淋巴细胞亚群

1、机体免疫状态是衡量机体是否患病的重要指标， 目前多采用流式细胞术来监 测机体的免疫状态，其中最重要的指标是检测 T、B和NK淋巴细胞的水平。T细胞主要包括T辅助细胞（Th）和T抑制细胞（Ts）细胞亚群。CD3+ 细胞代表外周血中总的成熟 T细胞，理论上应约等于 CD4+细胞和CD8+细 胞的总和，但往往出现CD4+加CD8+细胞之和大于CD3+,这是因为CD4+ 细胞包括CD3+/CD4+细胞（真正Th细胞）和CD3-CD4+细胞（非Ts细胞）， 而后者包括CD3-CD8+CD16+56+细胞（一部分NK细胞）和 CD3-CD8+CD16+56-（未知细胞）。由此可见，真正的TH细胞是CD3+

2、CD4+ 细胞，真正Ts细胞是CD3+CD8+细胞。尤其当患者NK细胞明显增加时， 会使CD4细胞和CD8细胞的总和远大于CD3+细胞，因此，用三色荧光标 记才能分析真正的辅助性 T细胞和抑制性T细胞。首先在淋巴细胞中识别出 CD3细胞，然后在CD3细胞中再区分CD4+和 CD8+细胞。NK细胞的表面无T细胞和B细胞表面标志，但有CD16和CD56 等标志，用CD16+56抗体能鉴定出NK细胞（一定是CD3阴性）， CD3-CD16+56+细胞才是真正的NK细胞。根据是否表达CD8 ,又可将NK 细胞分为CD3-CD8+CD16+56+细胞（所占比例小，不影响 CD8比例）和 CD3-CD8-

3、CD16+56+ 细胞（主要成分）。B细胞的表面标志是 CD19 ,理论上CD3-CD19+细胞才是真正的B淋巴细 胞。但CD3+CD19+细胞很少，可忽略不计，所以 CD19+细胞就是B淋巴 细胞。在抗肿瘤效应中，CD4和CD8分别是T淋巴细胞的辅助/诱导细胞亚群与抑制/细胞毒细胞亚群，CD4细胞的主要功能是通过其分泌的淋巴因子， 增强和扩大免疫应答过程，辅助诱导其它免疫细胞如杀伤性T细胞，B细胞等共同发挥抗肿瘤作用，CD4细胞的减少，导致免疫功能低下。CD4/CD8 比值是重要的免疫状态监测指标，其比例的降低与免疫系统损害的程度相 关。CD4降低见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷症、艾滋病、应用

4、免疫抑制剂者； CD8降低见于自身免疫性疾病或变态反应性疾病；CD4/CD8比值升高见于恶性肿瘤、自身免疫性疾病、变态反应、病毒感染等；CD4/CD8比值降低见于艾滋病(常小于。监测器官移植排斥反应时，CD4/CD8比值升高预示可 能发生排斥反应。淋巴细胞担负着免疫的主要功能。淋巴细胞亚群的测定有助于了解机体免疫状况及一些疾病的监测。利用各种单克隆 抗体与淋巴细胞表面的抗原结合，再配合多色荧光染料，通过流式细胞仪检测分析即可以把各种不同功能的淋巴亚群 区分开来，进而得到各亚群的相对比例。最常检测的亚群包括T细胞(CD3、B细胞(CD19、NK细胞(CD16+56、辅助性T细胞(CD3+CD4+

5、和抑制性 T细胞(CD3+CD8 +等等。(1)应用CD3/CD19区分T淋巴细胞和B淋巴细胞CD3是T细胞的特异性抗原，CD19则用来识别B细胞.因此应用CD3/CD1狈标试剂即可以区分和鉴定 T淋巴细胞和B 淋巴细胞亚群；CD3 CD19阳性表达为独立的阳性细胞群体。如出现双阳性细胞均为假象。这样就可不用同型对照来 设定阴性或阳性界线。此外，此检测还会出现双阴性群体，这些都是NK细胞，这些细胞也提供了双阴性群体的对照。(2)应用CD3/CD4来鉴定CD4+T细胞首先用CD3来区分全部T细胞.而CD3/CD4双阳性细胞为真正的辅助/诱导性T细胞，这是HIV病毒感染的主要对象;CD3-/CD4

6、+细胞群是由单核细胞组成，这些细胞相对于CD4并口 T细胞来说弱表达 CD4在光散射参数的位置分布也较广。所以CD3/CD4抗体组合能够完全把 CD4阳性辅助/诱导性T细胞区分开。另外，应用适当的双色组合如CD4与CD29,CD4与CD45RA也可以测定 T辅助细胞的的亚群。如 CD4+2H4(CD45RA)+细胞是Ts的诱导细胞；CD4+ 4B4 (CD29)+ 细胞Th的诱导细胞。同理，？利用CD8+CD45RA CD8+CD29S6F1可测定T抑制细胞的亚群。T辅助细胞还可分成 Th1、 Th2两个亚群，同时标记细胞内细胞因子 IFN- 丫和IL-4 ,可区分Th1细胞(CD4+/IFN

7、- 丫 +)和Th2细胞(CD4+/IL-4+ )。(3)应用CD3/CD8鉴定CD8+T淋巴细胞CD8的表达不只限于细胞毒性 T细胞，此抗原在部分的 NK细胞上也能检测到。所以利用 CD3抗体才能把该细胞亚群分 开。若采用三色测定可给出更为准确的各亚群的情况：如真正的T辅助细月应是CD3+ CD4+CD8-真正的T抑制细胞应是CD3+CD4- CD8+单标CD8+i胞中不仅有 T抑制细胞，还含有30叱右的NK细胞；而CD3+CD4-CD御胞群是丫 S T细胞， 止匕类细胞与感染有关. CD3+CD4+ CD器田胞 +CD3+CD4-CD8+胞 +CD3+CD4-CD8 胞 +CD3+CD4+

8、CD8+胞=CD3+田胞。(4)自然杀伤细胞(NQ的检测CD16(FcRHI)表达于大多数NK细胞上，但也表达于中性粒细胞，止匕抗原NK细胞的表达比较弱，并在 NK细胞活化时丢失；CD56表达于大多数 NK细胞上，也表达于一些 T淋巴细胞，与 CD雌合使用可以区分 CD3+/CD56+楙巴细胞 和CD3-/CD56+N必田胞。联合使用 3种抗体最完全地鉴定所有的 NK细胞。NK细胞或表达CD16或表达CD56但它 们不表达CD3 CD16和CD56联合使用，根据荧光强度可将 NK细胞从双阴性细胞中区分出来。这样运用该试剂组合， NK细胞可形成独立的群体与其它细胞相区分。图1流式分析细胞亚群外周血是临床检验中的重要标本。FCM分析外周白细胞的主要目的是了解各种白细胞的数目与分群情况。以下给出常用细胞亚群的正常范围供参考，请注意同一 CD中有多种克隆的McAb,同一 CD中不同McAb所测出的数值不同，每个实验 室应测定自己实验室的正常数值：表1人外周血各细胞亚群表面抗原和流式检测的正常参考值细胞表面抗原细胞名称正常参考值(为T细胞抗原CD2总T细胞成熟T细胞辅助/诱导性细胞亚群细胞(B细胞亚群)细胞/细胞毒性细胞亚群细胞受体共刺激分子CD8+/CD28+细胞毒性T细胞抑制性细胞静止T细胞细胞抗原CD19全部B细胞全部B细