第二章蛋白质化学2

1、l蛋白质是由一条或多条多肽蛋白质是由一条或多条多肽( (polypeptide) )链链以特殊方式结合而成的生物大分子。以特殊方式结合而成的生物大分子。l蛋白质与多肽并无严格的界线，通常是将分蛋白质与多肽并无严格的界线，通常是将分子量在子量在60006000道尔顿以上的多肽称为蛋白质。道尔顿以上的多肽称为蛋白质。l蛋白质分子量变化范围很大蛋白质分子量变化范围很大, , 从大约从大约60006000到到10000001000000道尔顿甚至更大。道尔顿甚至更大。l多肽链的氨基酸顺序；多肽链的氨基酸顺序；l化学键：肽键。化学键：肽键。l一一. .蛋白质的一级结构蛋白质的一级结构 a链链 gly.t

2、le.val.glu.gln.cys.cys.aln.ser.val.cys.ser.leu.tyr.gln.leu.glu.asn.tyr.cys.asn oh 1 2 6 7 11 20 b链链phe.val.asn.gln.his.leu.cys.gly.ser.his.leu.val.glu.ala.leu.tyr.leu.val.cys.gly.glu.arg. 1 2 7 19 gly.phe.phe.tyr.thr.pro.lys.ala oh 30 牛牛胰胰岛岛素素的的化化学学结结构构ssssss我国我国19651965年在世界上第一个用化学方法人工年在世界上第一个用化学方法人

3、工合成的蛋白质就是这种牛胰岛素。合成的蛋白质就是这种牛胰岛素。l肽链主链骨架原子的相对空间位置，肽链主链骨架原子的相对空间位置，不涉及残基侧链。化学键：不涉及残基侧链。化学键：氢键氢键。l主要有主要有 - -螺旋、螺旋、 - -折叠、折叠、 - -转角、转角、无规卷曲、无规卷曲、 - -螺旋、螺旋、 环等。环等。l二二. .蛋白质的二级结构蛋白质的二级结构l多肽链中的各个肽平面围绕同一多肽链中的各个肽平面围绕同一轴旋转，形成螺旋结构，螺旋一轴旋转，形成螺旋结构，螺旋一周，沿轴上升的距离即螺距为周，沿轴上升的距离即螺距为0.54nm,含含3.6个氨基酸残基；两个氨基酸残基；两个氨基酸之间的距离为

4、个氨基酸之间的距离为0.15nm;l肽链内形成氢键，氢键的取向几肽链内形成氢键，氢键的取向几乎与轴平行，第一个氨基酸残基乎与轴平行，第一个氨基酸残基的酰胺基团的的酰胺基团的-co基与第四个氨基与第四个氨基酸残基酰胺基团的基酸残基酰胺基团的-nh基形成基形成氢键。氢键。l氨基酸残基氨基酸残基r-侧链分布在螺旋外侧链分布在螺旋外侧。侧。l多为右手多为右手 -螺旋。螺旋。l - -折叠是由两条或多条几乎完全伸展的肽链平行折叠是由两条或多条几乎完全伸展的肽链平行排列，通过链间的氢键交联而形成的。几乎所有排列，通过链间的氢键交联而形成的。几乎所有肽键都参与链内氢键的交联，氢键与链的长轴接肽键都参与链内氢

5、键的交联，氢键与链的长轴接近垂直；肽链的主链呈锯齿状折叠构象；近垂直；肽链的主链呈锯齿状折叠构象；l在在 - -折叠中，折叠中， - -碳原子总是处于折叠的角上，氨碳原子总是处于折叠的角上，氨基酸的基酸的r r基团处于折叠的棱角上并与棱角垂直，两基团处于折叠的棱角上并与棱角垂直，两个氨基酸残基之间的轴心距为个氨基酸残基之间的轴心距为0.35nm0.35nm； l - -折叠有两种类型。一种为平行式，即所有折叠有两种类型。一种为平行式，即所有肽链的肽链的n-n-端都在同一边。另一种为反平行式，端都在同一边。另一种为反平行式，即相邻两条肽链的方向相反。即相邻两条肽链的方向相反。l在蛋白质分子中，肽

