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文档简介
1、高中生物 实验13dna片段的pcr扩增预习导航 浙科版一、pcr技术1pcr的全称是：_。2pcr技术是用于dna片段复制、扩增的生化技术。3pcr技术用途：除用于基因扩增外，还用于_。4pcr技术的具体应用：在法学、医学、食品和考古学上也是重要的实用工具，如_鉴定、_鉴定、食品质量的确定、_病诊断、肿瘤病和其他疾病的诊断以及考古中人种的确定等。答案：1.聚合酶链反应3测定dna序列4亲子犯罪遗传二、dna的体内自我复制与pcr技术dna聚合酶在有_的存在时，利用4种_，可从_末端向_末端合成新链。pcr技术还需要_作为_，这一段叫_。答案：dna模板脱氧核苷三磷酸53与dna模板互补的一段
2、单链dna聚合酶作用的起点引物三、pcr作用的过程11个循环的操作：步骤具体操作双链dna_将双链dna加热至_，dna_，dna之间的_打开，双链分离(也叫做_)续表步骤具体操作与_结合双链分离后，将温度_，这一降温过程叫_。退火后，引物可与2个_分别结合dna新链的_ _下，聚合酶可利用_组装模板的互补链，从引物延伸至_末端2.一般大约需要重复上述3步骤_个循环。3结果：一个循环形成_个双链dna，在20个循环后(大约1h),1个dna片段可扩增上百万个拷贝，30个循环可产生10亿个拷贝。答案：1.分开95变性氢键解链引物迅速降至4060退火单链的dna模板延伸724种dntp321530
3、32四、实验操作1设备、用品(略)2材料：凝胶、dna标样、pcr试剂盒、tbe缓冲液、0.1%亚甲蓝3.步骤：文字说明：取3个0.5 ml微量离心管，分别记做1、2、3号。用取样器按表一加入试剂，关闭上盖并在振荡器上振荡20 s，使之混合均匀将3个微量离心管放在固定器上，保证每管中的液面在水浴中的水面以下。依表二的时间依次放入3个水浴进行pcr将tbe缓冲液加入到电泳槽中，使缓冲液高出凝胶面34 mm，再将样品加入凝胶板的加样孔中。所加顺序内容依次为：凝胶板中的加样情况说明表加样孔编号（对应右图所示）1234离心管中样品标号sa1a2a3所加样品1号样品20微升dna标准溶液pcr产物1（7
4、2 1min后得到的）pcr产物2（72 1min、70 2min后得到的）对照组产物2号样品2微升蓝色缓冲液1号样品与2号样品必须充分混匀后再加入开始进行电泳，若用18 v电池的电泳46 h；若甲直流电泳仪电源，80 v可电泳40 min电泳后将凝胶缓冲液倒出，缓冲液可再利用。将10 ml染色剂（亚甲蓝）覆盖在凝胶表面，1520 min后移去（可再利用），再加入5 ml70%乙醇，不断摇动12 min，使其分布均匀，再除去，加入冷水，几分钟后看到蓝色的区带出现，这就是扩增的dna比较、判断胶片结果图表辅助：表一：试剂1号管(12个循环)2号管(14个循环)3号管(对照)pcr混合液2020蒸馏水20引物202020模板dna101010总体积505050表二：时间温度目的
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