天然药化第五章黄酮类化合物ppt课件

1、天然药物化学天然药物化学第一节第一节 概述概述第二节第二节 理化性质及显色反响理化性质及显色反响第三节第三节 提取与分别提取与分别第四节第四节 检识与构造测定检识与构造测定第五章 黄酮类化合物第一节第一节 概概 述述 1.概念 2.构造类型 3.生物合成 4.生物活性1.1.概念含义概念含义 经典含义是指以经典含义是指以2-2-苯基色原酮衍生的一类化苯基色原酮衍生的一类化合物的总称，由于该类化合物大多呈淡黄色或黄合物的总称，由于该类化合物大多呈淡黄色或黄色，且分子中多具酮基，因此称为黄酮。色，且分子中多具酮基，因此称为黄酮。 现代含义是泛指二个苯环现代含义是泛指二个苯环A A环和环和B B环经

2、过环经过三个碳原子相互衔接而成的一系列化合物的总称，三个碳原子相互衔接而成的一系列化合物的总称，即具有即具有C6-C3-C6C6-C3-C6构造的一类化合物的总称。构造的一类化合物的总称。OO12345678123456ABO12345678123456ABC取代基：取代基：-OH-OH、-OCH3-OCH3、-CH3-CH3、ArAr、异戊烯基等。、异戊烯基等。7 黄酮类化合物也称黄碱素，是广泛在于自然黄酮类化合物也称黄碱素，是广泛在于自然界的一大类化合物，大多具有颜色。在植物界大界的一大类化合物，大多具有颜色。在植物界大多分布在双子叶植物中，如豆科、芸香科、唇形多分布在双子叶植物中，如豆科

3、、芸香科、唇形科、菊科等，在裸子植物间也有较多，如银杏科，科、菊科等，在裸子植物间也有较多，如银杏科，在低等植物中少见。黄酮类化合物在植物体类多在低等植物中少见。黄酮类化合物在植物体类多与糖结合成苷的习惯方式存在，也有部分以游离与糖结合成苷的习惯方式存在，也有部分以游离态的苷元存在。态的苷元存在。2.构造与分类构造与分类2.1 分类根据分类根据 黄酮类化合物黄酮类化合物A环和环和B环中间的三碳链的氧环中间的三碳链的氧化程度、三碳链能否够成环状构造、化程度、三碳链能否够成环状构造、3位能否位能否有羟基取代以及有羟基取代以及B环衔接的位置环衔接的位置2或或3位位等特点。等特点。2.22.2天然黄酮

4、类化合物多以苷类的方式存在，天然黄酮类化合物多以苷类的方式存在，由于苷元不同，以及糖的种类、数量、衔接由于苷元不同，以及糖的种类、数量、衔接位置和衔接方式不同，构成了各种黄酮苷类位置和衔接方式不同，构成了各种黄酮苷类化合物。化合物。 组成黄酮苷的糖类主要有：单糖类；双糖组成黄酮苷的糖类主要有：单糖类；双糖类；三糖类；酰化糖类。类；三糖类；酰化糖类。 除了常见的除了常见的O-O-苷外还有苷外还有C-C-苷，在苷，在C-C-苷中糖苷中糖多衔接在多衔接在6 6位或位或8 8位，或者位，或者6 6，8 8位都衔接。位都衔接。OOABC1234567823465 芹菜素5，7，4-三OH黄酮 木犀草素5

5、，7，3，4-四OH黄酮 黄芩素(5，6，7-三OH黄酮)构造和分类构造和分类黄酮黄酮黄酮醇黄酮醇黄酮类和黄酮醇类黄酮类和黄酮醇类 黄酮类尤其以芹菜素、木樨草素、槲皮素及其甙类黄酮类尤其以芹菜素、木樨草素、槲皮素及其甙类 。金。金银花、忍冬藤、菊花、野菊花中含有的黄酮类化合物中有木银花、忍冬藤、菊花、野菊花中含有的黄酮类化合物中有木樨草素及其甙类，具有止咳、祛痰、平喘作用。樨草素及其甙类，具有止咳、祛痰、平喘作用。23OOOH 山柰酚5，7，4-三OH黄酮醇 槲皮素5，7，3，4-四OH黄酮醇 杨梅素5，7，3，4，5-五OH黄酮醇 黄酮醇类的构造特点是在黄酮根本母核的黄酮醇类的构造特点是在黄

