不结球白菜维生素C合成代谢相关基因GLDH和APX功能鉴定_第1页
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文档简介

1、不结球白菜维生素 C合成代谢相关基因GLDH和APX功能鉴定植物中维生素C (vitamin C) 又名L-抗坏血酸(L-ascorbic acid, AsA), 不 仅对于植物自身的抗氧化系统、 光合保护以及调节生长发育等具有非常重要的生 理功能,更为人类提供了丰富而方便的 Vc源(人类不能依靠自身合成和贮存 AsA, 需要从食物中摄取 )。通过调控植物抗坏血酸生物合成与代谢相关酶基因的表达 , 可以提高抗坏血酸的含量 , 改变某些代谢酶类的活性 , 从而增加植物产品的营养 价值, 增强植物对逆境的抗性。本研究旨在利用转基因技术初步鉴定抗坏血酸合成代谢相关基因GLDH和APX的功能,评价转基

2、因调控抗坏血酸代谢的效果,并获得具有应用潜力的高含 量抗坏血酸的不结球白菜材料。1.对T1代转过量表达载体转基因植株进行检测， 进行了 RT-PCRVc含量和光合特性的测定,结果说明：外源转基因的目的条带要 比内源条带要暗 , 并且有些植株无法检测到外源目的条带 , 原因可能是转基因后 代出现基因别离,也存在有些植株目的条带丧失的可能；转基因植株的GLDH基因 表达量最高为对照的1.7倍；转基因植株Vc含量为对照植株的大约1.5倍；转 基因植株比对照的光合特性增强。2.L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶(GLDH为催化植物体内Vc生物合成的关键 酶。本实验将构建的抑制表达载体 , 以根癌农杆菌介

3、导法转化乌塌菜。通过组织培养共获得18株再生植株,经PCF检测其中5株为转基因植株,对 转基因植株进行荧光定量PCF检测、Vc含量和酶活性测定,结果说明：目的基因 已经整合到乌塌菜基因组中；以空白农杆菌侵染后再生形成的植株为对照 , 转基 因植株的GLDHS因表达量比对照降低了 7.5%-36.6%; Vc含量比对照植株降低了 15.9%-27.2%;转基因植株GLDHB活性比对照植株降低50鸠上。3.以不结球白 菜品种Pol CM站实验材料,采用RT-PCR和RACE技术,获得了不结球白菜抗坏血 酸过氧化物酶基因(APX)的cDNA全长序列。序列分析说明 , 该基因全长 1089bp, 包括开放阅读框 867bp, 编码 288 个氨基 酸,推测的分子量31.6kD,等电点(p I )5.52,与其它植物的APX蛋白具有较高的 相似性。将APX基因片段连接到原核表达载体 PGEX4T-3转化大肠杆菌B

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