第九章 发酵设备及代表性发酵产品工艺过程

1、黄小龙黄小龙发酵工程实验室包括：发酵工程实验室包括：无菌室无菌室准备室准备室湿地板区湿地板区通用实验区通用实验区分析区分析区接种操作接种操作菌种培养等菌种培养等发酵发酵发酵液的分析发酵液的分析配制培养基等配制培养基等无菌室无菌室拉门拉门更衣室更衣室缓冲间缓冲间消毒间消毒间拱形顶，水滴会滑下来，拱形顶，水滴会滑下来，不会直接滴下来不会直接滴下来坡形地面，便于泻水坡形地面，便于泻水u高度：一人加一手，高度：一人加一手，便于消毒清扫；便于消毒清扫；u墙面涂上漆，最好不墙面涂上漆，最好不锈钢材料，光滑；锈钢材料，光滑；u顶上安紫外灯，高出顶上安紫外灯，高出操作台操作台30cm工作台工作台超净工作台超净

2、工作台l 超净台超净台是是80年代开始问世的一种防止污染的装置。年代开始问世的一种防止污染的装置。其主要功能是利用其主要功能是利用空气层流装置排除工作台面上部空气层流装置排除工作台面上部包括微生物在内的包括微生物在内的各种微小尘埃各种微小尘埃。l 通过电动装置使空气通过通过电动装置使空气通过高效过滤器具高效过滤器具后进入工作后进入工作台面，使台面始终保持在台面，使台面始终保持在流动无菌空气流动无菌空气控制之下。控制之下。而且在接近外部的一方有一道高速流动的气帘防止而且在接近外部的一方有一道高速流动的气帘防止外部带菌空气进入。外部带菌空气进入。操作人员的穿着操作人员的穿着准备室准备室天平、灭菌锅

3、、培养箱、天平、灭菌锅、培养箱、pH计计摇床摇床灭菌消毒：灭菌消毒：KMnO4和甲醛熏蒸，比例根据污染程度而定；和甲醛熏蒸，比例根据污染程度而定；注意安全，关好窗防止注意安全，关好窗防止MnO2跑掉。跑掉。往复式往复式供氧比较好，但培养液容易溅起、供氧比较好，但培养液容易溅起、易污染易污染旋转式旋转式溶解氧较少，培养液不容易溅起溶解氧较少，培养液不容易溅起通用试验区通用试验区培养基的配制、细胞干重以及普通的测定培养基的配制、细胞干重以及普通的测定（粘度等）（粘度等）湿地板区湿地板区发酵罐、蒸馏装置、灭菌设施等发酵罐、蒸馏装置、灭菌设施等地板可以承载一定的负荷地板可以承载一定的负荷分析区分析区气

4、相色谱仪、液相色谱仪、分光光度计等气相色谱仪、液相色谱仪、分光光度计等避免潮湿、振动，保证读数的准确性和仪避免潮湿、振动，保证读数的准确性和仪器的使用寿命器的使用寿命14它必须能够提供微生物生命活动和代谢所要求的条件，并便于它必须能够提供微生物生命活动和代谢所要求的条件，并便于操作和控制，保证工艺条件的实现，从而获得高产。操作和控制，保证工艺条件的实现，从而获得高产。15 发酵罐的定义发酵罐的定义：是为一个特定：是为一个特定生物化学生物化学过程的操过程的操作提供良好而满意的环境的作提供良好而满意的环境的容器容器。 对于某些工艺来说对于某些工艺来说，发酵罐是个密闭容器，同时，发酵罐是个密闭容器，

5、同时附带精密控制系统；附带精密控制系统； 对于另一些简单的工艺来说对于另一些简单的工艺来说，发酵罐只是个开口，发酵罐只是个开口容器，有时甚至简单到只要有一个开口的坑。容器，有时甚至简单到只要有一个开口的坑。 16171819201按微生物生长代谢需要分类：按微生物生长代谢需要分类：212. 按照发酵罐设备特点分类：按照发酵罐设备特点分类：固体发酵固体发酵量少量少 浅盘，帘子浅盘，帘子量多量多 厚层通风发酵设备厚层通风发酵设备液体发酵液体发酵厌氧发酵厌氧发酵好氧发酵好氧发酵机械搅拌机械搅拌风搅风搅非循环式非循环式通用式机械搅拌发酵罐、通用式机械搅拌发酵罐、自吸式自吸式循环式循环式伍氏（内循环）、

