技能实验报告(谷丙转氨酶)

1、成员：黄黎黎，黄立焘，蒋孟青，雷萌，成员：黄黎黎，黄立焘，蒋孟青，雷萌，林秋惠，李浩，刘婷，刘秋红，隆晓元林秋惠，李浩，刘婷，刘秋红，隆晓元损伤是多种致病因素所造成的损伤是多种致病因素所造成的肝脏病理过程的一部分，是肝肝脏病理过程的一部分，是肝纤维化和肝硬化的起始动因。纤维化和肝硬化的起始动因。近年来随着新药的大量涌现，近年来随着新药的大量涌现，由药物引起的肝脏损害也屡见由药物引起的肝脏损害也屡见不鲜。因此对肝脏疾病的防治不鲜。因此对肝脏疾病的防治己为全世界所关注。目前尚无己为全世界所关注。目前尚无更多的特效药可以明显地减轻更多的特效药可以明显地减轻肝脏的损伤和促进肝细胞的肝脏的损伤和促进肝细

2、胞的再生，如何预防及治疗各类肝脏疾病己引起国内外有关学再生，如何预防及治疗各类肝脏疾病己引起国内外有关学者的广泛重视，因此了解肝损伤及其发生机制，对寻找防者的广泛重视，因此了解肝损伤及其发生机制，对寻找防治药物的研究意义重大。治药物的研究意义重大。国内研究课题国内研究课题1、蜂王浆对肝损伤的保护作用、蜂王浆对肝损伤的保护作用2、鹿茸对肝损伤的保护作用、鹿茸对肝损伤的保护作用3、琥珀酸钠对肝损伤的保护作用、琥珀酸钠对肝损伤的保护作用4、夏枯草对肝损伤的保护作用、夏枯草对肝损伤的保护作用转氨酶是人体代谢过程中必不可少的转氨酶是人体代谢过程中必不可少的“催化剂催化剂”，主要存在与肝细胞内。肝功检查中

3、最基本，最重主要存在与肝细胞内。肝功检查中最基本，最重要的指标就是转氨酶要的指标就是转氨酶,通常包括血清谷丙转氨酶通常包括血清谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（）和谷草转氨酶（AST）两项。谷丙转氨）两项。谷丙转氨酶主要存在于肝细胞原浆的可溶部分酶主要存在于肝细胞原浆的可溶部分,肝细胞发生肝细胞发生炎症病变炎症病变,引起细胞肿胀引起细胞肿胀,坏死或肝细胞膜通透性坏死或肝细胞膜通透性增高等增高等,均可使谷丙转氨酶释放于血液循环中均可使谷丙转氨酶释放于血液循环中,而而使血清谷丙转氨酶增高。谷草转氨酶主要存在于使血清谷丙转氨酶增高。谷草转氨酶主要存在于肝细胞线粒体内肝细胞线粒体内,当肝脏发生严重坏死

4、或破坏时当肝脏发生严重坏死或破坏时,才能引起谷草转才能引起谷草转氨酶的显著升高。通常氨酶的显著升高。通常,体检中主要检查的转氨体检中主要检查的转氨酶是谷丙转氨酶酶是谷丙转氨酶(ALT)。1%的肝脏细胞损害的肝脏细胞损害,可以使血中可以使血中ALT的浓度增加的浓度增加1倍。因此倍。因此,ALT水水平可以比较敏感地监测到肝脏是否受到损害。平可以比较敏感地监测到肝脏是否受到损害。然而转氨酶高是个很常见的情况然而转氨酶高是个很常见的情况,并不一定是肝并不一定是肝脏出了问题。因为转氨酶非常敏感脏出了问题。因为转氨酶非常敏感,很多因素会很多因素会引起转氨酶正常值的上下波动引起转氨酶正常值的上下波动,健康人

