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文档简介
1、Quan titative Biochemical An alysis一、目的学习使用pipetman的正确方法并了解如何校正,可使实验结果准确性提高。Pipetman是最常用於biochemistry及molecular biology实验的根本必须工具,一 般有 p2、p10、P20、p100、P200、P1OO0 P5OO0 P10mL 等规格,不同规格型 号的pipetman所及取的体积各有不同,在记录结果时需注意单位变化。二、原理Pipetman是一种取样量连续可调的精密取液仪器,根本原理是依靠活塞的上下移 动。其活塞移动的距离是由调节轮控制螺杆机构来实现的,推动按钮带动推杆使 活塞
2、向下移动、排除了活塞腔内的气体。松手後,活塞在复位弹簧的作用下恢复 其复位,从而完成一次吸液过程。三、材料、药品Pipetman tube、tip、蒸馏水、蒸馏水、烧杯、精密电子秤四、步骤1、分别进行P20、P200、P1000的吸取动作和读取方式。1将一个tip装在pipetman上,推到套紧位置以保证气密性2转动调节轮,使读数显示为所要取液体的体积。3 轻轻按下推动按钮,将推动按钮由位置“0推到位置“。4 手握移液器,将吸液尖垂直浸入待取液体中,浸入深度为24mm。5 经23s后缓慢松开推动按钮,即从推动按钮位置“ 1复位到“0位,完成吸 液过程,停留12s后将pipetman移出液面。6
3、用纱布或滤纸将粘在tip外外表的液体擦掉。注意不要接触到吸液尖头部的孔外表。(7) 将tip头部放入被分配的容器中,使尖贴着容器的内壁,然后慢慢按下推动 按钮至位置“ 1,继续按至位置“2,此时液体应全部排净。(8) 将tip 口部沿着容器内壁滑动几次,然后移走 pipetman,松开推动按钮,按 卸尖按钮推掉tip,即完成一个完全的操作过程。2、再分别进行校正,先拿取一个tube称重后,将电子秤归零。3、pipetman( P2O/P2OO/P1OO0吸取蒸馏水至tube中,再放置於电子秤称重。4、 将此时tube的重量记录下来,差值即为称取的水的体积,可换算pipetman所 吸取的水的体
4、积5、重复上述步骤三次,得到三组数据6将此三组说句平均后所得的数值对照此款pipetman的Maximum permissibleerrors表中的Gils on,确定此次操作是否在可接受误差范围内。7、假设超过了误差范围,那么需进行校正。五、实验结果P201st2nd3rdtube 重(g)蒸馏水+tube重(g)蒸馏水重(g)蒸馏水体积(卩L)平 均P2001st2nd3rdtube 重(g)蒸馏水+tube重(g)蒸馏水重(g)蒸馏水体积(L)平 均P10001st2nd3rdtube 重(g)蒸馏水+tube重(g)蒸馏水重(g)蒸馏水体积(L)平 均Min25AccuracySyst
5、ematic error卩 L±±Precisi onRan dom error卩 1P2010±Max20±Min50±P200100±Max200±Min200±3P1000500±4Max1000±8Maximum Permissible ErrorsGils on误差值与参考范围比照ModelRefere nee Extent卩 LAverageError卩 LCon clusi onP20±accpectP200±refuseP1000±8accpect本
6、次实验的目的是学习pipetman使用方法和判断pipetman是否需要校正。我们 通过tube装水前後的质量之差,以差量法为手段,得出pipetman吸取最大量程时候的体积与理论吸取体积的误差是否在可接受的参考量程之内,来判定此 pipetma n的可用性。Refere nee Exte ntModel Volume卩 L(1) P20为例:其平均的误差值为 也小於其可接受误差为土L说明此pipetman 不需要校正。(2) 而P200的平均的误差值为 丄,而可接受误差为土让,超过了可接受误差 的范围。说明此pipetman需要校正。(3) P1000:其平均的误差值为 丄,而可接受误差为土
7、此。说明此pipetman不 需要校正。六、讨论在本次实验中出现 pipetman 需要校正的结论有一下可能: 1 pipetman 确实是自身存在缺陷,需要调节维护。由於使用时间长、使用不 当、或者自身弹簧、密封圈老化的问题的出现,使其准确性下降。 2由於 tip 的质量问题,其密封性、外表材质粗糙度、流线性、口径大小等, 可能影响 pipetman 的取液准确性。3精密电子秤是未经过准确度验证的,其可能存在自身的测量误差,导致差 量法的准确性下降。因为本次实验是用重量与体积的关系来确定pipetman 误差的。 4 个人的操作标准也会对实验结果造成很大的影响。改良和考前须知: 在下次做相同的实验之前, 可先对 tip 、精密电子秤进行校准; 另外严格要求个人操作技术: 操作时要慢和稳; 吸嘴浸入液体深度要适宜, 吸液 过程尽量保持不变; 改吸不同液体、 样品或试剂前要换新吸嘴; 发现吸嘴内有残 液时必须
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