梅毒的实验室检测与技术规范

1、梅毒的实验室检梅毒的实验室检测与技术规范测与技术规范梅毒血清学检测方法梅毒血清学检测方法梅毒血清学检测分类梅毒血清学检测分类(1) 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 （非特异性梅毒抗体）(2) 梅毒螺旋体抗原血清学试验 （特异性梅毒抗体）两类方法。非梅毒螺旋体抗原血清学试验非梅毒螺旋体抗原血清学试验l原理原理n人体感染了梅毒螺旋体后，组织受到破坏，释放出来的一种类脂成分，与梅毒螺旋体结合形成完全抗原，刺激机体在3周-4周产生类脂质抗体（反应素）。主要是IgM和IgG混合抗体。l抗体的作用抗体的作用n无保护作用，治疗监测。未经治疗的病人，其血清内的反应素可长期存在。经正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转

2、为阴性。非梅毒螺旋体抗原血清学试验非梅毒螺旋体抗原血清学试验l所有非梅毒螺旋体抗原血清试验的抗原基本成分都是一样l方法包括： （1）快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR) （2）甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） （3）性病研究实验室试验 (VDRL)等。l基本成分是心磷脂 卵磷脂和胆固醇l抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见l上述方法的敏感性和特异性都基本相似 试验特点试验特点n 原理和成分与试验相同n 血清不需要灭活n 不需要显微镜观测结果n 可作定量试验n 有现成的试剂盒携带方便n 操作简单n 价格便宜操作要点操作要点 仪器：仪器：水平旋转仪。水平旋转仪。 定性实验定性

3、实验n加样：吸取50ul血清(浆)放在卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈内n加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1滴抗原n反应：将卡片置水平旋转仪旋转8分钟，立即在亮光下观察结果3. 3. 定量试验定量试验n稀释夜准备：在圈内加入50uL生理盐水（根据需要确定稀释度），勿将盐水涂开。n加样：吸取50uL血清（浆）与各圈中盐 水作系列稀释，并涂布整个圈内。n下同定性试验。非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果判断非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果判断 RPR TRUST非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义u早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。u经治疗后血清滴度可下降并转

4、阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。 为什么要做定量检测？非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义u 一期梅毒1年后转为阴性u 二期梅毒2年后转为阴性。u 晚期梅毒 治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约50%病人血清反应仍为阳性。TRUST结果解释示意图 假阳性问题假阳性问题 假阳性：非梅毒患者的血清反应呈阳性技术性假阳性技术性假阳性 由于标本的保存不当（如细胞污染或溶血）、试剂质量差或过期、或实验室操作错误所造成。生物学假阳性生物学假阳性 是由于患者有其他疾病或生理状态发生变化，使梅毒血清试验出现阳性某些疾病：结核、疟疾、肝病、红斑狼疮、流感、肺炎、类风

5、某些疾病：结核、疟疾、肝病、红斑狼疮、流感、肺炎、类风湿性关节炎、风湿性心脏病、风疹、系统性硬化症等，疾病发湿性关节炎、风湿性心脏病、风疹、系统性硬化症等，疾病发展过程中释放心磷脂到血液中展过程中释放心磷脂到血液中呈呈假阳性。假阳性。老年人。老年人。生理机能发生变化：少数孕妇也可发生生物学假阳性。生理机能发生变化：少数孕妇也可发生生物学假阳性。梅毒假阳性反应的处理梅毒假阳性反应的处理u技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假阳性反应，经过重复试验即可除外。u 对生物学假阳性反应，应做TPHA（TPPA）等试验进行排除。前带现象l指非梅毒螺旋体抗原血清试验中，有时血清中存在高浓度的抗体时出现的

6、弱阳性、不典型或阴性反应的结果，而临床上又象二期梅毒，此时将血清稀释后再进行试验，出现了阳性的结果，该现象称为前带现象。l处理：处理：将血清稀释后再进行试验。耐血清性（血清固定）l指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原血清试验在一定时期内不阴转。早期的耐血清性常与治疗量不足或不规则治疗、复发、再感染或有神经系统梅毒等因素有关。梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验 梅毒螺旋体抗原血清学试验方法梅毒螺旋体抗原血清学试验方法u 梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA)u 梅毒螺旋体血球凝集试验 (TPHA)u 梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA）u 梅毒免疫层析法-梅毒快速检测 (RT)u 荧光螺

7、旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）u 化学发光免疫分析法（CLIA）u 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB） TPPAuTPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒，此致敏颗粒与人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏感性和特异性。uTPPA是目前WHO认可的梅毒抗原血清学试验的“金标准”，常用于新方法、新试剂评价的参照标准。TPPA(TPHA)TPPA(TPHA)试验原理示意图试验原理示意图 梅毒螺旋体抗原血清试验的临床意义梅毒螺旋体抗原血清试验的临床意义u一般情况下，一旦梅毒患者梅毒螺旋体抗原血清试验呈阳性，即使经过正规有效治疗治，仍将终身阳性。所以TPPA等试验不能作为疗效观察