5、在一天之健康人在一天之内的不同时间检查内的不同时间检查,转氨酶测量结果都可能不一转氨酶测量结果都可能不一样。转氨酶水平在样。转氨酶水平在040之间是正常的。之间是正常的。实验器材实验器材：设备：移液抢，替补头，酶标仪，显色板设备：移液抢，替补头，酶标仪，显色板试剂：谷丙转氨酶试剂盒试剂：谷丙转氨酶试剂盒(谷丙转氨酶基质液，谷丙转氨酶基质液， 2，4-二硝基苯肼液，二硝基苯肼液，4mol/L氢氧化钠液氢氧化钠液)， 血清血清实验前准备实验前准备药物对小鼠急性肝损伤的药物对小鼠急性肝损伤的保护作用保护作用：1、将健康、将健康60只只ICR小鼠随机小鼠随机分成六组：正常对照组、模型分成六组：正常对照

6、组、模型组（组（CCl4）、联苯双酯阳性）、联苯双酯阳性对照组、药物高、中、低（对照组、药物高、中、低（400、200、100mg/kg）组，每组组，每组10只。只。2、高、中、低剂量给药组分、高、中、低剂量给药组分别别400、200、100mg/kg灌胃，灌胃，1次次/d，0.2ml/只，只，连续连续6天，于末次给药后天，于末次给药后1小小时，将时，将CCl4溶于精制的花生溶于精制的花生油中，配成油中，配成0.35%的的CCl4花花生油溶液，按生油溶液，按0.1ml/10g的的剂量灌胃建立急性肝损伤模型剂量灌胃建立急性肝损伤模型。正常对照组灌胃等量生理盐。正常对照组灌胃等量生理盐水，禁食不禁

7、水，水，禁食不禁水，24h后：后：a摘眼球取血，摘眼球取血，分离血清分离血清3000r/min，离心，离心10min，分成两份，分成两份，4保存备用；保存备用；b取肝脏分成取肝脏分成两份。一部分放在两份。一部分放在10%福尔马林固定，福尔马林固定，另一部分做成肝匀浆，取另一部分做成肝匀浆，取0.5g肝组织，肝组织，剪碎、放入玻璃匀浆器中，将预冷的剪碎、放入玻璃匀浆器中，将预冷的9倍倍体积的体积的0.9%生理盐水匀浆，生理盐水匀浆，3000r/min，离心，离心10min，上清液分，上清液分成两份成两份4保存备用。保存备用。实验步骤实验步骤1、4mol/l氢氧化钠与蒸馏水按氢氧化钠与蒸馏水按1:

8、9的比例稀释配成的比例稀释配成0.4mol/L的氢氧化钠液的氢氧化钠液2、测定管测定管对照管对照管血清（血清（l）5基质液（基质液（l）2525混匀后，混匀后，37，水浴，水浴30min2，4-二硝基苯肼二硝基苯肼液（液（l）2525血清（血清（l）5混匀后，混匀后，37，水浴，水浴20min0.4mol/L氢氧氢氧化钠液（化钠液（l）250250实验数据实验数据高剂量组高剂量组中剂量组中剂量组低剂量组低剂量组正常组正常组模版组模版组联苯双酯组联苯双酯组测定组测定组对照组对照组测定组测定组对照组对照组测定组测定组对照组对照组测定组测定组对照组对照组测定组测定组对照组对照组测定组测定组对照组对照

9、组0.6160.270.4320.3460.370.2630.4380.311.6021.1350.470.3360.3490.2610.4090.350.5870.2910.6040.331.3741.2710.4940.3390.4030.3160.4110.3540.3980.2970.4240.3721.2521.2560.4780.2790.7580.3250.4420.360.6650.3490.4580.3460.8651.1510.3890.2610.8210.3440.3260.280.4140.340.3970.341.1681.1970.3730.3290.4240.32

10、50.3740.2930.7550.3570.3360.3840.7540.9920.3910.3570.6130.2720.4070.3030.3970.250.3830.3560.7570.3480.3420.2830.6310.3740.550.2920.6230.3210.4250.350.4990.351空白空白0.0440.0411、数据统计、数据统计实验数据采用实验数据采用SPSS（版本（版本11.5）软件的）软件的Independent-Samples T test 算法算法进行统计，以进行统计，以xSD表示，模型对照组与表示，模型对照组与其他各组血清酶的差异显著性水平设为其他各组血清酶的差异显著性水平设为0.052、预期结果、预期结果3、实验结果、实验结果通过查标准曲线，得到谷丙转氨酶活力单位通过查标准曲线，得到谷丙转氨酶活力单位高剂量组高剂量组中剂量组中剂量