6、链在蛋白质分子中，肽链出现出现1801800 0回折。回折。l在在 - -转角部分，由四个转角部分，由四个氨基酸残基组成氨基酸残基组成; ;l弯曲处的第一个氨基酸弯曲处的第一个氨基酸残基的残基的 -c=o -c=o 和第四个和第四个残基的残基的 n-h n-h 之间形成之间形成氢键，形成一个不很稳氢键，形成一个不很稳定的环状结构。定的环状结构。l这类结构主要存在于球这类结构主要存在于球状蛋白分子中。状蛋白分子中。超二级结构：超二级结构：若干相邻的二级结构单元按照一定规若干相邻的二级结构单元按照一定规律有规则组合在一起，相互作用，形成在空间构象律有规则组合在一起，相互作用，形成在空间构象上可彼此

7、区别的二级结构组合单位。介于二级结构上可彼此区别的二级结构组合单位。介于二级结构与三级结构之间。与三级结构之间。 、 、结构域：结构域：是存在于球状蛋白质分子中的两个或多个是存在于球状蛋白质分子中的两个或多个相对独立的、在空间上能辨认的三维实体相对独立的、在空间上能辨认的三维实体, ,每个由每个由二级结构组合而成二级结构组合而成, ,充当三级结构的构件充当三级结构的构件, ,其间由单其间由单肽链连接。肽链连接。三级结构三级结构( (tertiary structure) )是指是指多肽链在多肽链在二级结构基础上非几何状地进一步折叠或卷二级结构基础上非几何状地进一步折叠或卷曲成复杂的空间结构。包

8、括肽链中所有原子曲成复杂的空间结构。包括肽链中所有原子的空间排布方式。的空间排布方式。 维系这种特定结构的力维系这种特定结构的力主要是次级键。尤其是主要是次级键。尤其是疏水作用力疏水作用力，在蛋白，在蛋白质三级结构中起着重要作用。质三级结构中起着重要作用。l三级结构中包含的共价键是三级结构中包含的共价键是二硫键、配位键。二硫键、配位键。（一）蛋白质分子结构中的（一）蛋白质分子结构中的化学键化学键1.1.共价键共价键l蛋白质分子中的共价键有蛋白质分子中的共价键有肽键、二硫键和配肽键、二硫键和配位键位键，是生物大分子分子之间最强的作用力。，是生物大分子分子之间最强的作用力。l二硫键：二硫键：由含硫

9、氨基酸形成。在蛋白质分子由含硫氨基酸形成。在蛋白质分子中，起着稳定肽链空间结构的作用。二硫键中，起着稳定肽链空间结构的作用。二硫键被破坏，蛋白质的生物活性丧失。被破坏，蛋白质的生物活性丧失。l配位键：配位键：两个原子之间形成的共价键，共用两个原子之间形成的共价键，共用电子对由其中的一个原子提供。金属离子与电子对由其中的一个原子提供。金属离子与蛋白质的结合往往是配位键，例如：血红蛋蛋白质的结合往往是配位键，例如：血红蛋白、细胞色素白、细胞色素c c等。等。l 二二 硫硫 键键 半半 胱胱 氨氨 酸酸 半半 胱胱 氨氨 酸酸 胱胱 氨氨 酸酸-sh-sh 巯（巯（ 读读“ “ qiu”, qiu”

10、, 音音 同同 球球 ) )基基 价价 键键 牢牢 固，固， 稳稳 定定 蛋蛋 白白 质质 结结 构构+chnh2coohch2shchnh2coohch2shh2chnh2coohch2schnh2coohch2sl共价键存在于一个分子或多个分子的原共价键存在于一个分子或多个分子的原子之间，决定分子的基本结构。子之间，决定分子的基本结构。l非共价键（又称为次级键或分子间力）非共价键（又称为次级键或分子间力）决定生物大分子和分子复合物的高级结决定生物大分子和分子复合物的高级结构。构。l在蛋白质分子中，丝氨酸和苏氨酸的羟基在蛋白质分子中，丝氨酸和苏氨酸的羟基与氨基酸的羧基缩合成酯，形成酯键。与氨

11、基酸的羧基缩合成酯，形成酯键。l磷酸与含羟基氨基酸缩合形成磷酸酯键。磷酸与含羟基氨基酸缩合形成磷酸酯键。l又称盐键，一种具有相反电荷的两个基又称盐键，一种具有相反电荷的两个基团之间的库仑作用。这种键可以解离。团之间的库仑作用。这种键可以解离。l氢键是由两个负电性原子对氢原子的静氢键是由两个负电性原子对氢原子的静电引力所形成。电引力所形成。x xh hy y它是质子给予体它是质子给予体x-hx-h和质子接受体和质子接受体y y之间的一种特殊类型之间的一种特殊类型的相互作用。的相互作用。 l氢键具有方向性，氢键的方向用键角表氢键具有方向性，氢键的方向用键角表示，是指示，是指x xh h与与h hy