6、酮根本母核的3 3位上连有羟基或位上连有羟基或其他含氧基团。其他含氧基团。 构造和分类构造和分类23OOOH 二氢黄酮醇二氢黄酮醇二氢槲皮素5，7，3，4-四OH二氢黄酮醇 二氢桑色素5，7，2，4-四OH二氢黄酮醇 二氢黄酮类和二氢黄酮醇类二氢黄酮类和二氢黄酮醇类 二氢黄酮类构造是黄酮根本母核的二氢黄酮类构造是黄酮根本母核的2 2、3 3位双键被氢化而成。位双键被氢化而成。 23OO二氢黄酮二氢黄酮橙皮苷5，7，3 - 三OH，4-OCH3二氢黄酮 甘草苷甘草素-7-O-glu苷 甘草素7，4 二OH二氢黄酮 二氢黄酮醇类具有黄酮醇类的二氢黄酮醇类具有黄酮醇类的2 2、3 3位被氢化的根本母

7、核。位被氢化的根本母核。常与相应的黄酮醇类共存于同一植物体内。常与相应的黄酮醇类共存于同一植物体内。23OO 大豆素7，4-二OH异黄酮 大豆苷大豆素-7-O-glc苷 葛根素7，4-二OH，8- glc异黄酮苷23OO紫檀素紫檀素鱼藤酮鱼藤酮异黄酮异黄酮二氢异黄酮二氢异黄酮异黄酮类及二氢异黄酮类异黄酮类及二氢异黄酮类 异黄酮类母核为异黄酮类母核为3-3-苯基色原酮的构造，即苯基色原酮的构造，即B B环衔接在环衔接在C C环的环的3 3位上。主要存在于豆科、鸢尾科植物中。用于治疗冠心病的位上。主要存在于豆科、鸢尾科植物中。用于治疗冠心病的葛根总黄酮中含有的葛根素、大豆素、大豆甙等都是异黄酮葛根

8、总黄酮中含有的葛根素、大豆素、大豆甙等都是异黄酮类衍生物。类衍生物。2345623465OOHOOHOHOHOHOglc红花苷红花苷查耳酮查耳酮OOHOOHOHOHOglc梨根苷梨根苷二氢查耳酮二氢查耳酮查耳酮类及二氢查耳酮类查耳酮类及二氢查耳酮类 查耳酮类的构造特点是二氢黄酮查耳酮类的构造特点是二氢黄酮C C环上环上1 1、2 2位键断裂生位键断裂生成的开环衍生物，即三碳链不构成环。如红花中的红花甙，成的开环衍生物，即三碳链不构成环。如红花中的红花甙，补骨脂中的补骨脂乙素，苦参中的次苦参素都是查耳酮类。补骨脂中的补骨脂乙素，苦参中的次苦参素都是查耳酮类。34OOCH256723456OOHO

9、HOHOHOHOH+34OOH+ 飞燕草苷元硫磺菊素6，3，4-三OH橙酮花样素类花样素类 花样素类的构造特点是根本母核的花样素类的构造特点是根本母核的C C环上无羰基，环上无羰基，1 1位氧位氧原子以烊盐存在。原子以烊盐存在。橙酮类橙酮类 橙酮类的构造特点是含氧五元环，主要存在于玄参科、橙酮类的构造特点是含氧五元环，主要存在于玄参科、菊科植物中。菊科植物中。黄烷黄烷3-3-醇儿茶素类醇儿茶素类OOH3OOHOHOHOHHHOH +儿茶素儿茶素OOHOH34OOHOHOHOHOHOHOH 无色飞燕草素无色飞燕草素黄烷黄烷-3-3，4-4-二醇无色花样素类二醇无色花样素类黄烷醇类黄烷醇类 3 3