6、伍氏（内循环）、泵循环、文氏管循环（外循环）泵循环、文氏管循环（外循环）非循环式非循环式循环式循环式空气带升式空气带升式喷射式喷射式排管式排管式三、按发酵基质状态分类三、按发酵基质状态分类排管传热气通式发酵罐排管传热气通式发酵罐 机械搅拌通气式发酵罐又称为通用式发酵罐机械搅拌通气式发酵罐又称为通用式发酵罐，是工业上最常用的一种微生物反应器。，是工业上最常用的一种微生物反应器。 优点是：发酵液的优点是：发酵液的 pH pH 值和温度易于控制；值和温度易于控制；适合连续培养。适合连续培养。优点优点缺点缺点通气式发酵罐通气式发酵罐 主要缺点是：主要缺点是：设备结构复杂，难以清洗；在设备结构复杂，难以

7、清洗；在丝状菌的培养过程中，细胞易受损伤。丝状菌的培养过程中，细胞易受损伤。通用式机械搅拌发酵罐结构通用式机械搅拌发酵罐结构自吸式发酵罐自吸式发酵罐 不需要空压机供应压缩空气，不需要空压机供应压缩空气，它是利用它是利用搅拌器旋转时搅拌器旋转时产生的产生的负压吸入空气。负压吸入空气。 搅拌与供空气均由机械搅拌与供空气均由机械搅拌器完成，搅拌器完成，省去空压机省去空压机。优点优点 吸程不高，须采用吸程不高，须采用低阻力高低阻力高效空气除菌装置效空气除菌装置，对无菌要求高，对无菌要求高的发酵不适应；由于空气在搅拌的发酵不适应；由于空气在搅拌时直接进入发酵罐，故对时直接进入发酵罐，故对厌氧菌厌氧菌的发

8、酵不适应的发酵不适应。缺点缺点2.2.鼓泡式发酵罐鼓泡式发酵罐 鼓泡式发酵罐是借助鼓入空气而提供混合鼓泡式发酵罐是借助鼓入空气而提供混合与传质所需的功率。与传质所需的功率。排气排气排料排料进料进料进料进料空气空气 鼓泡式发酵罐的结构如右图所示，鼓泡式发酵罐的结构如右图所示，空气与空气与培养液由下部鼓入罐体培养液由下部鼓入罐体，并以分散系通过筛板，并以分散系通过筛板鼓泡。鼓泡。 鼓泡式发酵罐结构简单，造价低，动力消鼓泡式发酵罐结构简单，造价低，动力消耗较小，避免了耗较小，避免了机械搅拌因轴封不严带来的杂机械搅拌因轴封不严带来的杂菌污染菌污染，减小了对丝状菌培养过程中的细胞易，减小了对丝状菌培养过

9、程中的细胞易受损伤。受损伤。 鼓泡式发酵罐一般较适用于，鼓泡式发酵罐一般较适用于，培养液粘度培养液粘度低、固含量低、需氧量较低低、固含量低、需氧量较低的发酵过程。的发酵过程。3.3.液体循环式发酵罐液体循环式发酵罐 与鼓泡式发酵罐相似，不设机械搅拌，但与鼓泡式发酵罐相似，不设机械搅拌，但在在罐外设体外循环管罐外设体外循环管，或在罐内设导流筒（拉，或在罐内设导流筒（拉力筒）。力筒）。 气升式发酵罐结构简单，造价低，动力消气升式发酵罐结构简单，造价低，动力消耗较小，避免了机械搅拌因轴封不严带来的杂耗较小，避免了机械搅拌因轴封不严带来的杂菌污染，减小了对丝状菌培养过程中的细胞易菌污染，减小了对丝状菌

10、培养过程中的细胞易受损伤。受损伤。 气升式发酵罐一般较适用于，气升式发酵罐一般较适用于，粘度低、固粘度低、固含量低的培养液含量低的培养液。气升环流式发酵罐气升环流式发酵罐排气排气排料排料进料进料空气空气排气排气排料排料进料进料空气空气喷嘴环流式发酵罐喷嘴环流式发酵罐采用机械泵引射压缩空气，在喷嘴处形成剪切采用机械泵引射压缩空气，在喷嘴处形成剪切力场，将力场，将射入的空气在液相中分散为小气泡射入的空气在液相中分散为小气泡。 这些小气泡在罐内开始会积聚出较大的气这些小气泡在罐内开始会积聚出较大的气泡，通过环流后将重新分散，从而加快了传质泡，通过环流后将重新分散，从而加快了传质速率。速率。 与机械搅