12、 y之间的夹角，一般之间的夹角，一般为为180180 250250 。 l这是一种普遍存在的作用力，是原子、这是一种普遍存在的作用力，是原子、基团或分子之间比较弱的、非特异性的基团或分子之间比较弱的、非特异性的作用力。作用力。l这种作用力分：极性基团之间的相互吸这种作用力分：极性基团之间的相互吸引（取向力）；极性基团与非极性基团引（取向力）；极性基团与非极性基团之间的相互吸引（诱导力）；非极性基之间的相互吸引（诱导力）；非极性基团之间的相互吸引（色散力）。团之间的相互吸引（色散力）。l非极性侧链在极性溶剂非极性侧链在极性溶剂水中为了避开水相而彼水中为了避开水相而彼此靠近所产生的一种作此靠近所产

13、生的一种作用力。主要存在蛋白质用力。主要存在蛋白质的内部结构。的内部结构。l蛋白质和酶的表面通常蛋白质和酶的表面通常具有极性链或区域，这具有极性链或区域，这是由构成它们的氨基酸是由构成它们的氨基酸侧链上的烷基链或苯环侧链上的烷基链或苯环在空间上相互接近时形在空间上相互接近时形成的。成的。l 键 能l肽键肽键 l二硫键二硫键l离子键离子键 l氢键氢键l疏水键疏水键 l范德华力范德华力 90kcal/mol3kcal/mol1kcal/mol1kcal/mol0.1kcal/mol这四种键能远小于共价键，称这四种键能远小于共价键，称次级键次级键提问：次级键微弱但却是提问：次级键微弱但却是维持蛋白质

14、三维结构中主维持蛋白质三维结构中主要的作用力要的作用力,原因何在原因何在?l已知某分子量为已知某分子量为240000240000的蛋白质多肽链的一些的蛋白质多肽链的一些节段是节段是 - -螺旋螺旋, ,而另一些节段是而另一些节段是 - -折叠折叠, ,其分子长其分子长度为度为5.06x10 5.06x10 -5-5 cm, cm,求分子求分子 - -螺旋和螺旋和 - -折叠的百折叠的百分率分率？解解:aa:aa残基的平均分子量是残基的平均分子量是120120 设设: : - -螺旋含有螺旋含有x x个残基个残基 - -折叠含有折叠含有2000-x2000-x 0.15x+0.35(2000-x

15、)=5.06 0.15x+0.35(2000-x)=5.06* *10(-5)10(-5)* *10(7)10(7)l(quaternary structure)是指由多条各自是指由多条各自具有一、二、三级结构的肽链通过非共具有一、二、三级结构的肽链通过非共价键连接起来的结构形式；各个亚基在价键连接起来的结构形式；各个亚基在这些蛋白质中的空间排列方式及亚基之这些蛋白质中的空间排列方式及亚基之间的相互作用关系。间的相互作用关系。l这种蛋白质分子中，最小的单位通常称这种蛋白质分子中，最小的单位通常称为亚基或亚单位为亚基或亚单位subunit，它一般由一条，它一般由一条肽链构成，无生理活性；肽链构成

16、，无生理活性；l维持亚基之间的化学键主要是疏水作用维持亚基之间的化学键主要是疏水作用力。力。l由数条具有三级结构的由数条具有三级结构的蛋白质通过蛋白质通过次级键次级键叠合叠合而成而成l亚基单独没有生物功能亚基单独没有生物功能l亚基具有独立的结构单亚基具有独立的结构单位位 血红蛋白血红蛋白血红蛋白血红蛋白四亚基两两相同，分别称四亚基两两相同，分别称为为1 、2、1、2；l虾红素虾红素l蛋白质的分子具有多种多样的生物功能是以其庞大的分子蛋白质的分子具有多种多样的生物功能是以其庞大的分子组成和极为复杂的结构为基础的，充分认识这其间的关系组成和极为复杂的结构为基础的，充分认识这其间的关系是是人工合成功