10、,8,8- -双芹菜素型双芹菜素型双黄酮类双黄酮类 双黄酮类是由两分子的黄酮衍生物聚合而成的二聚物。双黄酮类是由两分子的黄酮衍生物聚合而成的二聚物。8,88,8- -双芹菜素型双芹菜素型双苯醚型双苯醚型其他黄酮类其他黄酮类 ( (木脂素黄酮木脂素黄酮) )3.生物合成COOHNH2COCoAPALCoACOOC0AOOOHcinnamic acid-4-hydroxylaseCH2COC0ACOOHCHSHOOHOOHOHHOOHOOHisomeraseOBA B环来自桂皮酰辅酶A或羟基桂皮酰辅酶A A环来自3个分子的丙二酰辅酶A 其他黄酮类均由二氢黄酮衍生而来黄酮类化合物生物合成途径表示图黄

11、酮类化合物生物合成途径表示图4.黄酮类化合物的生物活性黄酮类化合物的生物活性 葛根总黄酮及葛根素、银杏总黄酮等具有扩葛根总黄酮及葛根素、银杏总黄酮等具有扩张冠状血管作用，临床可用于治疗冠心病。张冠状血管作用，临床可用于治疗冠心病。 卢丁、橙皮苷等具有降低毛细血管脆性和异卢丁、橙皮苷等具有降低毛细血管脆性和异常通透性作用，可用于毛细管性出血的止血药常通透性作用，可用于毛细管性出血的止血药及治疗高血压、动脉硬化的辅助药。及治疗高血压、动脉硬化的辅助药。 水飞蓟素、异水飞蓟素、次水飞蓟素有肝维水飞蓟素、异水飞蓟素、次水飞蓟素有肝维护作用，临床用于急慢性肝炎、肝硬化。护作用，临床用于急慢性肝炎、肝硬化

12、。 黄芩苷、黄芩素、槲皮素、桑色素具有抗菌、黄芩苷、黄芩素、槲皮素、桑色素具有抗菌、抗病毒作用。抗病毒作用。 牡荆素、桑色素、儿茶素等具有抗肿瘤作用。牡荆素、桑色素、儿茶素等具有抗肿瘤作用。4.黄酮类化合物的生物活性黄酮类化合物的生物活性 对心血管系统的作用对心血管系统的作用 抗肝毒作用抗肝毒作用 抗炎作用抗炎作用 雌性激素样作用雌性激素样作用 抗菌与抗病毒作用抗菌与抗病毒作用 泻下作用泻下作用 解痉作用解痉作用第二节 理化性质及显色反响1.性状2.溶解性3.酸性与碱性4.显色反响1.性状性状 形状：多为结晶固体，少数为无定形粉形状：多为结晶固体，少数为无定形粉末。末。 颜色：多为黄色颜色：多

13、为黄色 缘由：交叉共轭体系电子转移、重排，缘由：交叉共轭体系电子转移、重排，共轭加强，产生颜色的根底共轭加强，产生颜色的根底 助色团助色团给系统提供电子，使颜色加深，尤其给系统提供电子，使颜色加深，尤其7，4-位，辅助作用位，辅助作用 黄酮灰黄黄色 二氢黄酮黄酮醇灰黄黄色 二氢黄酮醇查耳酮黄橙黄色 二氢查耳酮 二氢异黄酮 黄烷醇类 异黄酮无或微黄色花样素类颜色随花样素类颜色随pH而改动而改动) 红色红色pH 8.5OOOOOO47+交叉共轭体系交叉共轭体系 旋光性 取决于 不对称碳原子的有无 有 无 一切黄酮苷糖 游离黄酮 游离黄酮 黄酮 二氢黄酮 黄酮醇 二氢黄酮醇 异黄酮 二氢异黄酮 查耳

14、酮二氢 黄烷醇类 橙酮 花样素类等 *OHOOOO2*OO旋光性旋光性 中药红花中的红花苷为查耳酮类。红花在开花初期时，花中主要成分为无中药红花中的红花苷为查耳酮类。红花在开花初期时，花中主要成分为无色的新红花苷二氢黄酮类及微量红花苷，故花冠是淡黄色；开花中期色的新红花苷二氢黄酮类及微量红花苷，故花冠是淡黄色；开花中期花中主要成分为黄色的红花苷，故花冠为深黄色；开花后期那么变成红色花中主要成分为黄色的红花苷，故花冠为深黄色；开花后期那么变成红色的醌式红花苷，故花冠为红色。的醌式红花苷，故花冠为红色。OOHOHOHOOglcOHOHOHOHOOglcOOHOOHOOglc异构化氧化酶SO2荧光性

