动物细胞工程2

1、植物体植物体胚 状 体胚 状 体或丛芽或丛芽离体的植物器离体的植物器官、组织或细胞官、组织或细胞u植物组织培养技术的一般过程植物组织培养技术的一般过程?脱分化脱分化再分化再分化愈伤组织愈伤组织复习回顾复习回顾植物细胞植物细胞 a a（大豆）（大豆）植物细胞植物细胞 b b（花生）（花生）去除细胞壁去除细胞壁原生质体原生质体 a a原生质体原生质体 b b原生质体融合原生质体融合正在融合的原生质体正在融合的原生质体再生出细胞壁再生出细胞壁杂种细胞杂种细胞细胞分裂细胞分裂愈伤组织愈伤组织杂种植株杂种植株( (大豆花生大豆花生) )大豆细胞大豆细胞花生细胞花生细胞植物细胞植物细胞 a a（大豆）（大

2、豆）植物细胞植物细胞 b b（花生）（花生）方法？方法？促融方法？促融方法？类型？类型？遗传物质？遗传物质？优势？优势？去除细胞壁去除细胞壁原生质体原生质体 b b原生质体融合原生质体融合正在融合的原生质体正在融合的原生质体再生出细胞壁再生出细胞壁杂种细胞杂种细胞细胞分裂细胞分裂愈伤组织愈伤组织杂种植株杂种植株( (大豆花生大豆花生) )去除细胞壁去除细胞壁原生质体原生质体 a a原生质体融合原生质体融合正在融合的原生质体正在融合的原生质体再生出细胞壁再生出细胞壁杂种细胞杂种细胞细胞分裂细胞分裂愈伤组织愈伤组织杂种植株杂种植株( (大豆花生大豆花生) )原生质体原生质体 a a原生质体原生质体

3、 b b2.2.诱导植物细胞融合的方法：诱导植物细胞融合的方法：1.1.去细胞壁的方法：去细胞壁的方法：最常用的方法是酶解法。最常用的方法是酶解法。 在温和的条件下，用纤在温和的条件下，用纤维素酶、果胶酶等分解植物细胞的细胞壁维素酶、果胶酶等分解植物细胞的细胞壁 物理法：离心、振动、电激物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（化学法：聚乙二醇（peg）3、融合细胞的筛选：、融合细胞的筛选： a、b原生质体除形成原生质体除形成ab型的融合细胞外，还形成型的融合细胞外，还形成aa型和型和bb型，其中，只有型，其中，只有ab型是符合要求的杂种细型是符合要求的杂种细胞。因此，在进行组织培养前，还要做

4、好杂种细胞的胞。因此，在进行组织培养前，还要做好杂种细胞的筛选工作。筛选工作。实例实例番茄番茄- -马铃薯马铃薯 烟草烟草海岛烟草海岛烟草白菜白菜甘蓝甘蓝 胡萝卜胡萝卜羊角芹羊角芹克服远源杂交不亲和的障碍、培育作物新品种克服远源杂交不亲和的障碍、培育作物新品种 乘胜追击乘胜追击1、在离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成、在离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织的过程中，下列哪一项条件是不需要的愈伤组织的过程中，下列哪一项条件是不需要的a、消毒灭菌、消毒灭菌 b、适宜的温度、适宜的温度c、充足的光照、充足的光照 d、适宜的养料和激素、适宜的养料和激素2、植物体细胞融合完成的标志是、植物体细

5、胞融合完成的标志是a、产生新的细胞壁、产生新的细胞壁 b、细胞膜发生融合、细胞膜发生融合c、细胞质发生融合、细胞质发生融合 d、细胞核发生融合、细胞核发生融合 ca3、下列植物细胞的全能性在提供了适宜条件的情、下列植物细胞的全能性在提供了适宜条件的情况下最易表达的是（况下最易表达的是（ ）a、枝条上的一个芽、枝条上的一个芽 b、柱头上的花粉、柱头上的花粉c、胚珠中的珠被细胞、胚珠中的珠被细胞 d、根尖分生区细胞、根尖分生区细胞4、能刺激愈伤组织形成的激素是（、能刺激愈伤组织形成的激素是（ ）a、细胞分裂素、细胞分裂素 b、赤霉素、赤霉素c、生长素和赤霉素、生长素和赤霉素 d、细胞分裂素和乙烯、

6、细胞分裂素和乙烯 b a5、植物体细胞杂交要先除去细胞壁的原因（、植物体细胞杂交要先除去细胞壁的原因（ ）a、植物体细胞的结构组成中不包括细胞壁、植物体细胞的结构组成中不包括细胞壁b、细胞壁使原生质体失去活力、细胞壁使原生质体失去活力c、细胞壁阻碍了原生质体的融合、细胞壁阻碍了原生质体的融合d、细胞壁不是原生质体的组成部分、细胞壁不是原生质体的组成部分c6. 用植物组织培养技术，可以培育或生产出用植物组织培养技术，可以培育或生产出a.食品添加剂食品添加剂 b.无病毒植物无病毒植物 c.人工种子人工种子 d.以上三者均是以上三者均是d7.植物体之所以具有不同的组织器官是由于植物体之所以具有不同的

7、组织器官是由于a.基因选择表达的结果基因选择表达的结果 b.部分基因功能丧失的结果部分基因功能丧失的结果c.分成不同基因细胞的结果分成不同基因细胞的结果 d.外界环境影响的结果外界环境影响的结果a8.杂种细胞的原生质体融合是杂种细胞的原生质体融合是a.不同细胞的原生质体直接融合在一起形成不同细胞的原生质体直接融合在一起形成 b.并没有实现融合的两部分并没有实现融合的两部分 c.必需通过人工诱导才能实现细胞融合必需通过人工诱导才能实现细胞融合 d.只有细胞核融合只有细胞核融合c动物细胞工程动物细胞工程动物细胞培养动物细胞培养核移植技术核移植技术 动物细胞融合动物细胞融合单克隆抗体的制备单克隆抗体