17、能蛋白质人工合成功能蛋白质的基础的基础。l一一. .一级结构与功能的关系一级结构与功能的关系l血红蛋白血红蛋白l例如镰刀形贫血病的分子机理例如镰刀形贫血病的分子机理l镰刀状贫血病镰刀状贫血病血液中大量出现血液中大量出现镰刀红细胞，患镰刀红细胞，患者因此缺氧窒息者因此缺氧窒息l正常细胞正常细胞 镰刀形细胞镰刀形细胞w它是最早认识的它是最早认识的一种分子病。流一种分子病。流行于非洲，死亡行于非洲，死亡率极高，大部分率极高，大部分患者童年时就夭患者童年时就夭折，活过童年的折，活过童年的寿命也不长，它寿命也不长，它是由于遗传基因是由于遗传基因突变导致血红蛋突变导致血红蛋白分子结构的突白分子结构的突变。

18、变。l正常型正常型 -val-his-leu-thr-pro-glu-lys -l链链 谷氨酸谷氨酸l镰刀型镰刀型 -val-his-leu-thr-pro-val-lys -l链链 缬氨酸缬氨酸l谷谷a（极性）（极性） 缬缬a（非极性）（非极性）l(了解了解)由于缬氨酸上的非极性基团与相邻非极性基团由于缬氨酸上的非极性基团与相邻非极性基团间在疏水力作用下相互靠拢，并引发所在链扭曲为间在疏水力作用下相互靠拢，并引发所在链扭曲为束状，整个束状，整个蛋白质由球状变为镰刀形，蛋白质由球状变为镰刀形，与氧结合功与氧结合功能丧失，能丧失， 导致病人窒息甚至死亡。导致病人窒息甚至死亡。缬缬 天天 天天天天

19、天天赖赖缬缬 甘甘组组缬缬 天天 天天天天天天赖赖甘甘 组组ss缬缬ss提问：提问：为什么不直接以酶形式存在呢？为什么不直接以酶形式存在呢？答案：答案：保护正常组织不受伤害保护正常组织不受伤害。4646183183二.高级结构与功能的关系l变构蛋白变构蛋白:一些蛋白质可通过改变其构象一些蛋白质可通过改变其构象 l 来改变其生物活性来改变其生物活性.l肌红蛋白肌红蛋白 血红蛋白血红蛋白 血红蛋白血红蛋白l氨基酸序列大不相同，氨基酸序列大不相同，功能相似（载氧），结构相似功能相似（载氧），结构相似l结构决定功能结构决定功能1.1.氧合血红蛋白氧合血红蛋白2.2.氧饱和曲线氧饱和曲线 s s形形3.

20、3.变构作用变构作用: :当血当血红蛋白的一个亚红蛋白的一个亚基结合氧后基结合氧后, ,使整使整个分子的构象发个分子的构象发生变化生变化, ,对氧的亲对氧的亲和力增加和力增加. .(r)relaxed state(t) tense state 血中氧分子的运送：lungmuscle静脉动脉环境氧高时hb 快速吸收氧分子环境氧低时hb 迅速释放氧分子释放氧分子后hb 变回 t state任何一个亚基接受氧分子后，会增进其它亚基吸附氧分子的能力l蛋白质与氨基酸一样，能够发生两性离蛋白质与氨基酸一样，能够发生两性离解，也有等电点。在等电点时，蛋白质解，也有等电点。在等电点时，蛋白质的溶解度最小，在电

21、场中不移动。的溶解度最小，在电场中不移动。l在不同的在不同的phph环境下，蛋白质的电学性质环境下，蛋白质的电学性质不同。在大于等电点的不同。在大于等电点的phph溶液中，蛋白溶液中，蛋白质粒子带负电荷，在电场中向正极移动；质粒子带负电荷，在电场中向正极移动；在小于等电点的在小于等电点的phph溶液中，蛋白质粒子溶液中，蛋白质粒子带正电荷，在电场中向负极移动。带正电荷，在电场中向负极移动。l蛋白质的两性电离及等电点蛋白质的两性电离及等电点l提问：提问：为什么蛋白质具有两性（酸、碱性）？为什么蛋白质具有两性（酸、碱性）？l含有酸碱氨基酸残基含有酸碱氨基酸残基l碱碱/ /酸酸 越大越大 pipi

