肝硬化患者血清基质金属蛋白酶2检测的临床意义

1、肝硬化患者血清基质金属蛋白酶-2检测的临床意义【摘要】 目的 了解基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在肝纤维化形成中的作用及与肝硬化患者肝功能损害程度的关系。方法 采用酶联免疫吸附(ELISA)方法检测了52例肝炎后肝硬化患者和28例慢性肝炎患者(对照组)血清MMP-2浓度。结果 肝硬化组MMP-2显著高于对照组(P0.01、)；但是肝硬化患者血清中MMP-2浓度随Child-Pugh分级增高显著下降，A、B、C级之间差异均有统计学意义(P均0.01)，MMP-2水平ABC。同时发现纤维化指标透明质酸(HA)浓度亦高于对照组(P0.01)，随Child-Pugh分级增高显著上升，A、B、C级之间

2、差异均有统计学意义，HA水平呈CBA。结论 肝硬化患者血清MMP-2水平和HA明显升高，且血清中MMP-2水平和HA与肝功能分级明显相关，表明MMP-2与肝纤维化程度有关。HA是与肝病严重程度相关的一个参数。 【关键词】 肝硬化；基质金属蛋白酶；透明质酸Abstract: Objective To explore the effect of serumal MMP-2 on hepatic-injury and the relation between serverity of hepatic-injury and the pathogenesis of fiberosis. Methods

3、Using ELISA,the serum concentration of MMP-2 and HA were examined in 52 cirrhosis cases with a history of hepatitis(study group) and in 28 controls with chronic viral hepatitis. Results The serum level of MMP-2 in study group was significantly higher than that of controls (P0.01). The more critical

4、by classification of Child-pugh, the lower serumal MMP-2 level (A grade vs B grade, B grade vs C grade,C grade vs A grade；P0.01, P0.01, and P0.01, respectively). Hyaluronic acid(HA), Unlike that of MMP-2, As the Child-Pugh classification increases , the serum level of HA in patients was significantl

5、y higher than that of the control group(CBA, P0.01). Conclusion Serum concentration of MMP-2 may become an important parameter for predicting the development of liver fibrosis. It may positively contribute to the precise evaluation of fibrosis stage. HA can be a index for showing the severity of liv

6、e diseases.Key words： cirrhosis after hepatitis；matrix metalloprotease；HA 肝硬化发病机制复杂。国内外大量的基础研究和临床研究工作表明，肝硬化形成的关键环节是肝细胞损伤后的纤维化过程。肝硬化是细胞外基质产生和降解不平衡的结果，基质金属蛋白酶-2(MMP-2)参与降解细胞外基质；其与肝纤维化形成的关系，已有一些报道1-2。为进一步了解血清MMP-2在肝纤维化形成中的作用以及与肝硬化患者肝功能损害程度的关系，本文采用双抗体“夹心”酶联免疫吸附(ELISA)方法，检测了52例肝炎后肝硬化患者血清中MMP-2和透明质酸(HA)浓度

7、，探讨其在肝硬化形成中的作用。1 材料与方法1.1 对象及分组 选择我院2005年6月12月收治并确诊为病毒性肝炎后肝硬化的住院病人52例作为肝硬化组；28例慢性肝炎患者作为对照组。全部病例均排除肝占位性疾病、结缔组织病、血液系统病、慢性肾脏疾病、代谢性疾病、糖尿病等内分泌系统疾病以及其它炎性疾病。 肝硬化组：52例中男36例，女16例，年龄1172岁。平均(43±15)岁。无心、肺病史，心电图正常。根据既往病史、体检、肝功能化验、腹部B超、各型肝炎病毒血清学指标、肝硬化五项指标及相关实验室检查，其中单纯乙型肝炎病毒感染42例，其中乙丁肝炎病毒感染6例，乙丙丁肝炎病毒重叠感染1例，丙

8、型肝炎病毒感染3例，均符合2000年全国传染病与寄生虫病学术会议修订的诊断标准。肝硬化病人中有腹水28例，食管静脉曲张31例，消化道出血10例，肝昏迷4例。肝功能Child-Pugh score分级(分级标准包括血清总胆红素、血浆白蛋白、肝性脑病、腹水的程度、营养状况)。A级17例、B级18例、C级17例。对照组：28例中，男24例，女4例，年龄1064岁，平均(38±9)岁。1.2 血清标本的收集 抽取空腹静脉血2 mL，编号分装，注入不含抗凝剂的普通试管中，离心后分离血清。1.3 仪器 酶联免疫检测仪(芬兰雷勃集团生产KHB Labsystems Wellscan K3型)，S8

9、00型离心沉淀器(上海手术器械厂生产)，电热恒温培育箱(上海跃进医疗器械厂生产)。隔水式电热恒温培养箱(PYX-DHS 上海市跃进医疗器械一厂生产)。BECKMAN ALLEGRA TM21 R centrifuge(美国产，可调温度离心机)。1.4 试剂 血清MMP-2 ELISA测试盒 美国进口分装试剂(Coated Wells：MMP-2 TPIInc.Washington 98003 USA Cat：TL858)。1.5 统计学方法实验数据以均x±s表示。二组间样本均数比较采用Students t检验，组间的两两比较采用Student-Newman-Keuls。 2 结果2.