11、拌式发酵罐相比，在同样耗能的与机械搅拌式发酵罐相比，在同样耗能的前提下，前提下，喷嘴环流式发酵罐的喷嘴环流式发酵罐的氧传质速率要高氧传质速率要高得多得多。 与气升式发酵罐比较，与气升式发酵罐比较，喷嘴环流式发酵罐喷嘴环流式发酵罐的适用氛围相对较广。的适用氛围相对较广。排气排气排料排料进料进料空气空气外循环支路外循环支路喷嘴喷嘴连续管道发酵器连续管道发酵器 连续管道发酵器有连续管道发酵器有多种多样，可以是多种多样，可以是直管直管也可以是也可以是蛇管蛇管。培养液。培养液和种子液不断流入发酵和种子液不断流入发酵器进行发酵。器进行发酵。 连续管道发酵器主连续管道发酵器主要用于要用于厌氧发酵厌氧发酵。种

12、子罐种子罐管道发酵器管道发酵器培养液培养液种子液种子液303按容积分类：按容积分类：小试机械搅拌通气式发酵罐（实验室用，小试机械搅拌通气式发酵罐（实验室用，1L-50L）中试机械搅拌通气式发酵罐中试机械搅拌通气式发酵罐（50L-5000L）青霉素青霉素又被称为又被称为青霉素青霉素G、青霉素钠、青霉素钠、苄青霉素苄青霉素钠、青霉素钾、苄青钠、青霉素钾、苄青霉素钾等。霉素钾等。青霉素青霉素CHCH2 2C CNHNHO OO ON NCOOHCOOHCHCH3 3CHCH3 3S S氨苄青霉素氨苄青霉素CHCHC CNHNHO OO ON NCOOHCOOHCHCH3 3CHCH3 3S SNHN

13、H2 2青霉素的理化性质青霉素的理化性质1、稳定性、稳定性 固体青霉素盐的稳定性与其含水量和纯度有很大的关系固体青霉素盐的稳定性与其含水量和纯度有很大的关系.2、溶解度、溶解度 青霉素游离酸在水中溶解度很小，易溶于有机溶剂如青霉素游离酸在水中溶解度很小，易溶于有机溶剂如醋酸乙醋酸乙酯、苯、氯仿、丙酮和乙醚酯、苯、氯仿、丙酮和乙醚中，而其钾盐、钠盐易溶于水和甲中，而其钾盐、钠盐易溶于水和甲醇，可溶于乙醇。醇，可溶于乙醇。3、降解反应、降解反应 青霉素是很不稳定的化合物，遇酸碱或加热易分解而失去青霉素是很不稳定的化合物，遇酸碱或加热易分解而失去活性，并发生分子重排。活性，并发生分子重排。4、紫外吸

14、收、紫外吸收5、过敏反应、过敏反应青霉素发酵工艺青霉素发酵工艺1.发酵工艺流程发酵工艺流程（1）菌种）菌种（a）最早发现的产生青霉素的原始菌种是）最早发现的产生青霉素的原始菌种是点青霉菌点青霉菌，生产能力，生产能力很低，不能满足工业生产要求，所以被淘汰。现在主要采用的很低，不能满足工业生产要求，所以被淘汰。现在主要采用的是是产黄青霉菌产黄青霉菌。（b）为了提高产黄青霉的青霉素产量使用的诱变剂如：）为了提高产黄青霉的青霉素产量使用的诱变剂如：二环氧二环氧丁烷、甲磺酸乙酯、乙烯亚胺、亚硝酸、丁烷、甲磺酸乙酯、乙烯亚胺、亚硝酸、X射线射线等。等。（2）孢子制备）孢子制备 将沙土孢子先在用将沙土孢子先

15、在用甘油、葡萄糖、蛋白胨甘油、葡萄糖、蛋白胨组成的培养基进行组成的培养基进行斜面培养，经传代活化。最适生长温度斜面培养，经传代活化。最适生长温度2526C，培养，培养68天，天，得单菌落，再传斜面，培养得单菌落，再传斜面，培养7天，制得天，制得斜面孢子。斜面孢子。再移植到优质再移植到优质小米或大米固体培养基上，小米或大米固体培养基上，25C，相对湿度，相对湿度45%-50%，生长，生长7天，天，制得制得小米孢子。小米孢子。孢子成熟后进行真空干燥，低温保存备用。孢子成熟后进行真空干燥，低温保存备用。（3）种子罐培养工艺）种子罐培养工艺一级种子发酵：一级种子发酵：发芽罐，孢子萌发，形成菌丝。发芽罐