22、？ l越大越大lpi通常在通常在 6.0 左右左右蛋白质 酸性氨基酸，每摩尔残基数 碱性氨基酸， 每摩尔残基数 碱性/酸性 等电点 胃蛋白酶 37 8 02 10 血清蛋白 82 99 12 47 血红蛋白 53 88 17 67 核糖核酸酶 7 20 29 95 l蛋白质在等蛋白质在等电点电点phph条件条件下，不发生下，不发生电泳现象。电泳现象。利用蛋白质利用蛋白质的电泳现象，的电泳现象，可以将蛋白可以将蛋白质进行分离质进行分离纯化。纯化。l由于蛋白质的分子量很大，它在水中能由于蛋白质的分子量很大，它在水中能够形成胶体溶液。蛋白质溶液具有胶体够形成胶体溶液。蛋白质溶液具有胶体溶液的典型性质

23、，如丁达尔现象、布郎溶液的典型性质，如丁达尔现象、布郎运动等。运动等。l由于胶体溶液中的蛋白质不能通过半透由于胶体溶液中的蛋白质不能通过半透膜，因此可以应用透析法将非蛋白的小膜，因此可以应用透析法将非蛋白的小分子杂质除去。分子杂质除去。l蛋白质的胶体性质蛋白质的胶体性质提问：提问：什么样的分子什么样的分子是是胶体性质胶体性质？l答案：答案：分子直径分子直径胶胶体颗粒大小（体颗粒大小（1100 1100 nm)nm)且不易聚集沉淀。且不易聚集沉淀。l大多数球状蛋白溶于大多数球状蛋白溶于水，能形成稳定的水，能形成稳定的胶胶体溶液体溶液。w提问：提问：蛋白质胶体蛋白质胶体溶液的稳定的原因溶液的稳定的

24、原因是什么？是什么？w答案：答案：w1.1.同种蛋白质带有同种蛋白质带有同种电荷，相互排同种电荷，相互排斥；斥；w2.2.水膜弹性水膜弹性l等电点沉淀的蛋白质溶液中等电点沉淀的蛋白质溶液中加入低浓度加入低浓度nacl后沉淀溶解后沉淀溶解盐溶盐溶l提问：提问：原因？原因？分子在等电点时，相互吸引，聚合沉淀，分子在等电点时，相互吸引，聚合沉淀，加入少加入少量盐离子量盐离子后破坏了这种吸引力，使分子分散，后破坏了这种吸引力，使分子分散，溶于水中溶于水中盐溶盐析l向蛋白质溶液中加入大量硫酸铵后蛋白向蛋白质溶液中加入大量硫酸铵后蛋白质会沉淀析出质会沉淀析出l提问：提问：原因？原因？蛋白质分子表面的亲水区

25、域，聚集了许多水分子，蛋白质分子表面的亲水区域，聚集了许多水分子，盐盐浓度高浓度高时，这些水分子被盐抽出，暴露出的疏水时，这些水分子被盐抽出，暴露出的疏水区域相互结合，沉淀。区域相互结合，沉淀。盐析（盐析（nh4）2so4）l中性盐沉淀中性盐沉淀l有机溶剂沉淀有机溶剂沉淀l重金属盐沉淀重金属盐沉淀l生物碱沉淀生物碱沉淀l1.1.定义：某些物理或化学因素，能够破定义：某些物理或化学因素，能够破坏蛋白质的结构状态，引起蛋白质理化坏蛋白质的结构状态，引起蛋白质理化性质改变并导致其生理活性丧失。这种性质改变并导致其生理活性丧失。这种现象称为蛋白质的变性现象称为蛋白质的变性( (denaturation

26、)。l即蛋白质保持一级结构不变的情况下，即蛋白质保持一级结构不变的情况下，二、三、四级结构被破坏蛋白质的物理、二、三、四级结构被破坏蛋白质的物理、化学性质发生变化。化学性质发生变化。l生物活性的丧失生物活性的丧失l一些侧链基团的暴露一些侧链基团的暴露l某些物理化学性质的改变某些物理化学性质的改变l2.变性因素变性因素：l（1）物理因素）物理因素l有哪些？有哪些？l加热（加热（70100）、剧烈振荡或搅拌）、剧烈振荡或搅拌l例如例如 卤水（少量卤水（少量mgcl2）点豆腐、煎炒烹炸）点豆腐、煎炒烹炸l紫外线、紫外线、x射线、超生波射线、超生波l例如例如 皮肤粗糙、白内障、杀菌皮肤粗糙、白内障、杀

