实验三霉菌、放线菌及土壤中微生物的分离纯化

1、实验三 放线菌、霉菌的形态观察及微生物的分离纯化实验（一）放线菌、霉菌的形态观察一、实验目的噜观察放线菌、霉菌的形态结构特征学习掌握霉菌染色的基本方法碓基本掌握细菌、放线菌、酵母菌、霉菌菌落形态 特征二、实验原理放线菌是介于细菌与丝状真菌之间而又接1、放线菌：近于细菌的一类丝状原核生物，因菌落呈放射状而得名。放线菌的菌落在培养基上着生牢固，不易被接种针挑取， 由于胞子的存在，常使菌落表面呈粉末状。它和细菌单染色一样， 可用石炭酸复红和吕氏美蓝等染料着色后，在显微镜下观察它们 的形态。放线菌是由不同长短的纤细的菌丝所组成的单细胞菌丝 体，菌丝内无隔膜，菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的营养 菌丝

2、（基内菌丝）和有营养菌丝向上生长的气生菌丝，有些气生 菌丝分化成各种葩子丝，呈螺旋状、波浪形或分枝状等，着生形 式有丛生、互生和轮生三种。葩子的表面光滑或粗糙，圆或椭圆 和干形。胞子有各种颜色。这些形态特点都是鉴别放线菌的重要 依据。营养菌丝：又叫初级菌丝体或一级菌丝体，匍匐生长于培 养基内，主要生理功能是吸收营养物，故亦称基内菌丝。营养菌丝 一般无隔膜，直径0.2-0.8|1,但长度相差很大，短的小于100p, 长的可达600以上，有的无色素，有的产生黄.橙.红.紫.兰、 绿.褐.黑等不同色素，若是水溶性的色素，还可透入培养基内， 将培养基染上相应的颜色，如果是非水溶性（脂溶性）色素，则使

3、菌落呈现相应的颜色，因此，色素是鉴定菌种的重要依据。气生菌丝：又称二级菌丝体。营养菌丝体发育到一定时期， 长出培养基外并伸向空间的菌丝为气生菌丝。葩子丝：当气生菌丝体发育到一定程度，其上分化出可形成 葩子的菌丝即葩子丝，又名产葩丝或繁殖丝。放线菌最突出的特性之一是产生大量的.种类繁多的抗生素 ，根据估计，全世界共发现4000多种抗生素，其中绝大部分是由 放线茴产生的气牛菌线抱子丝固体基质2、霉菌霉备是一些“丝状真菌”的统称，不是分类学上的 名词。凡是在基质上长成毛状、棉絮状或蜘蛛网状的丝状 真菌统称霉菌。霉菌形态比细菌、放线菌复杂，个体比较大，具有 分枝的菌丝体和分化的繁殖器官。因此，在观察是

4、要注意 菌丝的直径大小，菌丝体有无隔膜，营养菌丝有无假扌艮， 无性繁殖或有性繁殖时形成的葩子是哪一种，葩子是怎样 着生胡。也于霉菌的菌丝较粗大，而且葩子容易飞散，如将 菌体置于水中容易变形，故观察时状不用水浸法制片，而 将菌体置于乳酸石炭酸棉兰染液中，使细胞不易干燥，并 有杀菌作用。午生抱子为歹生阳冏一 TLu. , 一 一I .匚歹隹他”更青霉 （科第状抠孑穗次生小梗分生抱子何生探孑5初生小梗顶囊一 分生砲子梗a曲霉三、实验材料矗放线菌和真菌培养物1.放线菌培养物：链霉菌四天插片培养物。 來2亠黑曲霉培养物3各种玄菌示范片。载玻片、接种环、解剖针、解剖刀、酒精灯、镶子等。乳酸石炭酸棉兰染液、

5、碘液、酒精、蒸馅水等四、实验步骤插片法培养放线菌观察放线菌气生菌丝和 基内菌丝的区别取插片_片，直接在显微镜下 进行观察，注意分界面两侧菌 丝形态的差异也0V逍於独曲菸皈生恶单蛇生螺朕开环妙3?轴it! *宦简柚鼠卄敬*味J沏蚓底形创形发轮生，无蝉虞瑕轮生，尤皱湮2、霉菌：在载玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉兰T用解剖针取少许霉 菌 于染色液中一挑开菌丝盖上盖玻 片观察黑曲霉菌丝分 隔情况和分生胞子 着生情况（着重辨 认分生胞子梗、足 细舱詡3分生葩I子）*r Mr押十卜 -故A -鬧: uh仝严. i u t rOB52B s -记问J/SE.p . fljWl ! b，JTSfcT?RB %3l

6、* j J x* rEML2?M0A：6- r*y：- LJRiL-.r.- 一 -观察根霉菌 丝情况和子 囊胞子情况（着重辨认 胞子囊、包 囊梗、假 根）：五、实验结果记录所观察到的放线菌基内菌丝和气生菌丝的差别 绘制青霉(40x)、黑曲霉(40x)的形态,，注明各部分名称。1 为何要用乳酸石炭酸棉兰染液对霉菌进行染色?实验（二）、从土壤中稀释分离微生物一、实验目的：学习微生物稀释平板计数及划线分离技术实 用 采用氨宜（选择）培养基和培养条件，或加入某种 抑制剂有利于目标微生物的生长，从而分离获得目标 微生物的纯培养：常用稀释平板分离法和划线分离法 在固体培养基上形成单个菌落依据一个单细胞在

7、固体培养基上培养后可以长成一 菌落从而推算样品中含有多少细菌或真菌的活菌数目三、实验步骤: 从土壤中稀释分离微生物的方法如下:（一）土壤悬液制备 准备1瓶土壤悬液：称10克土壤放入带玻璃珠的90ml瓶装无菌水中手摇振荡（10-20min）使土样分散。（二）悬液稀释：方法见下图:（三）倒固体琼脂培养基平板: 分离细菌的同学取一瓶牛肉膏培养基（ 200ml/瓶）熔化后加制霉菌素lml后倒平板。分离真菌的同学取一瓶马丁-孟加拉红培养基（ 200ml/瓶）熔化后冷至50C后加链霉素2ml倒平板。（四）悬液涂布（演示）：无菌操作（从稀至浓将菌液涂 布均匀）采用IO, 10-3 104稀释液涂布马丁-孟加

8、拉红平板；采用KT* 10-4，10 = 5稀释液涂布牛肉 膏蛋白豚平板,每人用剩下的1个平板做划线分离，从 三角瓶中取土壤悬液作划线分离（演示（五）培养: 每个同学把平板用报纸包好（每个平板方向一致）， 写上班级和姓名,皿底朝上，置于培养箱培养（温（六）检查结果/曾司号曾粵li结果分嘲1我所涂平板种类：（牛肉膏或马丁氏）2.计数：牛肉膏平板取单菌落数目在30 300个 左右的稀释度来计数，马丁氏平板取单菌落数目 在10700个左右的稀释度来计数3. 我所计数的平板稀释度是： 单菌落数目： 、 4. 计算：活菌数目/每克土壤二（计算过程=个/每克土壤对你和同伴的细菌及真菌计数结果进行分析实验报告从土壤中稀释分离微生物的原理、方法、步骤。N思考题为什么融化后的培养基要冷却至45C左右才能倒平 板？(2) 要使平板菌落计数准确需要掌握哪几个关键?为 什么？(3) 试比较平板菌落计数法和显微镜下直接计数法的优 缺点及应用.(4)