第15章 高效液相色谱法

1、123456789101112131.1.化学键合相色谱法的优点化学键合相色谱法的优点14R RS Si iC CI IS Si iS SO OC CI IO OH HS Si iR RMMg gX X2 2 R RO OS Si iR RO OH HO OH HS Si i8 8h hC C, ,3 3 1 15 50 00 0X X) )( (C CH HN NH HS Si iC CI IS Si iO OH HS Si in n2 2X X) )N N( (C CH HH HS SO OC CI In n2 22 22 2 3 33 3R RS Si iO OS Si iR RS Si

2、 iX XO OH HS Si i15161718192021222324(1) (1) 抑制器抑制器连续自动再生阴离子抑制器中电化学反应和离子移动连续自动再生阴离子抑制器中电化学反应和离子移动NaOH , H2H+废液废液废液废液阳极阳极检测器检测器H+ + O2H2 + OH -H2OH2ONa+H+ + OH-H2ONa+, X - H+ , X-H2OH2OH2O, O2阳离子交换膜阳离子交换膜Na+, X- ， NaOH 淋洗液淋洗液阴极阴极电电解水解水电电解水解水分离柱分离柱252627 m2829303115.1.5 离子对色谱法离子对色谱法 离子对色谱法，离子对色谱法，是用来分

3、离强极性有机酸、有机碱是用来分离强极性有机酸、有机碱等等离子型化合物和中性化合物混合物离子型化合物和中性化合物混合物的液相色谱法。的液相色谱法。 1.分离原理分离原理 在流动相中加入反电荷的对离子（如在流动相中加入反电荷的对离子（如B) ，与离子化的，与离子化的试样试样(如如A)形成形成中性离子对中性离子对，利用它在流动相和固定相之间，利用它在流动相和固定相之间的分配系数不同而实现分离。的分配系数不同而实现分离。有有机机相相水水相相水水相相B BA AB BA A32图图2 离子对色谱分离过程示意图离子对色谱分离过程示意图 15.1.5 离子对色谱法离子对色谱法3315.1.5 离子对色谱法离

4、子对色谱法3415.1.5 离子对色谱法离子对色谱法3515.1.5 离子对色谱法离子对色谱法36373839i i0 0R Rm ms sS SE EC CV VV VV V C C C CK K40414243444546474849505115-3 高效液相色谱仪高效液相色谱仪52535455吸液单向阀吸液单向阀排液单向阀排液单向阀图图15-2.双活塞往复泵流程图双活塞往复泵流程图5657585915.3.3 分离系统分离系统60常用的分离柱常用的分离柱分析柱分析柱制备柱制备柱15.3.3 分离系统分离系统61622. 二极管阵列检测器二极管阵列检测器（DAD） 以光电二极管阵列（或以光

5、电二极管阵列（或CCDCCD阵列，硅靶摄像管等）作为检测阵列，硅靶摄像管等）作为检测元件。可构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光，再入射元件。可构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光，再入射到阵列式接受器上的到阵列式接受器上的全部波长（全部波长（190-950nm）的信号的信号。得到。得到时间、时间、光强度和波长的三维谱图光强度和波长的三维谱图。适合梯度洗脱适合梯度洗脱63646. 其它检测器其它检测器安培检测器、安培检测器、光散射、极谱、质谱等。光散射、极谱、质谱等。65表表15-2 HPLC中常见检测器的基本特性中常见检测器的基本特性检测器检测器检测限检测限/(g/ml) 线性线性范围范

6、围选择选择性性梯度梯度淋洗淋洗 主要特点主要特点 紫外紫外-可可见光见光10-10103-104有有可可对流速和温度变化敏感；池对流速和温度变化敏感；池体积可制作得很小；对溶质体积可制作得很小；对溶质的响应变化大。的响应变化大。荧光荧光10-12-10-13103有有可可选择性和灵敏度高选择性和灵敏度高；易受背；易受背景荧光、消光、温度、景荧光、消光、温度、pH和和溶剂的影响。溶剂的影响。电导电导10-8103-104有有不可不可是离子性物质的通用检测器是离子性物质的通用检测器；受温度和流速影响；不能用受温度和流速影响；不能用于有机溶剂体系。于有机溶剂体系。电化学电化学10-10104有有困难

7、困难选择性高；易受流动相选择性高；易受流动相pH值值和杂质的影响；稳定性较差和杂质的影响；稳定性较差示差折示差折光光10-7104无无不可不可可检测所有物质；可检测所有物质；不适合微不适合微量分析；对温度变化敏感量分析；对温度变化敏感质谱质谱10-10 无无可可主要用于定性和半定量。主要用于定性和半定量。6615.3.5 记录系统记录系统思考思考: :1. 用液相色谱法分离长链饱和烷烃的混合物用液相色谱法分离长链饱和烷烃的混合物, 应采用下述应采用下述 哪一种检测器哪一种检测器?( ) (1) 紫外吸收检测器紫外吸收检测器 (2) 示差示差折光检测器折光检测器 (3) 荧光检测器荧光检测器 (

8、4) 电化学检测器电化学检测器 2. 在环境保护中在环境保护中, 常要监测水源中的多环芳烃常要监测水源中的多环芳烃, 宜采用下述宜采用下述 哪种检测器哪种检测器?( ) (1) 电子捕获检测器电子捕获检测器 (2) 示差折光检测器示差折光检测器 (3) 荧光荧光检测器检测器 (4) 电化学检测器电化学检测器6715-4 高效毛细管电泳高效毛细管电泳毛细管电泳仪毛细管电泳仪6869+铂电极铂电极Buffer/SampleBufferCapillary高效毛细管电泳装置高效毛细管电泳装置7071蛋白质分析蛋白质分析723. .毛细管电泳分离的基本原理毛细管电泳分离的基本原理电泳：电泳：是荷电粒子在

9、电场力的作用下，向其所带电荷相反的是荷电粒子在电场力的作用下，向其所带电荷相反的方向迁移的现象。方向迁移的现象。电场作用下：毛细管柱中出现电泳现象和电渗流现象电场作用下：毛细管柱中出现电泳现象和电渗流现象737475 分离电压、温度、缓冲溶液的组成、浓度和分离电压、温度、缓冲溶液的组成、浓度和pH值、添加剂等。值、添加剂等。影响毛细管电泳分离效率的因素主要有影响毛细管电泳分离效率的因素主要有: :7677787980811朱明华，胡坪朱明华，胡坪. 仪器分析仪器分析(第四版第四版). 北京北京: 高等教育出版社，高等教育出版社，2011.2傅若农傅若农.色谱分析概论色谱分析概论(第二版第二版). 北京北京:化学工业出版社，化学工业出版社， 2005 .3何华，倪坤仪何华，倪坤仪. 现代色谱分析现代色谱分析. 北京北京:化学工业出版化学工业出版 社，社，2004 .4林树昌等林树昌等.分析化学（仪器分析部分）（第二版分析化