16、，孢子萌发，形成菌丝。培养基培养基：葡萄糖，玉米浆，碳酸钙，玉米油：葡萄糖，玉米浆，碳酸钙，玉米油,消沫剂等；消沫剂等；接种量：接种量：200亿孢子亿孢子/t培养基培养基空气流量：空气流量：1：3（m3/ m3min）；）；搅拌转速：搅拌转速：300-350r/min；pH：自然；自然；温度：温度：271；时间：时间：40h。二级种子罐：二级种子罐：繁殖罐，大量繁殖。繁殖罐，大量繁殖。培养基：葡萄糖、玉米浆，玉米油，消沫剂等；培养基：葡萄糖、玉米浆，玉米油，消沫剂等；接种量：接种量：10；空气流量：空气流量：1:1-1.5 （m3/ m3min）；）；搅拌转速：搅拌转速：250-280r/mi

17、n；pH：自然；：自然；温度：温度：251；时间：时间：10-14h；（4）生产罐培养工艺）生产罐培养工艺三级罐：三级罐：生产罐；生产罐；培养基：培养基：花生饼粉，葡萄糖，尿素，硝酸花生饼粉，葡萄糖，尿素，硝酸铵，硫代硫酸钠，苯乙酰胺，铵，硫代硫酸钠，苯乙酰胺，CaCO3, 玉玉米油，硅油米油，硅油.温度控制温度控制变温控制：不同阶段不同温度。变温控制：不同阶段不同温度。生长阶段：生长阶段：较高温度，缩短生长时间；较高温度，缩短生长时间；生产阶段生产阶段适当降低温适当降低温度，以利于青霉素合成。前期控制度，以利于青霉素合成。前期控制26左右，后期降温控制左右，后期降温控制22。pH控制控制合成

18、适宜合成适宜pH6.46.6左右，避免超过左右，避免超过7.0直接加酸或碱：直接加酸或碱：自动控制流加葡萄糖：自动控制流加葡萄糖：恒速；变速，依赖恒速；变速，依赖pH变化快慢。变化快慢。pH下降：下降：补加补加CaCO3、通氨、尿素或提高通气量、通氨、尿素或提高通气量pH上升：上升：补加糖、生理酸性物质（硫酸铵、油脂）恒速补糖，补加糖、生理酸性物质（硫酸铵、油脂）恒速补糖，用酸或碱控制方式。用酸或碱控制方式。根据根据pH补糖变温控制：补糖变温控制：溶氧控制溶氧控制30饱和度，产率急剧下降；饱和度，产率急剧下降；10，造成不可逆的损害。，造成不可逆的损害。临界溶氧浓度：临界溶氧浓度：30。通气比

19、：通气比：1:0.81.5 vvm。适宜的搅拌速度：保证气液混合，提高溶氧。适宜的搅拌速度：保证气液混合，提高溶氧。菌丝生长速度与形态、浓度菌丝生长速度与形态、浓度发酵稳定期，湿菌浓度可达发酵稳定期，湿菌浓度可达15%20%，丝状菌干重约，丝状菌干重约3%，球状菌干重在球状菌干重在5%左右。在发酵中后期一般每天放一次，每左右。在发酵中后期一般每天放一次，每次放掉总发酵液的次放掉总发酵液的10%左右。左右。消泡消泡天然油脂：天然油脂：玉米油；玉米油；化学消沫剂化学消沫剂：泡敌。：泡敌。前期：前期：主间歇搅拌，少加油主间歇搅拌，少加油中期中期：搅拌、加油、稍微降低通气量（必要时）：搅拌、加油、稍微

20、降低通气量（必要时）策略策略：少量多次。：少量多次。后期：后期：尽量少加消沫剂。尽量少加消沫剂。二、提炼工艺过程二、提炼工艺过程在提炼过程中要遵循下面四个原则：在提炼过程中要遵循下面四个原则：1、时间短、时间短2、温度低、温度低3、pH适中适中4、勤清洗消毒、勤清洗消毒（1）预处理）预处理青霉素的存在部位：青霉素的存在部位：发酵液发酵液浓度较低：浓度较低：1030Kg/m3含有大量杂质：含有大量杂质：菌体细胞、核酸、杂蛋白质、细胞壁多菌体细胞、核酸、杂蛋白质、细胞壁多糖等、残留的培养基、色素、盐离子、代谢产物等糖等、残留的培养基、色素、盐离子、代谢产物等目的：目的：浓缩目的产物，去除大部分杂质