8、的制备一、动物细胞培养一、动物细胞培养1、过程：、过程：动物胚胎或幼龄动动物胚胎或幼龄动物的组织、器官物的组织、器官细胞悬浮液细胞悬浮液胰蛋白酶胰蛋白酶10代细胞代细胞原代培养原代培养50代细胞代细胞传代培养传代培养细胞株细胞株无限传代无限传代细胞系细胞系单个细胞单个细胞加培养液加培养液遗传物质遗传物质未改变未改变遗传物质遗传物质已改变已改变动物组织细胞间隙中动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织定弹性和韧性的组织和器官。和器官。（分解弹性纤维）（分解弹性纤维）思考思考2、为什么选用动物胚

9、胎或幼龄个体的器官或组织做、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？动物细胞培养材料？1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？培养基有何独特之处？3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？养成新个体？主要成分：主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：独特之处有：1、液体培养基、液体培养基

10、2、成分中有动物血清等、成分中有动物血清等因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体不能发育成新的动物个体动物细胞培养技术的应用动物细胞培养技术的应用1、获得细胞产物，如蛋白质生物制品病毒疫苗、获得细胞产物，如蛋白质生物制品病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等干扰素、单克隆抗体等2、获得烧伤病人植皮所需的细胞、获得烧伤病人植皮所需的细胞3、获得细胞用于检测有

11、毒物质、获得细胞用于检测有毒物质动物细胞是基因工程技术中常用的受体细胞动物细胞是基因工程技术中常用的受体细胞二、动物体细胞核移二、动物体细胞核移植技术与克隆动物植技术与克隆动物克隆羊培育过程克隆羊培育过程黑面绵羊去黑面绵羊去核卵细胞核卵细胞白面绵羊乳白面绵羊乳腺细胞核腺细胞核细胞核移植细胞核移植重组细胞重组细胞电脉冲刺激电脉冲刺激早期胚胎早期胚胎胚胎移植胚胎移植另一头绵羊的子宫另一头绵羊的子宫妊娠、出生妊娠、出生克隆羊多利克隆羊多利l动物细胞的全能性随动物细胞的全能性随动物细胞分化程度的提动物细胞分化程度的提高而逐渐受抑制，分化高而逐渐受抑制，分化潜能逐渐变弱潜能逐渐变弱l克隆克隆l动物核移植

12、是将动物动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核，的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞移入一个已经去掉细胞核的核的卵母细胞卵母细胞中，使其中，使其重组并发育成一个新的重组并发育成一个新的胚胎，这个胚胎最终发胚胎，这个胚胎最终发育为动物个体育为动物个体胚胎移植技术胚胎移植技术试管动物（婴儿）培养过程试管动物（婴儿）培养过程卵细胞卵细胞精子精子体外受精体外受精受精卵受精卵胚胎胚胎（移植）（移植）新个体新个体母体子宫内母体子宫内孕育、产出孕育、产出主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体获得杂种植株获得杂种植株用途用途物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、振

13、动、物理（离心、振动、电刺激）电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目植物、动物细胞融合的比植物、动物细胞融合的比较较三、动物细胞融三、动物细胞融合与单克隆抗体合与单克隆抗体用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程细胞核细胞核病毒颗粒病毒颗粒细胞核细胞核物理法物理

14、法 化学法化学法灭活的病毒灭活的病毒仙台病毒仙台病毒疱疹病毒疱疹病毒新城鸡瘟病毒新城鸡瘟病毒灭活病毒？灭活病毒？诱导融合的原理？诱导融合的原理？ 注射抗原注射抗原b淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选细胞融合、筛选杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养细胞培养筛选，继续培养筛选，继续培养足够数量的、能产生足够数量的、能产生特定抗体的细胞群特定抗体的细胞群体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔单克隆抗体单克隆抗体l本过程利用了哪些原本过程利用了哪些原理？理？l为什么选用小鼠骨髓为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与瘤细胞与b细胞融合？细胞融合？免疫原理，细胞融合原免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培

15、养原理理和动物细胞培养原理这样融合成的杂交瘤细胞，这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有质，不仅具有b细胞分泌抗细胞分泌抗体的能力，而且还有无限体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体得大量单克隆抗体 单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用 与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，灵敏度高，优越性十分明显灵敏度高，优越性十分明显。应用主要有：应用主要有：1、临床诊断、临床诊断2、作为载体，运载抗癌药物，形成、作为载体，运载抗癌药物，形

16、成“生物导弹生物导弹”治疗肿瘤治疗肿瘤资料资料：目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗体。许多目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、内分泌疾病缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、内分泌疾病和遗传病，用单克隆抗体作为诊断手段，是一个必然趋势。另外，和遗传病，用单克隆抗体作为诊断手段，是一个必然趋势。另外，用单克隆抗体做体内诊断，借以鉴别和定位体内用单克隆抗体做体内诊断，借以鉴别和定位体内“病灶病灶”也引起也引起人们的注意，目前，主要用于肿瘤追踪及心肌梗塞的诊断。人们的注意，目前，主要用于肿瘤追踪及心肌梗塞的诊断。 练习：下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风练习：下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案杆菌的实验方案2、该方案能达到预期效果吗？为什么？、该方案能达到预期效果吗？为什么？4、图中、图中b为为_过程，常用过程，常用_作为诱导剂，该细胞继作为诱导剂，该细胞继承承_的遗传特性，既能的遗传特性，既能_,又能又能_。1、该实验方案的目的是、该实验方