人ELISA试剂盒使用目的.doc

1、人 ELISA 试剂盒 使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中血管内皮生长因子（VEGF ）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人血管内皮生长因子（ VEGF ）水平。用纯化的人血管内皮生长因子 （VEGF ）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血管内皮生长因子 （ VEGF ），再与 HRP标记的血管内皮生长因子（ VEGF ）抗体结合，形成抗体- 抗原 - 酶标抗体复合物， 经过彻底洗涤后加底物TMB显色。 TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血管内皮生长因子（ VEGF ）呈正相关。用酶

2、标仪在 450nm波长下测定吸光度 （ OD值），通过标准曲线计算样品中人血管内皮生长因子（VEGF ）浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml1瓶7终止液6ml1 瓶2酶标试剂6ml1 瓶8标准品（ 2400pg/ml）0.5ml 1 瓶3酶标包被板12孔8条9标准品稀释液1.5ml 1 瓶4样品稀释液6ml1 瓶10说明书1份5显色剂 A 液6ml1 瓶11封板膜2张6显色剂 B 液6ml1/瓶12密封袋1个人 ELISA 试剂盒 标本要求1 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行， 提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于 -20保存，但应避免反复冻融2 不能检测含N

3、aN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50 l，待测样品孔中先加样品稀释液40 l ，然后再加待测样品 10 l（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37 温育3 0分钟。4. 配液：将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗

4、涤液，静置30秒后弃去，如此重复5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50 l，空白孔除外。7. 温育：操作同 3 。8. 洗涤：操作同 5 。9. 显色：每孔先加入显色剂A50l，再加入显色剂B50l，轻轻震荡混匀，37 避光显色15分钟.10. 终止：每孔加终止液 50 l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零， 450nm 波长依序测量各孔的吸光度（ OD 值）。测定应在加终止遇到失意伤心事，多想有一个懂你的人来指点迷津，因他懂你，会以我心，换你心，站在你的位置上思虑，为你排优解难。一个人，来这世间，必须懂得一些人情事理，才能不断成长。就像躬耕于陇亩的农人，必须

5、懂得土地与种子的情怀，才能有所收获。一个女子，一生所求，莫过于找到一个懂她的人，执手白头，相伴终老。即使芦花暖鞋，菊花枕头，也觉温暖；即使粗食布衣，陋室简静，也觉舒适，一句“懂你 ”,叫人无怨无悔，愿以自己的一生来交付。懂得是彼此的欣赏，是灵魂的轻唤，是惺惺相惜，是爱，是暖，是彼此的融化；是走一段很远的路，蓦然回首却发现，我依然在你的视线里；是回眸相视一笑的无言；是一条偏僻幽静的小路，不显山，不露水，路边长满你喜爱的花草，静默无语却馨香盈怀，而路的尽头，便是通达你心灵的小屋瑟瑟严冬，窗外雪飘，絮絮自语说了这多，你可懂我了吗？若你知晓，无需说话，只报一声心灵的轻叹，那，便是我的花开春暖。你相不相信，人