实验七动物染色体标本的制备与观察

1、动物染色体标本的制备与观察动物染色体标本的制备与观察一、实验目的一、实验目的二、实验原理二、实验原理三、实验步骤三、实验步骤四、作业四、作业一、实验目的一、实验目的1. 掌握动物骨髓细胞染色体标本制掌握动物骨髓细胞染色体标本制备基本过程，了解各个操作步骤备基本过程，了解各个操作步骤的原理。的原理。2. 了解常用实验动物染色体的数目了解常用实验动物染色体的数目及特点。及特点。二、实验原理二、实验原理u凡处于增殖状态的细胞，或者经过处理凡处于增殖状态的细胞，或者经过处理进入分裂的细胞即可用于染色体分析。进入分裂的细胞即可用于染色体分析。在动物的各种组织中，骨髓是不断分裂在动物的各种组织中，骨髓是不

2、断分裂的组织之一，是细胞遗传学研究的好材的组织之一，是细胞遗传学研究的好材料。料。u进行染色体观察、分析，需要选择处于进行染色体观察、分析，需要选择处于分裂中期的细胞。给动物注射一定量的分裂中期的细胞。给动物注射一定量的秋水仙素即可使许多处于早期分裂相的秋水仙素即可使许多处于早期分裂相的细胞停滞于中期。细胞停滞于中期。三、实验步骤三、实验步骤1. 动物按动物按30g/g体重的剂量经腹腔注射体重的剂量经腹腔注射秋水仙素，秋水仙素，78小时后杀死蛙，取后小时后杀死蛙，取后肢股骨和胫骨，剥掉全部肌肉，剪去肢股骨和胫骨，剥掉全部肌肉，剪去股骨和胫骨两端。股骨和胫骨两端。2. 用用注射器注射器将将 6m

3、l 1%柠檬酸钠溶液通过针头注柠檬酸钠溶液通过针头注入骨髓腔，冲出骨髓细胞至小碟内，直至股骨变入骨髓腔，冲出骨髓细胞至小碟内，直至股骨变为白色为止。摘掉针头，用注射器轻轻反复吸打，为白色为止。摘掉针头，用注射器轻轻反复吸打，使分散成单个细胞。使分散成单个细胞。3.将骨髓细胞转入离心管，以将骨髓细胞转入离心管，以1500r/min离心离心8 min，弃上清。，弃上清。4.在离心管中加入事先预热至在离心管中加入事先预热至30的的0.4% kcl溶液溶液5ml，将沉淀轻轻吹散，置，将沉淀轻轻吹散，置30水浴中低渗水浴中低渗30min。5.以以1500r/min离心离心8 min。弃上清液，沿离心管。

4、弃上清液，沿离心管壁缓慢加入新配制的甲醇壁缓慢加入新配制的甲醇:冰醋酸冰醋酸(3:1)固定液固定液5ml，加固定液时注意不要冲动细胞团块。加固定液时注意不要冲动细胞团块。6.加完固定液后，立即用吸管将细胞轻轻吸打均匀加完固定液后，立即用吸管将细胞轻轻吸打均匀,静置固定静置固定10min， 1500r/min离心离心10 min ，弃，弃上清液。如此反复固定上清液。如此反复固定1次，离心次，离心10 min。7.固定的细胞经离心后，吸去上层固定液，视管底固定的细胞经离心后，吸去上层固定液，视管底细胞多寡加入细胞多寡加入1-2ml新配制的固定液，将细胞团新配制的固定液，将细胞团块轻轻吸打成悬液。块轻轻吸打成悬液。8. 在干净、湿、冷的载玻片上滴在干净、湿、冷的载玻片上滴2-3滴上层细滴上层细胞悬液，自然干燥（胞悬液，自然干燥（滴片滴片）。）。9.将玻片标本插入吉姆萨染液中，染色将玻片标本插入吉姆萨染液中，染色5 min。10. 用小烧杯盛蒸馏水略洗，再用吸水纸擦干玻片标用小烧杯盛蒸馏水略洗，再用吸水纸擦干玻片标本底面和四周，显微镜观察和分析。本底面和四周，显微镜观察和分析。青蛙骨髓细胞染色体核型（2n=26）四、作业四、作业 绘制染色体图并作简要分析。绘制染色体图并作简要分析。 例如：细胞密度是否适中，分裂细胞的比例如：细胞密度是否适中，分裂细胞的比例如