第三章 多标记分析仪

1、2021-10-26现代仪器分析现代仪器分析modern Instrumental Analysis 2021-10-262021-10-26第三章第三章 多标记分析仪多标记分析仪 PE VictorTM X4 2021-10-26第三章第三章 多标记分析仪多标记分析仪功能：功能：比色读数功能比色读数功能化学发光功能化学发光功能荧光读数功能荧光读数功能时间分辨荧光读数功能时间分辨荧光读数功能第一节、多标记分析仪原理第一节、多标记分析仪原理2021-10-26一、比色读数功能一、比色读数功能b*c*IIlogAbsorbance02021-10-26酶联免疫检测酶联免疫检测ELISA*Antib

2、odyEnzyme ConjugateSubstrateStop SolutionPhotometricMeasurementCoating= Antibody= Enzyme*= Incubation, Washing, AspirationPatient Sample (Antigen)= AntigenTest Procedure2021-10-26二、化学发光功能二、化学发光功能Luminescence = the emission of light from any substance occurs from electronically excited statesChemilum

3、inescence = light emitted by a chemical reactionBioluminescence = type of chemiluminescence chemical reaction is catalyzed by an enzyme important in studies of gene expression and gene regulation2021-10-26三、荧光读数功能三、荧光读数功能分子荧光：分子荧光： 基态基态( (S0)激发态激发态( (S1、S2激发态振动能级激发态振动能级) )：吸收特定频：吸收特定频率的辐射。率的辐射。符合什么公

4、式？符合什么公式？ 激发态激发态基态：多种途径和方式；速度最快、激发态寿基态：多种途径和方式；速度最快、激发态寿命最短的途径占优势。命最短的途径占优势。符合什么公式？符合什么公式？ 分子荧光是激发光将电子激发到激发态，由激发态最低分子荧光是激发光将电子激发到激发态，由激发态最低振动能级跃迁到基态所发出的辐射光。振动能级跃迁到基态所发出的辐射光。 浓度很低时，荧光强度浓度很低时，荧光强度 If = 2.3 I0 l c = Kc 2021-10-26 镧系元素铕、钐、铽、镝的螯合物经紫外光激发后不镧系元素铕、钐、铽、镝的螯合物经紫外光激发后不仅荧光强度高，而且其衰变时间也长，可达几百个仅荧光强度

5、高，而且其衰变时间也长，可达几百个 s s，而样品中蛋白质天然本底荧光的衰变时间为而样品中蛋白质天然本底荧光的衰变时间为1-10ns1-10ns，相差，相差5-65-6个数量级，因此在时间分辨荧光光度计上测量时，利个数量级，因此在时间分辨荧光光度计上测量时，利用延迟测量时间，待短半衰期的天然本底荧光完全衰变用延迟测量时间，待短半衰期的天然本底荧光完全衰变后测定，所测信号完全为稀土螯合物的荧光，从而消除后测定，所测信号完全为稀土螯合物的荧光，从而消除了非特异干扰的影响。了非特异干扰的影响。 四、时间分辨荧光读数功能四、时间分辨荧光读数功能2021-10-26背景荧光背景荧光激激 发发 周周 期期

6、超长衰减时间超长衰减时间发射光强度发射光强度时间时间检测窗口检测窗口四、时间分辨荧光读数功能四、时间分辨荧光读数功能2021-10-262021-10-26第二节第二节 多标记分析仪的光学系统多标记分析仪的光学系统2021-10-26Photodiode一一 光吸收模块光路图光吸收模块光路图2021-10-26二二 化学发光模块光路图化学发光模块光路图2021-10-26三三 荧光检测模块光路图荧光检测模块光路图2021-10-26激发光源、激发光单色器或滤光片，样品池、荧激发光源、激发光单色器或滤光片，样品池、荧光单色器及设有门控的检测器光单色器及设有门控的检测器四四 时间分辨荧光模块光路图

7、时间分辨荧光模块光路图2021-10-26五五 与分光光度计不同之处与分光光度计不同之处1 1、光路不同、光路不同2 2、样品池不同、样品池不同3 3、单色器不同、单色器不同4 4、通量不同、通量不同5 5、样品量不同、样品量不同6 6、应用学科不同、应用学科不同2021-10-262021-10-26第三节第三节 多标记分析仪的应用多标记分析仪的应用2021-10-26核酸和蛋白质的光吸收检测核酸和蛋白质的光吸收检测酶联免疫检测（酶联免疫检测（ELISA）细胞活性检测（细胞活性检测（MTT）酶动力学分析酶动力学分析细菌内毒素检测细菌内毒素检测浓度测定浓度测定乙酰胆碱脂酶检测乙酰胆碱脂酶检测环

8、境监测环境监测一、光吸收主要应用一、光吸收主要应用2021-10-26报告基因基因检测报告基因基因检测化学发光免疫分析化学发光免疫分析核酸定量核酸定量 ( (PCR Quantification) )酶活分析酶活分析活性氧分析活性氧分析二、发光主要应用二、发光主要应用2021-10-26浓度检测浓度检测活性分析活性分析荧光荧光ELISA酶联免疫检测（酶联免疫检测（ELISA）研究分子之间相互作用研究分子之间相互作用三、荧光主要应用三、荧光主要应用2021-10-26时间分辨荧光免疫时间分辨荧光免疫激素：甲状腺激素、甾体类激素。激素：甲状腺激素、甾体类激素。病毒性肝炎标志物。病毒性肝炎标志物。肿瘤相关抗原。肿瘤相关抗原。药物。药物。多肽类。多肽类。四、时间分辨荧光主要应用四、时间分辨荧光主要应用2021-10-26 更广的动力学范围更广的动力学范围 更强的灵敏度更强的灵敏度 每孔更少的试剂每孔更少的试剂 更少的实验步骤更少的实验步骤 信号稳定性超过信号稳定