8、的指标。u作为非梅毒螺旋体抗原血清试验初筛阳性标本的确证试验。uTPPA等阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。TPPA结果解释示意图 梅毒血清学试验结果解释梅毒血清学试验结果解释 梅毒检测技术规范简介全国梅毒检测技术规范l第一章 梅毒检测样品的采集和处理l第二章 梅毒血清学检测l第三章 梅毒病原体显微镜检测l第四章 梅毒病原体核酸检测l第五章 实验室生物安全l第六章 梅毒检测实验室质量管理第一章 样品的采集和处理 血清、血浆、全血及脑脊液血清、血浆、全血及脑脊液: : 梅毒血清学检测或核酸检测梅毒血清学检测或核酸检测 皮损部位组织液、淋巴穿刺液皮损部位组

9、织液、淋巴穿刺液: : 梅毒病原体检测或核酸检测。梅毒病原体检测或核酸检测。梅毒血清学试验适用范围 第二章 梅毒血清学检测 检测目的检测目的: :临床诊断、血液筛查、流行病学监测临床诊断、血液筛查、流行病学监测 以临床诊断为目的的检测是为了确定梅毒感染的状况。以临床诊断为目的的检测是为了确定梅毒感染的状况。 以血液筛查为目的的检测是为了防止梅毒的经血传播。以血液筛查为目的的检测是为了防止梅毒的经血传播。 以流行病学监测为目的的检测是为了调查梅毒血清学以流行病学监测为目的的检测是为了调查梅毒血清学感染率和发病率。感染率和发病率。 梅毒实验室检测策略选择u根据目的选择检测方法及检测策略。u可采用任

10、何一类梅毒血清学检测方法作为筛查试验。以临床诊断为目的检测策略一以临床诊断为目的检测策略一 以临床诊断为目的检测策略二以临床诊断为目的检测策略二 策略一和策略二比较策略一和策略二比较 第三章 梅毒体病原学检测检测方法检测方法 暗视野显微镜检查暗视野显微镜检查 镀银染色检查镀银染色检查第四章 梅毒核酸检测n可对血浆、血清、皮损部位组织液、淋巴穿刺液及脑脊液可对血浆、血清、皮损部位组织液、淋巴穿刺液及脑脊液等标本的梅毒螺旋体核酸检测等标本的梅毒螺旋体核酸检测n在早期梅毒、神经梅毒和先天梅毒等诊断，以及螺旋体现在早期梅毒、神经梅毒和先天梅毒等诊断，以及螺旋体现症感染和既往感染鉴别诊断中具有一定的价值

11、症感染和既往感染鉴别诊断中具有一定的价值n可应用于梅毒螺旋体的耐药性监测、菌株流行病学分型。可应用于梅毒螺旋体的耐药性监测、菌株流行病学分型。第五章 实验室生物安全n梅毒的生物危害梅毒的生物危害n 梅毒螺旋体属第三类病原微生物，一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，是有有效治疗和预防方法的致病微生物 n梅毒相关检测的生物安全级别梅毒相关检测的生物安全级别n 为了保证安全，对临床和现场未知样本的梅毒血清学检测应在符合级生物安全实验室（BSL-2）要求的实验室中进行。如有艾滋病检测实验室，可以在艾滋病抗体检测实验室中进行。第六章 实验室质量管理质量

12、保证质量保证质量评估质量评估试剂评价试剂评价质量保证检测方法和试剂的选择检测方法和试剂的选择 用于临床诊断的检测方法应使用经国家食品药品监督用于临床诊断的检测方法应使用经国家食品药品监督管理局注册批准的试剂，应选择敏感性高、特异性好的试管理局注册批准的试剂，应选择敏感性高、特异性好的试剂。性病参比实验室和省级性病中心实验室应定期组织开剂。性病参比实验室和省级性病中心实验室应定期组织开展梅毒诊断试剂的临床质量评价和新方法与技术的评估展梅毒诊断试剂的临床质量评价和新方法与技术的评估。 质量评价u所有梅毒检测实验室应参加外部质量评价所有梅毒检测实验室应参加外部质量评价u省级中心实验室应参加国家级职能工作考核和省级中心实验室应参加国家级职能工作考核和PTPTu其他实验室应参加省级职能工作考核和其他实验室应参加省级职能工作考核和PTPT。质量评价u考评组织单位根据考评组织单位根据PTPT考核结果、职能工作评价结果及对部考核结果、职能工作评价结果及对部分实验室现场评价情况，汇总各实验室的最终考评结果，分实验室现场评价情况，汇总各实验室的最终考评结果，上报相关机构。上报相关机构。u考评单位应将考评得分及扣分原因反馈各参评实验室，以考评单位应将考评得分及扣分原因反馈各参评实验室，以适当的方式在适当范围内公开发布考评结果。为合格者颁适当的方式在适当范