。注意事项注意事项： 做人工气室，胚蛋打孔先打气室孔做人工气室，胚蛋打孔先打气室孔再打接种孔，接种孔要打破壳膜不能打破尿再打接种孔，接种孔要

6、打破壳膜不能打破尿囊膜。打一定数量的孔要对锥子进行消毒，囊膜。打一定数量的孔要对锥子进行消毒，打孔的顺序从上打孔的顺序从上 往下、从左到右。往下、从左到右。 接种过程中需校正接种量。接种过程中需校正接种量。 封孔时产生气泡封孔时产生气泡应重新封好。应重新封好。* 二、二、 抗原的收获抗原的收获 学习目标：了解抗原收获的方法和要求，能正学习目标：了解抗原收获的方法和要求，能正确收获抗原。确收获抗原。1、手工收获方法手工收获方法：尿囊液的收获、绒毛尿囊膜的收获、胚胎的收尿囊液的收获、绒毛尿囊膜的收获、胚胎的收获、羊水的收获、卵黄的收获。获、羊水的收获、卵黄的收获。 尿囊液的收获尿囊液的收获： 取取

7、04冷却冷却424h的胚蛋，的胚蛋，碘酒消毒气室部位，打开气室，刺开内壳膜碘酒消毒气室部位，打开气室，刺开内壳膜和绒毛尿囊膜，直接无菌吸取尿囊液。和绒毛尿囊膜，直接无菌吸取尿囊液。胚胎的收获胚胎的收获： 打开气室，撕破内层壳膜和绒毛打开气室，撕破内层壳膜和绒毛尿囊膜，挑出胚胎，放灭菌容器中。尿囊膜，挑出胚胎，放灭菌容器中。绒毛尿囊膜的收获绒毛尿囊膜的收获：打开气室，撕去气室部卵：打开气室，撕去气室部卵膜，观察绒毛尿囊膜的病变，剪取所需的绒膜，观察绒毛尿囊膜的病变，剪取所需的绒毛尿囊膜。毛尿囊膜。 羊水的收获：收获尿囊液后，用无菌的镊子夹羊水的收获：收获尿囊液后，用无菌的镊子夹起羊膜，用细吸管刺

8、入羊膜腔吸取羊水。起羊膜，用细吸管刺入羊膜腔吸取羊水。卵黄的收获：打开气室，撕开内壳膜，用镊卵黄的收获：打开气室，撕开内壳膜，用镊子夹出卵黄膜，放入灭菌平皿中，也可以子夹出卵黄膜，放入灭菌平皿中，也可以将整个卵黄物倒入平皿中，选取卵黄囊。将整个卵黄物倒入平皿中，选取卵黄囊。*2、照胚：接种后的温度一般设置于、照胚：接种后的温度一般设置于36.5-37，不翻蛋，根据产品的不同选择孵化，不翻蛋，根据产品的不同选择孵化的时间和照胚的时间，一般的时间和照胚的时间，一般27天。照胚前天。照胚前要检查孵化器的温度、湿度是否正常。要检查孵化器的温度、湿度是否正常。然后再照胚，照蛋灯从气室部位向下照，然后再照

9、胚，照蛋灯从气室部位向下照，死胚死胚发白发亮，血管脱落或血管变细，发白发亮，血管脱落或血管变细，活胚活胚发红，发红，蛋体布满血管，可见到活动的鸡胚。绒毛尿蛋体布满血管，可见到活动的鸡胚。绒毛尿囊膜接种的鸡胚，绒毛膜上可见明显的斑点。囊膜接种的鸡胚，绒毛膜上可见明显的斑点。根据产品的要求，留下所要的死胚、活胚，根据产品的要求，留下所要的死胚、活胚，及时取出并做好标记，放入及时取出并做好标记，放入04冷库，冷冷库，冷却却424h,准备收获。准备收获。3、胚蛋的消毒：、胚蛋的消毒：常用的消毒方法：常用的消毒方法： 喷雾消毒、表面擦拭消毒喷雾消毒、表面擦拭消毒脱碘的消毒方法、浸泡消毒法。脱碘的消毒方法

10、、浸泡消毒法。 喷雾消毒：喷雾消毒： 将消毒剂喷于蛋胚表面的消毒方将消毒剂喷于蛋胚表面的消毒方法。法。表面擦拭消毒：表面擦拭消毒： 用用4%的碘酒擦拭蛋壳接种部的碘酒擦拭蛋壳接种部位和气室部位，在用位和气室部位，在用75%的酒精脱碘的消毒的酒精脱碘的消毒方法。方法。浸泡消毒：浸泡消毒： 将胚蛋浸泡在消毒液中的消毒方将胚蛋浸泡在消毒液中的消毒方法。法。*【操作技能】操作技能】手工收获：手工收获：常用物品的准备：常用物品的准备：注射器、真空泵、管道、剪注射器、真空泵、管道、剪刀、大镊、止血钳、收获瓶、培养基、塞子、刀、大镊、止血钳、收获瓶、培养基、塞子、留样瓶等。留样瓶等。 操作步骤：按要求对胚蛋

11、进行消毒，并操作步骤：按要求对胚蛋进行消毒，并移至操作区域。移至操作区域。 尿囊液收获：尿囊液收获：用灭菌的剪刀剪去气室部位，用灭菌的剪刀剪去气室部位，无菌操作连接真空泵、收获管道和收获瓶。无菌操作连接真空泵、收获管道和收获瓶。开启真空泵，用镊子压住胚体吸收尿囊液和开启真空泵，用镊子压住胚体吸收尿囊液和羊水。羊水。胚胎和尿囊膜的收获胚胎和尿囊膜的收获：用消毒的大镊挑取尿囊：用消毒的大镊挑取尿囊膜和胎儿放入无菌收获瓶中。将收获的胎儿膜和胎儿放入无菌收获瓶中。将收获的胎儿和尿囊膜倒入捣碎机中，加入适量抗生素，和尿囊膜倒入捣碎机中，加入适量抗生素，以以 2000rmin的速度，转动的速度，转动2min,倒入倒入3000ml的无菌瓶中的无菌瓶中, 每个收获瓶都要留样并每个收获瓶都要留样并做无菌检验和病毒含量测定，收获结束后换做无菌检验和病毒含量测定，收获结束后换瓶塞，及时放入瓶塞，及时放入-15以下冷库保存。以下冷库保存。* 注意事项注意事项：打壳时不要打破尿囊膜，气室边缘：打壳时不要打破尿囊膜，气室边缘要整齐。收获前逐个检查蛋胚，胎儿腐败、要整齐。收获前逐个检查蛋胚，胎儿腐败、胚液混浊的弃去。收获顺序从左到右、从下胚液混浊的弃去。收获顺序从左到右、从下往上，手和用具不能从打开气室未收获的鸡