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1、上次实验总结（上次实验总结（还未有结果还未有结果） 实验名称实验名称：实验四实验四 水稻悬浮细胞的培养实水稻悬浮细胞的培养实验结果验结果：2008级张启行实验组2008级胡帅行实验组明视野明视野绿光激发下的红色荧光绿光激发下的红色荧光实验五实验五 聚乙二醇诱导鸡血细胞融合聚乙二醇诱导鸡血细胞融合指导教师：何春梅 林建中1 实验目的实验目的 了解细胞融合的原理。 掌握细胞融合的基本方法。 2 实验原理实验原理 细胞融合是指两个或两个以上的细胞合并成为一个细胞的过程。 自然融合：在自然情况下，体内和体外培养的细胞发生自发融合的现象。 人工诱导融合：在人工诱导（PEG，电激，灭活的病毒等）下细胞融合

2、的现象。开始于上世纪50年代，现在这项技术已成为研究细胞遗传、细胞免疫，肿瘤及细胞工程的重要手段。 在诱导物（如仙台病毒，聚乙二醇）作用下，相互融合的细胞发生凝集，随后在质膜接触处发生质膜成份的一系列变化，主要是某些化学键的断裂与重排，最后打通两质膜，形成双核或多核细胞（此时称同核体或异核体）。通过有丝分裂，细胞核便发生融合，形成杂种细胞。 3 实验材料实验材料,仪器和试剂仪器和试剂3.1 实验材料：实验材料： 一龄公鸡静脉血 。 3.2 实验仪器实验仪器： 显微镜，离心机，天平，离心管，注射器，细滴管，载片，盖片。离心机离心机3.3 实验药品和试剂实验药品和试剂 50%聚乙二醇(PEG)：

3、称取一定量的PEG(MW=4000)放入刻度试管，在酒精灯火或沸水中加热溶化。待冷至50时，加入等体积并预热至50的GKN液混匀。 Alsver液： 葡萄糖2.05g 柠檬酸钠0.8g NaCl 0.42g，加重蒸水至100ml GKN 液： NaCl 8g，KCl 0.4g，Na2HPO4.2H2O 1.77g，NaH2PO4.2H2O 0.69g，葡萄糖2g，酚红0.01g，溶于1000ml重蒸水中。 0.85%NaCl液4 实验步骤实验步骤用注射器取2ml Alsver液，再从翼下静脉取鸡血2ml，注入试管内，再加6ml Alsver液，混匀后置4冰箱中可备作3-4天用。实验时取“1”液

4、1ml于离心管中，加入4ml 0.85%的NaCl液，混匀平衡后以1200r/min离心5分钟。去上清液。再重复“2”两次，最后一次离心10分钟。 在沉降血球中加入1mlGKN液，混匀使之成为细胞悬液。（可加GKN液调节稀释使每立方毫米含红细胞3-4万个）。 在“4”液中加入6-8滴（约0.5ml）50%的PEG液，迅速混匀，常温下23min滴片镜检。 观察时注意不同程度的融合现象。通常分为五个阶段。两细胞膜接触，粘连；细胞膜形成穿孔；两细胞的细胞质连通；通道扩大，两细胞连成一体；细胞完全合并，形成一个含有两个或多个核的圆形细胞。 计算融合率： 融合率=融合细胞数/总细胞数鸡血细胞融合图片（下载自网络）5实验数据的记录和

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