21、，改变发酵液的浓缩目的产物，去除大部分杂质，改变发酵液的流变学特征，利于后续的分离纯化过程。流变学特征，利于后续的分离纯化过程。预处理：预处理：发酵液加少量絮凝剂沉淀蛋白。发酵液加少量絮凝剂沉淀蛋白。（2）过滤）过滤鼓式真空过滤机过滤：鼓式真空过滤机过滤：一次滤液：一次滤液：pH6.2-7.2，略浑，棕黄或绿色，蛋白质含量，略浑，棕黄或绿色，蛋白质含量0. 5-2.0%。板框式过滤机过滤：板框式过滤机过滤：硫酸调节硫酸调节pH4.5-5.0，加入，加入0.07%溴代溴代十五烷吡啶，十五烷吡啶，0.07%硅藻土为助虑剂。硅藻土为助虑剂。二次滤液：二次滤液：澄清透明，用于提取（收率澄清透明，用于提

22、取（收率90）（3）溶剂萃取）溶剂萃取原理：原理：青霉素游离酸易溶于有机溶剂，而青霉素盐易溶青霉素游离酸易溶于有机溶剂，而青霉素盐易溶于水。于水。萃取剂：萃取剂：青霉素分配系数高的有机溶剂。青霉素分配系数高的有机溶剂。工业上通常用：工业上通常用：醋酸丁酯和醋酸戊酯。醋酸丁酯和醋酸戊酯。除去蛋白质：加除去蛋白质：加0.05-0.1%去乳化剂去乳化剂PPB。萃取：萃取：23次。次。多级逆流萃取方式多级逆流萃取方式（4）脱色和去热原质）脱色和去热原质1.萃取液中添加活性炭，除萃取液中添加活性炭，除去色素。去色素。2.过滤，除去活性炭。过滤，除去活性炭。（5）结晶）结晶直接结晶直接结晶加醋酸钠乙醇溶液

23、反应：得到结晶钠盐。加醋酸钠乙醇溶液反应：得到结晶钠盐。加醋酸钾乙醇溶液：得到加醋酸钾乙醇溶液：得到青霉素钾盐青霉素钾盐薄膜蒸发工艺图薄膜蒸发工艺图(2) 谷氨酸的发酵工艺谷氨酸的发酵工艺 谷氨酸谷氨酸非必须氨基酸，是生物机体内氮代谢的基本氨基酸之一，在代非必须氨基酸，是生物机体内氮代谢的基本氨基酸之一，在代谢上具有重要意义。在医学上主要用于治疗肝性昏迷；另外谷氨酸作为神谢上具有重要意义。在医学上主要用于治疗肝性昏迷；另外谷氨酸作为神经中枢及大脑皮质的补剂，对于治疗脑震荡或神经损伤、癫痫以及对弱智经中枢及大脑皮质的补剂，对于治疗脑震荡或神经损伤、癫痫以及对弱智儿童均有一定疗效。儿童均有一定疗效

24、。谷氨酸（谷氨酸（L-GLUL-GLU）HOOCHOOCCHCH2 2CHCH2 2CHCHCOOHCOOHNHNH2 2 谷氨酸钠谷氨酸钠是由钠离子与谷氨酸根离子形成是由钠离子与谷氨酸根离子形成的盐，是食品工业调味料味精的主要成分，也的盐，是食品工业调味料味精的主要成分，也是鸡精的重要成分。是鸡精的重要成分。 HOOCHOOCCHCH2 2CHCH2 2CHCHCOONaCOONaNHNH2 2谷氨酸钠晶体谷氨酸钠晶体淀粉淀粉液化（水解）液化（水解）淀粉酶淀粉酶水解液水解液糊精、低聚糖糊精、低聚糖糖化（水解）糖化（水解）糖化酶糖化酶糖化液糖化液（葡萄糖）（葡萄糖） 发酵法生产谷氨酸一般采用淀

