第八章细胞培养

1、第八章第八章 植物器官培养与细胞培养植物器官培养与细胞培养精品课程一、器官培养二、细胞培养 返回精品课程一、器官培养是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。（一）根的培养 利用无性繁殖系的方法，将植物种子进行表面消毒，在无菌条件下萌发，待根伸长后从根尖切取长1.0cm的根尖，接种于培养基中，待侧根生长约一周后，即可取侧根的根尖进行扩大培养。如此反复，就可得到从单个根尖而来的离体根无性系。 离体根培养所用的培养基多为无机离子浓度低的white培养基或其他培养基。 影响离体根生长的因素主要有基因型、培养条件、激素、ph、光照和温度等。精品课程精品课程不定根培养精品课程基质40d后的ph生根

2、率君柚长富20.2mg/l0.5mg/l琼 脂蛭 石珍珠岩河 沙泥 炭5.26.787.107.704.3510010085.650.330.098.645.630.025.45.296.685.065.640.020.1 不同基质对苹果离体生根的影响 精品课程樱桃木生根培养精品课程（二）茎尖的培养 根据培养目的和取材大小可分为茎尖分生组织培养和普通茎尖培养两种类型。所需培养基一般为ms培养基，培养方法一般采用固体培养，也可以用纸桥方法来培养。 影响因素有基因型、外植体的大小、生理状态、芽的生长部位、供试植株的年龄、培养基、褐变、玻璃化、遗传稳定性等。精品课程（三）叶的培养 离体叶培养是指包括

3、叶原基、叶柄、叶鞘、叶片、子叶等叶组织的无菌培养。直接产生不定芽由愈伤组织产生不定芽胚状体形成其他途径 离体叶组织的茎和芽发生途径返回（一）单细胞分离方法精品课程1、机械法 利用叶肉组织排列疏松、细胞间接触较少的特点，将叶片轻轻研碎，经过滤和离心，收集和净化细胞。a、细胞未受酶伤害b、有利于细胞的生理和生化研究。优点二、二、 植物细胞培养植物细胞培养返回2、酶法 利用果胶酶、纤维素酶来处理植物叶片或其他外植体，使细胞分离。3、化学法 利用一些化学药剂游离细胞。如秋水仙碱等。优点：是可以得到较多的叶肉游离细胞。精品课程精品课程（二）培养方法与影响因素u培养方法1、细胞悬浮培养 是将植物游离细胞或

4、细小的细胞团，在液体培养基中进行培养的方法。 大规模培养可分为两种类型，即成批培养和连续培养。精品课程特 点a、生长速度快，适于大规模培养及工业化生产有用的细胞次生代谢物b、能大量提供分散性好且较为均匀的细胞，用于细胞基础研究、突变体筛选或作为遗传转化受体等c、大规模悬浮培养成本较高精品课程建立细胞悬浮系精品课程（1）成批培养 是指细胞接种到一定容积培养基的密封系统中培养，当培养基中主要营养成分耗尽时，细胞即停止生长，完成培养过程的方法。a、培养系统密闭b、培养基体积固定c、培养数目、总重 量、dna含量变化，呈一个“s”曲线d、使细胞保持对数生长e、细胞在培养液中分布均匀。特点（2）连续培养

5、 是用一定容积但非密闭的特别容器进行大规模细胞培养的一种方法。 a、使细胞保持在增殖最快的对数生长期b、具有稳定的培养状态c、适于大规模工业化生产开放式密闭式特点精品课程精品课程2、看护培养 是用一块活跃生长的愈伤组织来促进培养细胞持续分裂和增殖的方法。特点是简便易行，效果好，但显微镜下难以追踪细胞分裂、生长过程。3、微室培养 是在人工制造的无菌小室中，将一滴悬浮细胞液培养在少量培养基上，使其分裂增殖形成细胞团的方法。特点是能连续进行显微观察，但培养基量少，培养时间短。精品课程4、平板培养 按一定细胞密度制备好单细胞悬浮液，再将含琼脂的培养基加热熔化后冷却至35左右，尚未凝固时与细胞悬浮液混合迅速倒入培养皿中形成一平板进行培养。 特点是单细胞在培养基分布均匀，便于定点观察，筛选效率高、量大，操作简便，但通气状况不佳，排泄物质易积累造成毒害或影响组织吸收。精品课程精品课程u影响因素 单细胞培养比愈伤组织培养更困难，因为它对营养条件和环境条件要求更高。培养基成分和初始细胞密度是影响单细胞培养的关键因素。 其他因素还有条件培养基、细胞起始密度、生长调节剂、ph值。精品课程1、突变体的获得 突变体离体选择时，可在单细胞、原生质体、愈伤组织、器官外植体、再生植株等培养系统中进行诱导和筛选。常见的突变