27、菌l（2）化学因素）化学因素l有哪些？有哪些？l强酸、强碱、尿素、胍、去污剂、甲醛、重金属盐、强酸、强碱、尿素、胍、去污剂、甲醛、重金属盐、三氯醋酸、磷钨酸、苦味酸、浓乙醇。三氯醋酸、磷钨酸、苦味酸、浓乙醇。l例如例如 胃酸、硫酸铜杀菌、烈酒胃酸、硫酸铜杀菌、烈酒l（3）机理）机理l分子机理？分子机理？l变性因素变性因素破坏破坏了维持蛋白质空间结构的各种了维持蛋白质空间结构的各种次级键以及二硫键。次级键以及二硫键。l重金属重金属与与-sh生成不溶性的硫化物生成不溶性的硫化物l浓乙醇、去污剂浓乙醇、去污剂破坏疏水作用力破坏疏水作用力l大部分蛋白质均含有带芳香环的苯丙氨大部分蛋白质均含有带芳香环的

28、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。酸、酪氨酸和色氨酸。l这三种氨基酸的在这三种氨基酸的在280nm 280nm 附近有最大吸附近有最大吸收。因此，大多数蛋白质在收。因此，大多数蛋白质在280nm 280nm 附近附近显示强的吸收。显示强的吸收。l利用这个性质，可以对蛋白质进行定性利用这个性质，可以对蛋白质进行定性鉴定。鉴定。一一. 分离纯化的一般原则分离纯化的一般原则1. 用物理和化学的方法进行粗提。用物理和化学的方法进行粗提。2. 利用沉淀、盐析、有机溶剂分级分离，利用沉淀、盐析、有机溶剂分级分离， 色谱、电泳等方法进行纯化。色谱、电泳等方法进行纯化。3. 蛋白质结晶。蛋白质结晶。1.根据分子大小的

29、分离方法根据分子大小的分离方法 透析和超过滤、密度梯度离心、凝胶过滤透析和超过滤、密度梯度离心、凝胶过滤2. 利用溶解度差别的分离方法利用溶解度差别的分离方法 等电点沉淀法、盐溶与盐析、有机溶剂沉淀等电点沉淀法、盐溶与盐析、有机溶剂沉淀3. 根据电荷不同的分离方法根据电荷不同的分离方法 电泳、离子交换法电泳、离子交换法4. 蛋白质的选择吸附分离蛋白质的选择吸附分离 5. 根据配体特异性的分离根据配体特异性的分离-亲和层析亲和层析l二、分离纯化的方法二、分离纯化的方法v1. 蛋白质含量测定蛋白质含量测定 凯氏定氮法、双缩脲法、凯氏定氮法、双缩脲法、lowry法、紫法、紫 外吸收法、考马斯亮蓝法外

30、吸收法、考马斯亮蓝法v 2.蛋白质的纯度的鉴定蛋白质的纯度的鉴定 聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳v 3.蛋白质相对分子量的测定蛋白质相对分子量的测定 凝胶过滤法、凝胶过滤法、sds-pagel蛋白质的分子量蛋白质的分子量l一般在一万至一百万（一般在一万至一百万（1道尔道尔顿顿1c12绝对质量绝对质量/121.661010-27-27千克千克）之间）之间l常用的测定方法有常用的测定方法有渗透压法、渗透压法、超离心法、凝胶过滤法超离心法、凝胶过滤法等等。l凝胶法只适于球状蛋白分子测量凝胶法只适于球状蛋白分子测量蛋白质混合样蛋白质混合样6000080000转/分重力60万80万倍l蛋白质氨基酸

31、顺序的测定是蛋白质化学蛋白质氨基酸顺序的测定是蛋白质化学研究的基础。自从研究的基础。自从19531953年年f.sangerf.sanger测定测定了胰岛素的一级结构以来，现在已经有了胰岛素的一级结构以来，现在已经有上千种不同蛋白质的一级结构被测定。上千种不同蛋白质的一级结构被测定。 l样品必需纯（样品必需纯（97%97%以上）；以上）；l知道蛋白质的分子量；知道蛋白质的分子量；l知道蛋白质由几个亚基组成；知道蛋白质由几个亚基组成；l测定蛋白质的氨基酸组成；并根据分子测定蛋白质的氨基酸组成；并根据分子量计算每种氨基酸的个数。量计算每种氨基酸的个数。l测定水解液中的氨量，计算酰胺的含量。测定水解

