动物生化实验》实验牛乳中蛋白质的提取与鉴定(1)ppt课件

1、了解蛋白质的化学性质；了解蛋白质的化学性质；掌握蛋白质的提取方法和鉴定理。掌握蛋白质的提取方法和鉴定理。 牛乳中含丰富的蛋白质水分牛乳中含丰富的蛋白质水分87.8%87.8%、脂、脂肪肪3.5%3.5%、蛋白质、蛋白质3.1%3.1%、乳糖、乳糖4.9%4.9%、灰分、灰分0.7%0.7%、能量、能量29.kg/100kg29.kg/100kg，其中主要是，其中主要是酪蛋白。酪蛋白在牛乳中约占总蛋白量酪蛋白。酪蛋白在牛乳中约占总蛋白量的的5/65/6。 蛋白质是含羧基和氨基的两性电解质，在某蛋白质是含羧基和氨基的两性电解质，在某一一pHpH值溶液中，蛋白质分子所带的正电荷和值溶液中，蛋白质分子

2、所带的正电荷和负电荷相等，蛋白质以两性离子形状存在，负电荷相等，蛋白质以两性离子形状存在，这时溶液的这时溶液的pHpH值，称为该蛋白质的等电点值，称为该蛋白质的等电点PIPI。 在等电点时，蛋白质所带净电荷为零，在等电点时，蛋白质所带净电荷为零，溶解度最小，蛋白质沉淀析出，利用蛋白质溶解度最小，蛋白质沉淀析出，利用蛋白质的这个特点可将蛋白质提取出来。的这个特点可将蛋白质提取出来。 由于粗提出的酪蛋白中还含有脂肪，可由于粗提出的酪蛋白中还含有脂肪，可用乙醇和乙醚洗涤除去。用乙醇和乙醚洗涤除去。酪蛋白中含有酪氨酸残基，酪氨酸残基的酪蛋白中含有酪氨酸残基，酪氨酸残基的R R基团为：基团为：含酚羟基，

3、可与米伦试剂反响先生成白色絮状沉淀，继续反响生含酚羟基，可与米伦试剂反响先生成白色絮状沉淀，继续反响生成红色沉淀。成红色沉淀。蛋白中还含有含硫氨基酸胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸，在碱蛋白中还含有含硫氨基酸胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸，在碱性溶液中水解后可与醋酸铅反响生成黑色的铅盐性溶液中水解后可与醋酸铅反响生成黑色的铅盐 三、操作步骤三、操作步骤一酪蛋白的制备一酪蛋白的制备新颖牛奶、醋酸纳缓冲液各新颖牛奶、醋酸纳缓冲液各5ml 40 5ml 40 分别加热至同样温度分别加热至同样温度 上清液：保管做鉴定烧杯三上清液：保管做鉴定烧杯三边加边摇混匀边加边摇混匀 5min 5min 沉淀沉淀 加加4ml95

4、%4ml95%的乙醇的乙醇 离心离心5 5分钟分钟 上清液：弃去上清液：弃去 沉淀：做鉴定沉淀：做鉴定3000r/min离心离心二酪蛋白的性质鉴定二酪蛋白的性质鉴定1 1、溶解度、溶解度 取取3 3支试管支试管+ 0.1M NaOH+ 0.1M NaOH、 0.2M 0.2M HClHCl、 10%NaCl 10%NaCl各各2ml+2ml+少许酪蛋白少许酪蛋白振荡振荡察看溶解快慢。察看溶解快慢。2 2、米伦反响、米伦反响 1ml H2O1ml H2O 少许酪蛋白少许酪蛋白 察察看看 10 10滴米伦试剂。加热滴米伦试剂。加热三乳清中可凝固性蛋白质鉴定：三乳清中可凝固性蛋白质鉴定： 将第一次离

5、心所得的上清液徐徐加热，出现将第一次离心所得的上清液徐徐加热，出现蛋白质沉淀球蛋白、清蛋白。蛋白质沉淀球蛋白、清蛋白。 四、实验结果四、实验结果 五、讨论五、讨论二、常用生化仪器运用二、常用生化仪器运用 离心机 离心技术centrifugal technique：根据颗粒作匀速圆周 运动时遭到一个外向的离心力的行为而开展起来 的一种分别技术。 离心技术运用很广，诸如分别出化学反响后的沉淀物，天然的生物大分子、无机物、有机物，在生物化学以及其它的生物学领域常用来搜集细胞、细胞器及生物大分子物质。离心机种类离心机种类按用途：按用途： 有分析用、制备用及分析有分析用、制备用及分析- -制备分；制备分

6、； 按构造特点：按构造特点： 有管式、吊蓝式、转鼓式和碟式等；有管式、吊蓝式、转鼓式和碟式等； 按转速：按转速： 有为常速低速、高速和超速三种。有为常速低速、高速和超速三种。实验室用普通低速离心机实验室用普通低速离心机实验室普通离心机运用方法实验室普通离心机运用方法1.1.将离心机放在坚实而平整的将离心机放在坚实而平整的任务台上；任务台上；2.2.在适用的离心管中参与样品，在适用的离心管中参与样品，必需对称配重，否那么会损必需对称配重，否那么会损坏离心机；坏离心机；3.3.按离心机转头的离心管位置按离心机转头的离心管位置刻度所对应孔插入，放下离刻度所对应孔插入，放下离心机顶盖；心机顶盖；4.4.检查确认调速钮处于最低速检查确认调速钮处于最低速位置；位置；5.5.翻开电源开关，调速到需求翻开电源开关，调速到需求的转速；的转速；6.6.选择任务时间，调选择任务时间，调“选时钮选时钮到需求的位置。到需求的位置。7.7.离心完成，离心机自然停顿。离心完成，离心机自然停顿。 2、离心机运用本卷须知 (1严禁各种液体和杂物进入离心任务室，那样