土壤中尿素细菌的分离

1、专题专题2 微生物的培养与应用微生物的培养与应用课题课题2 2 土壤中分解尿素的细菌的土壤中分解尿素的细菌的分离分离与与计数计数课题背景课题背景CO(NH2)2尿素尿素CO(NH2)2重要的重要的农业氮肥。农业氮肥。只能被土壤中细菌分解为只能被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用才能被植物吸收利用成分成分含量（含量（g/L）KH2PO41.4NaH2PO42.1MgSO47H2O0.2葡萄糖葡萄糖10.0尿素尿素1.0琼脂琼脂15.0碳源：碳源：氮源：氮源：此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？1.1.间接计数法（活菌计数法）间接计数法（活菌计数法

2、）常用方法：稀释涂布平板法常用方法：稀释涂布平板法原理：原理：1个菌落个菌落1个活菌个活菌计算：计算：每克样品中的菌落数每克样品中的菌落数(C(CV)V)M MC C：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数V V：涂布平板时所用的稀释液的体积：涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)(ml)M M：稀释倍数：稀释倍数 两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为从对应稀释倍数为10106 6的培养基中，得到以下两种统计结果。的培养基中，得到以下两种统计结果。 1 1、甲同学在该浓度下涂布了一

3、个平板，统计的菌落数为、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230230。 2 2、乙同学在该浓度下涂布了、乙同学在该浓度下涂布了A A、B B、C C三个平板，统计的菌三个平板，统计的菌落数分别为落数分别为2121、212212、256256，该同学以这三个平板上菌落数的平，该同学以这三个平板上菌落数的平均值均值163163作为统计结果。作为统计结果。 你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？甲：没有重复实验（至少涂布甲：没有重复实验（至少涂布3 3个平板）个平板）？乙：乙：A A组结果误差过大，意味着操作有误，组结果误差

4、过大，意味着操作有误， 不应用于计算平均值不应用于计算平均值, ,需要重新实验需要重新实验（3）注意事项注意事项选选3030 300300个菌落的平板统计个菌落的平板统计每个稀释度取每个稀释度取3 3个平板取其平均值个平板取其平均值重复实验重复实验统计结果表示：统计结果表示：每克样品中的每克样品中的菌落数菌落数菌落数菌落数活菌的实际数活菌的实际数分离不同的微生物采用不同的稀释度分离不同的微生物采用不同的稀释度原因：不同微生物在土壤中含量不同原因：不同微生物在土壤中含量不同测细菌数：一般用测细菌数：一般用10104 4、10105 5、10106 6倍稀释液倍稀释液测放线菌：一般用测放线菌：一般

5、用10103 3、10104 4、10105 5倍稀释液倍稀释液测真菌数：一般用测真菌数：一般用10102 2、10103 3、10104 4倍稀释液倍稀释液 利用选择培养基进行尿素分解菌的分离过程中，从对利用选择培养基进行尿素分解菌的分离过程中，从对应稀释倍数为应稀释倍数为10106 6的培养基中，的培养基中，A A、B B同学分别得到以下两种同学分别得到以下两种统计结果。统计结果。 1 1、A A同学筛选出同学筛选出150150个菌落。个菌落。 2 2、B B同学筛选出同学筛选出5050个菌落。个菌落。 B B认为认为A A的的培养基被杂菌污染了培养基被杂菌污染了，或，或培养基中混入了其培

6、养基中混入了其他含氮物质他含氮物质，因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培养，因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培养基中生长。基中生长。A A确认自己的操作无误，但也拿不出能令人信服确认自己的操作无误，但也拿不出能令人信服的证据。的证据。 请你帮助请你帮助A A同学改进实验，提供具有说明了的证据。同学改进实验，提供具有说明了的证据。同等条件下同等条件下设置对照设置对照？ 设置对照设置对照同等条件下，培养空白培养基同等条件下，培养空白培养基2、显微镜直接计数、显微镜直接计数二二 实验过程实验过程1.1.取土样取土样2.2.制备土壤液制备土壤液3.3.系列稀释系列稀释4.4.涂布平板、培养涂布平板、培养5.5.观察、统计观察、统计 关注菌落的关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质形态、大小、边缘、突起、颜色、质地地等等，都是区分细菌的重要手段。等等，都是区分细菌的重要手段。 鉴定：筛选后必鉴定鉴定：筛选后必鉴定鉴别培养基：加入某种试剂，鉴别鉴别培养基：加入某种试剂，鉴别不同种类的微生