25、粉或糖蜜，我国大多数厂家是采用淀粉发酵法生产谷氨酸一般采用淀粉或糖蜜，我国大多数厂家是采用淀粉为原材料。为原材料。 在发酵法工艺中，几乎所有的氨基酸产生菌都不能直接利用淀粉或糊在发酵法工艺中，几乎所有的氨基酸产生菌都不能直接利用淀粉或糊精，需对淀粉进行水解处理。淀粉的水解可采用酸解法或酶解法。精，需对淀粉进行水解处理。淀粉的水解可采用酸解法或酶解法。 目前，国内外厂家多以酶解法为主。其流程如下：目前，国内外厂家多以酶解法为主。其流程如下：【淀粉的糖化淀粉的糖化】8585，pH = 6.0pH = 6.06060，24h24h 过去氨基酸都是从蛋白质水解液中分离提取。自过去氨基酸都是从蛋白质水解

26、液中分离提取。自19651965年日本采用发酵年日本采用发酵法生产谷氨酸后，发酵法生产氨基酸逐步取代了传统的水解法工艺，使得法生产谷氨酸后，发酵法生产氨基酸逐步取代了传统的水解法工艺，使得发酵法在氨基酸生产中占主导的地位。发酵法在氨基酸生产中占主导的地位。生产工艺流程生产工艺流程【菌种扩大培养及发酵菌种扩大培养及发酵】发酵发酵30-3730-37，30h30h发酵液发酵液北京棒北京棒杆菌杆菌斜面培养斜面培养3232，18-24h18-24h菌种菌种一级种子培养一级种子培养3232，12h12h二级种子培养二级种子培养3232，7-10h7-10h斜面培养基斜面培养基 蛋白胨、牛肉膏、蛋白胨、牛

27、肉膏、NaClNaCl、琼脂；、琼脂； pH = 7.0-7.2pH = 7.0-7.2一级种子培养基一级种子培养基 葡萄糖、玉米浆、尿素、葡萄糖、玉米浆、尿素、KHKH2 2POPO4 4、MgSOMgSO4 4、FeFe2 2(SO(SO4 4) )3 3 及及MnSOMnSO4 4； pH = 6.5pH = 6.56.86.8二级种子培养基二级种子培养基 糖化液糖化液( (葡萄糖葡萄糖) )、玉米浆、尿素、玉米浆、尿素、KHKH2 2POPO4 4、MgSOMgSO4 4、FeFe2 2(SO(SO4 4) )3 3 及及MnSOMnSO4 4； pH = 6.5pH = 6.56.8

28、6.8（振荡）（振荡）（通气、搅拌）（通气、搅拌）谷氨酸发酵液谷氨酸发酵液丙酮酸丙酮酸北京棒北京棒杆菌杆菌菌种扩大培养菌种扩大培养淀粉淀粉酶解酶解糖化液糖化液EMPEMP酵解酵解菌种菌种接种接种三羧酸循环三羧酸循环谷氨酸脱氢酶谷氨酸脱氢酶转氨基转氨基发发酵酵EMPEMP酵解酵解 在细胞浆内所发生的，由葡萄糖在细胞浆内所发生的，由葡萄糖直接分解为丙酮酸的过程。该途径又直接分解为丙酮酸的过程。该途径又称称Embden-Meyerhof-ParnusEmbden-Meyerhof-Parnus途径，简途径，简称称EMPEMP酵解。酵解。三羧酸循环三羧酸循环 由乙酰由乙酰 CoACoA和草酰乙酸缩合成

29、柠檬酸，柠檬酸经一系和草酰乙酸缩合成柠檬酸，柠檬酸经一系列反应，再氧化脱羧，经列反应，再氧化脱羧，经- - 酮戊二酸、琥珀酸，再降解酮戊二酸、琥珀酸，再降解成草酰乙酸。成草酰乙酸。HOHOO OO OO OOHOH酮戊二酸酮戊二酸HOHOO OO OOHOHNHNH2 2谷氨酸脱氢酶谷氨酸脱氢酶NHNH4 4+ +谷氨酸谷氨酸三羧酸循环示意图三羧酸循环示意图- - 酮戊二酸酮戊二酸 + NH+ NH4 4+ + 谷氨酸谷氨酸谷氨酸脱氢酶谷氨酸脱氢酶NADH + H+NADH + H+NAD+NAD+【谷氨酸的提取谷氨酸的提取】过滤过滤谷氨酸发酵液谷氨酸发酵液滤液滤液等电点沉淀等电点沉淀酸化酸化pH = 4-4