10、1 两组患者血清MMP-2检测结果(表1)表1 肝硬化组与对照组患者血清MMP-2水平(略) 肝硬化组患者血清中MMP-2浓度明显高于对照组，差异有统计学意义(t=8.032，P0.01)。2.2 肝硬化患者血清MMP-2水平与肝功能分级的关系(表2)表2 不同Child-Pugh分级肝硬化患者血清MMP-2水平(略)表3 肝硬化患者血清肝功能分级与HA水平(略) 不同Child-Pugh级别肝硬化患者血清中MMP-2水平呈现A级B级C级，说明随着肝纤维化程度进展，血清中MMP-2水平呈显著下降。B级与A级、C级与B级之间比较差异均有统计学意义(P0.01或0.05)。2.3 肝硬化患者血清H

11、A与肝功能分级的关系3 讨论 细胞外基质合成增加和降解减少是肝硬化发生的主要因素。MMP-2是参与降解细胞外基质成分的基质金属蛋白酶(MMP)家族的重要成员，MMP-2活化后能降解变性胶原和纤维连接蛋白。关于肝硬化患者血清中MMP-2水平报道不多。本实验结果显示，MMP-2水平在肝硬化患者明显升高，但肝硬化患者血清中MMP-2水平与肝功能分级又明显相关，不同级别肝硬化患者血清中MMP-2水平呈现A级B级C级，也就是说随着肝纤维化程度进展，血清中MMP-2水平呈下降趋势。有人认为血清中MMP-2水平与肝脏炎症活性无关，与门静脉坏死及肝纤维化程度有关3。血清中MMP-2大部分以无活性的酶原形式分泌

12、，然后再在细胞外激活，因此，MMP-2可以在血循环中检测到5。由以上的实验及文献资料可以看出血清中MMP-2浓度与肝纤维化之间存在一定的因果关系，本组实验结果显示，血清中MMP-2水平在肝硬化患者明显升高，血清中MMP-2浓度检测可作为肝纤维化程度的一个诊断指标。在肝纤维化早期，及时终止其发生发展，则可避免肝硬化的进展。对于临床上阻止肝硬化进程提供了一个理论依据。 肝纤维化是一种肝内弥漫性细胞外基质(ECM)过度沉积的病理过程。包括胶原和糖结合物(糖蛋白蛋白聚糖)。蛋白聚糖是组成、功能和分布都不相同的一些糖结合物，透明质酸即是其中之一。正常肝脏蛋白聚糖含量甚微。纤维化时，可增加34倍。本组实验

13、血液中透明质酸含量，随着肝功能Child-A、B、C分级，各组中浓度依次呈上升趋势。即随着肝功能分级越差，血清含量亦升高。原因可能为：在肝纤维化过程中，肝实质细胞和间质细胞合成增加，引起肝内和血液中透明质酸含量升高，加之肝纤维化时，门体侧枝循环形成，部分透明质酸不流经肝脏导致其血清中浓度增高。肝纤维化时，肝损害累计内皮细胞功能，肝窦内皮细胞清除减少，故透明质酸是与肝病严重程度相关的一个参数。血清肝纤维化五项被用于临床诊断肝纤维化已经数年，各个标志物检测的准确性、特异性不尽一致，血清透明质酸的诊断敏感度最好，是敏感的纤维化指标6。本组实验表明MMP-2联合HA可作为血清纤维化标志物。检测血清MM

14、P-2水平、HA有助于判定肝硬化。【参考文献】 1Takahara T，Faruik，Funaki J.Increased expression of matrix metallo-proteinase- inexprimental liver fibrosis in ratsJ. Hepatoligy，1995，21：787-795.2Takahara T，Faruik，Yata， Y.Dual expression of metallopro-teinase-2 and membrane-type 1-matrix metalloproteinase in fibrotic human liversJ. Hepatology，1997，26：1521-1529.3Boeker KH，Haberkorn Ci，Mebets D，et al.Diagnostic potential of circulating TIMP-1 and MMP-2 as matrix of liver fibrosis in patient with chronic hepatitis CJ. Clin Chin Acta，2004，316(1-2)：71-81.4Murawaki Y，Yamada S，Ikuta Y，et al.Clinical usefulness of serum m