15、荧光性 荧光显著，呈亮黄黄绿色。荧光显著，呈亮黄黄绿色。 花样素的颜色可随花样素的颜色可随pHpH的不同而改动，的不同而改动，pHpH小于小于7 7显红色，显红色，pHpH小于小于8.58.5显紫色，显紫色，pHpH大于大于8.58.5显蓝色。显蓝色。2.溶解性溶解性 普通游离苷元难溶于水，可溶于甲醇、乙普通游离苷元难溶于水，可溶于甲醇、乙醇；易溶于乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂中。醇；易溶于乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂中。苷元与糖结合后，水溶性增大，普通可溶于苷元与糖结合后，水溶性增大，普通可溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯中，在热水中溶解度甲醇、乙醇、乙酸乙酯中，在热水中溶解度增大，但难溶于乙醚、苯、氯仿等

16、有机溶剂。增大，但难溶于乙醚、苯、氯仿等有机溶剂。黄酮类化合物因含有酚羟基可溶于碱性溶液黄酮类化合物因含有酚羟基可溶于碱性溶液中使之颜色加深，但是加酸后又沉淀析出，中使之颜色加深，但是加酸后又沉淀析出，此性质可用于黄酮类化合物的提取。此性质可用于黄酮类化合物的提取。 分子的立体构造分子的立体构造 平面型分子平面型分子 非平面型分子非平面型分子 黄黄 酮酮 二氢类二氢类C-C-环半椅式构造环半椅式构造 黄酮醇黄酮醇 异黄酮羰基与异黄酮羰基与B-B-环立体妨碍环立体妨碍 查耳酮查耳酮 交叉共轭交叉共轭 分子间陈列不严密，水分子易于进入分子间陈列不严密，水分子易于进入 水溶度小水溶度小 水溶度大水溶

17、度大 2OOHRH R=OH 二氢黄酮醇R=H 二氢黄酮水溶性与构造的平面性、取代基团的种类和数目等有一定关系。水溶性与构造的平面性、取代基团的种类和数目等有一定关系。 取代基团的性质、数目、衔接位置引入羟基，数取代基团的性质、数目、衔接位置引入羟基，数目多，目多，7 7、4 4- -位，水溶度较大。羟基甲基化位，水溶度较大。羟基甲基化- -OCH3OCH3, , 水溶度降低。水溶度降低。黄酮苷黄酮苷( (亲水性亲水性) ) 三糖苷三糖苷 双糖苷双糖苷 单糖苷单糖苷 苷元苷元3-O-3-O-糖苷糖苷 7-O- 7-O-糖苷平面性分子糖苷平面性分子花样素花样素( (平面性分子，离子型平面性分子，

18、离子型) ) 非平面性分子非平面性分子 平平面性分子面性分子3.酸碱性酸碱性 酸性酸性 黄酮类化合物因分子中多具有酚羟基，黄酮类化合物因分子中多具有酚羟基，故显酸性，可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二故显酸性，可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。甲基甲酰胺中。 黄酮类化合物的酸性强弱与酚羟基数目的多少黄酮类化合物的酸性强弱与酚羟基数目的多少和位置有关。和位置有关。 以黄酮为例，酸性陈列顺序为以黄酮为例，酸性陈列顺序为: 7,4-二二OH7-或或4-OH 普通酚羟基普通酚羟基 5-OH NaHCO3水溶液水溶液 Na2CO3水溶液水溶液 NaOH水溶液水溶液 分子内氢键分子内氢键碱性

19、碱性 黄酮类化合物分子中黄酮类化合物分子中-吡喃酮环上的吡喃酮环上的1-位氧原子，位氧原子，因有未共用的电子对，故表现出微弱的碱性，可与因有未共用的电子对，故表现出微弱的碱性，可与强无机酸，如浓硫酸、盐酸等生成烊盐，烊盐极不强无机酸，如浓硫酸、盐酸等生成烊盐，烊盐极不稳定，加水后即分解。稳定，加水后即分解。 黄酮类化合物溶于浓硫酸生成烊盐，常表现为黄酮类化合物溶于浓硫酸生成烊盐，常表现为特殊颜色，可由于黄酮类化合物构造类型的初步鉴特殊颜色，可由于黄酮类化合物构造类型的初步鉴别。例如：黄酮、黄酮醇类显黄色至橙色，并有荧别。例如：黄酮、黄酮醇类显黄色至橙色，并有荧光；二氢黄酮类显橙色冷时至紫红色加