32、液中的氨量，计算酰胺的含量。1.1.测定蛋白质的一级结构的要求测定蛋白质的一级结构的要求l(1) 多肽链的拆分多肽链的拆分l(2) 测定蛋白质分子中多肽链的数目测定蛋白质分子中多肽链的数目l(3) l(4)(4)测定每条多肽链的氨基酸组成，并计算出测定每条多肽链的氨基酸组成，并计算出氨基酸成分的分子比；氨基酸成分的分子比；l(5)(5)分析多肽链的分析多肽链的n-n-末端和末端和c-c-末端末端l(6)(6)多肽链断裂成多个肽段多肽链断裂成多个肽段l(7)(7)测定每个肽段的氨基酸顺序测定每个肽段的氨基酸顺序l(8)(8)确定肽段在多肽链中的次序确定肽段在多肽链中的次序l(9)(9)确定原多肽

33、链中二硫键的位置确定原多肽链中二硫键的位置v选择题选择题1. 在下列有关谷胱甘肽的叙述中在下列有关谷胱甘肽的叙述中,正确的是正确的是( ) a. 谷胱甘肽中含有胱氨酸谷胱甘肽中含有胱氨酸 b. 谷胱甘肽是体内重要的氧化剂谷胱甘肽是体内重要的氧化剂 c. 谷胱甘肽谷氨酸的谷胱甘肽谷氨酸的-羧基是游离的羧基是游离的 d. 谷胱甘肽的谷胱甘肽的c-端是主要的功能基团端是主要的功能基团2. 在有关蛋白质三级结构的描述中在有关蛋白质三级结构的描述中, 错误的是错误的是( ) a. 具有三级结构的多肽链都有生物学活性具有三级结构的多肽链都有生物学活性 b. 三级结构是单体蛋白质或亚基的空间结构三级结构是单

34、体蛋白质或亚基的空间结构 c. 三级结构的稳定性由次级键维持三级结构的稳定性由次级键维持 d. 亲水基团多位于三级结构的表面亲水基团多位于三级结构的表面3. 在有关蛋白质四级结构的描述中在有关蛋白质四级结构的描述中, 正确的是正确的是( ) a. 蛋白质四级结构的稳定性由二硫键维系蛋白质四级结构的稳定性由二硫键维系 b. 四级结构是蛋白质保持生物学活性的必要条件四级结构是蛋白质保持生物学活性的必要条件 c. 蛋白质都有四级结构蛋白质都有四级结构 d. 蛋白质亚基间由非共价键聚合蛋白质亚基间由非共价键聚合 4. 4. 每一种完整蛋白质分子必定具有（每一种完整蛋白质分子必定具有（ ） a. a.

35、螺旋螺旋 b. b. - -折叠折叠 c. c. 三级结构三级结构 d. d. 四级结构四级结构 5. 5. 盐析法沉淀蛋白质的原理盐析法沉淀蛋白质的原理 a. a. 中和电荷，破坏水化膜中和电荷，破坏水化膜 b. b. 盐与蛋白质结合成不溶性蛋白盐盐与蛋白质结合成不溶性蛋白盐 c. c. 调节蛋白质溶液的等电点调节蛋白质溶液的等电点 d. d. 降低蛋白质溶液的介电常数降低蛋白质溶液的介电常数a.b.c.d.a.b.c.d. 6. 6. 空间结构包括（）空间结构包括（） a -a -螺旋螺旋 b -b -折叠折叠 c c 结构域结构域 d d 亚基亚基 e e 超二级结构超二级结构7. 7.

36、 右手右手-螺旋螺旋 是一种很稳定的构象，稳定的主要原因（）是一种很稳定的构象，稳定的主要原因（） a a 螺旋内有芳香氨基酸残基螺旋内有芳香氨基酸残基 b b 螺旋内所有肽键的螺旋内所有肽键的-nh-nh与与coco都参与氢键形成都参与氢键形成 c c 侧链基团从螺旋中向外伸出，不彼此作用侧链基团从螺旋中向外伸出，不彼此作用 d d 每一个碳碳连键的旋转度都相同每一个碳碳连键的旋转度都相同8. -8. -转角中肽链主链出现（）转角中肽链主链出现（） a 80a 800 0 b 180 b 1800 0 c60 c600 0 d150 d1500 0 10. 变性蛋白质溶解度减少的原因是（）变性蛋白质溶解度减少的原因是（） a 蛋白质分子表面电荷减少蛋白质分子表面电荷减少 b 蛋白质分