培养基的制备和高压蒸汽灭菌

1、培养基的制备培养基的制备和高压蒸汽灭菌和高压蒸汽灭菌2007.11目的与要求目的与要求n1、了解培养基的配制原理，掌握制备培养基的过程。n2、学习高压蒸汽灭菌操作技术。n3、初步掌握划线和涂布平板的技术。n4、了解抗生素对细菌的抑制作用。配培养基配培养基灭菌、倒平板灭菌、倒平板划线、涂布平板划线、涂布平板抑菌圈实验抑菌圈实验实验流程实验流程任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理培养基培养基培养基（培养基（medium)：由人工配制的适合微生物生：由人工配制的适合微生物生长、繁殖或适合积累代谢产物的营养基质。长、繁殖或适合积累代谢产物的营养基质。 在微生

2、物学研究和生长实践中，配置合适的培养在微生物学研究和生长实践中，配置合适的培养基是一项最基本的要求。基是一项最基本的要求。培养基按化学成分来分类按物理状态来分类按功能进行分类天然培养基合成培养基半合成培养基固体培养基液体培养基半固体培养基脱水培养基基础（本）培养基营养（加富）培养基完全培养基选择培养基鉴别培养基培养基的配制过程培养基的配制过程v计算用量:200ml固体培养基v称量：托盘天平v溶解：自来水v调ph：自然phv灭菌：v一般培养基，一般培养基， 121 121 0 0c, 15-30minc, 15-30min：20min20min；v含糖培养基： 112 0c, 15-30min；

3、v易产生沉淀的物质：分别灭菌后再混合v倒平板3g/l 牛肉膏10g/l 蛋白胨5g/l nacl2% 琼脂粉灭菌灭菌灭菌（灭菌（sterilization）是指利用物理、化学等）是指利用物理、化学等手段杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢手段杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢子的过程。子的过程。灭菌方法化学药品灭菌辐射灭菌过滤除菌加热法干热灭菌湿热灭菌火焰灼烧热空气灭菌煮沸消毒法常压蒸汽灭菌法高压蒸汽法高压蒸汽法高压蒸汽灭菌锅的构造高压蒸汽灭菌锅的构造高压蒸汽灭菌锅的使用高压蒸汽灭菌锅的使用待灭菌物品的包扎待灭菌物品的包扎装锅、加水装锅、加水加盖加盖 （对角线均匀拧旋）对角线均匀拧旋）升温、排气升温

4、、排气（放大气（放大气5min）恒温恒温切断电源、冷却切断电源、冷却开锅取物开锅取物12120min倒平板倒平板u 融化的琼脂培养基融化的琼脂培养基,冷却至冷却至50左右左右(以手背能忍受以手背能忍受的温度为准的温度为准)平板划线的基本程序平板划线的基本程序灭菌接种环灭菌接种环沾取菌液沾取菌液接种接种灭菌接种环灭菌接种环杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境连续划线法连续划线法灭菌过的移液管灭菌过的移液管吸取菌液吸取菌液0.1ml滴在培养皿中央滴在培养皿中央用灭菌的涂布棒均匀涂布：用灭菌的涂布棒均

5、匀涂布：将菌悬液先沿一条直线轻轻地来回推动,使之分布均匀，然后改变方向沿另一垂直来回推动，平板内边缘处可改变方向用三角玻扒再涂布几次。三角铁扒三角铁扒平板涂布的基本程序平板涂布的基本程序涂布好的平板涂布好的平板滤纸片滤纸片抑菌圈实验抑菌圈实验青霉素青霉素每组4人n需要灭菌的东西：需要灭菌的东西：n固体培养基200ml（2g蛋白胨，0.6g牛肉膏，1gnacl，4g琼脂，自来水200ml，自然ph）n培养皿10个（每人倒平板两个，一个划线，一个涂布；涂布的那个用于抑菌圈实验）n1ml移液管4支(每人1支）n滤纸片，每人两片，每组需剪10片，装入培养皿中灭菌思考题思考题n1、总结一下，配制培养基应

6、注意哪些、总结一下，配制培养基应注意哪些问题。问题。n2、高压灭菌的关键是什么？、高压灭菌的关键是什么？n3、加入青霉素滤纸的涂布平板究竟会、加入青霉素滤纸的涂布平板究竟会产生什么样的效果，为什么？产生什么样的效果，为什么？n（1）加入适量自来水于灭菌锅中（至水位线）。）加入适量自来水于灭菌锅中（至水位线）。n（2）放入需要灭菌的东西。）放入需要灭菌的东西。注意：不要摆得太挤，以免影响蒸汽流通和灭菌效果。注意：不要摆得太挤，以免影响蒸汽流通和灭菌效果。n（3）加盖旋紧螺旋，使蒸汽锅密闭不漏气（对角线均匀拧旋）加盖旋紧螺旋，使蒸汽锅密闭不漏气（对角线均匀拧旋）n（4）打开放气阀，打开电源，自开始

7、产生大气后）打开放气阀，打开电源，自开始产生大气后5分钟（此时蒸汽锅分钟（此时蒸汽锅内的冷空气由排气阀排尽），关紧放气阀，让温度随蒸汽压力上升而内的冷空气由排气阀排尽），关紧放气阀，让温度随蒸汽压力上升而上升，当达所需压力时（即温度上升到上升，当达所需压力时（即温度上升到121），控制热源维持所需时），控制热源维持所需时间（间（20分钟），然后停止加热，让其自然冷却。分钟），然后停止加热，让其自然冷却。注意：应用此法灭菌是否彻底的一个重要关键是在压力上升之前，必须将注意：应用此法灭菌是否彻底的一个重要关键是在压力上升之前，必须将锅内的冷空气完全排尽。锅内的冷空气完全排尽。n（5）待压力降至）待压力降至0磅时，打开排气阀，再打开锅盖，取出灭菌物。磅时，打开排气阀，再打开锅盖