20、热光；二氢黄酮类显橙色冷时至紫红色加热时；查耳酮类显橙红色至洋红色；异黄酮二氢异时；查耳酮类显橙红色至洋红色；异黄酮二氢异黄酮类显黄色；橙酮类显红色至洋红色。黄酮类显黄色；橙酮类显红色至洋红色。4.显色反响显色反响4.1复原反响复原反响 盐酸盐酸-镁粉反响镁粉反响 常用反响常用反响 多数黄酮类化合物在镁粉和盐酸作用下，可以多数黄酮类化合物在镁粉和盐酸作用下，可以复原显色。不同的黄酮类化合物呈不同的颜色，复原显色。不同的黄酮类化合物呈不同的颜色，其反响产物为花样甙元及其二聚物。其反响产物为花样甙元及其二聚物。 在乙醛分子中的羰基与甲基之间插入一个或多个乙烯基在乙醛分子中的羰基与甲基之间插入一个或

21、多个乙烯基CHCHCHCH变为变为CH3(CHCH3(CHCH)nCHOCH)nCHO后，原来的后，原来的CH3CH3和和CHOCHO间的间的相互影响依然存在，甲基上的氢原子依然是活泼的，也就是说这相互影响依然存在，甲基上的氢原子依然是活泼的，也就是说这两个基团依然坚持着没有参与两个基团依然坚持着没有参与CHCHCHCH时同样的关系。时同样的关系。而这样在化合物而这样在化合物A AB B的的A A和和B B之间插入一个或多个乙烯基生成之间插入一个或多个乙烯基生成型化合物后，当型化合物后，当n n0 0，1 1，2 2，33等时，原来等时，原来A A和和B B间的相互影间的相互影响依然存在的景象

22、，极为普遍，称为插烯规律。按插烯规律，巴响依然存在的景象，极为普遍，称为插烯规律。按插烯规律，巴豆醛豆醛CH3CHCH3CHCHCHOCHCHO分子中甲基和分子中甲基和CHOCHO的关系与的关系与CH3CHOCH3CHO类似，甲类似，甲基上的基上的-氢原子仍应活泼，现实也是这样，氢原子仍应活泼，现实也是这样，CH3CHCH3CHCHCHOCHCHO中的中的甲基上的氢也活泼，巴豆醛那么为乙醛的插烯物。甲基上的氢也活泼，巴豆醛那么为乙醛的插烯物。由于由于-氢原子的活泼性，氢原子的活泼性，-不饱和醛、酮能发生一系不饱和醛、酮能发生一系列取代反响和缩合反响。列取代反响和缩合反响。又如丁烯又如丁烯-2-

23、2-酸酯是乙酸酯的插烯物，其酸酯是乙酸酯的插烯物，其CHCH上的上的-氢原子也氢原子也活泼，所以能起酯缩合反响活泼，所以能起酯缩合反响插烯规律插烯规律 留意：花样素类及部分橙酮、查耳酮类等单留意：花样素类及部分橙酮、查耳酮类等单纯在浓盐酸酸性下也会发生颜色变化。因此必要纯在浓盐酸酸性下也会发生颜色变化。因此必要时须预先作空白对照实验，即在供试液中不加镁时须预先作空白对照实验，即在供试液中不加镁粉，而仅参与浓盐酸，假设产生红色，那么阐明粉，而仅参与浓盐酸，假设产生红色，那么阐明该反响有干扰要素存在。该反响有干扰要素存在。钠汞齐复原反响钠汞齐复原反响 在样品的乙醇溶液中参与钠汞齐，放置数分在样品的

24、乙醇溶液中参与钠汞齐，放置数分钟或数小时或加热，过滤，滤液用盐酸酸化，那钟或数小时或加热，过滤，滤液用盐酸酸化，那么黄酮、二氢黄酮、异黄酮、二氢异黄酮类显示么黄酮、二氢黄酮、异黄酮、二氢异黄酮类显示红色，黄酮醇类显黄红色，黄酮醇类显黄 淡红色，二氢黄酮醇类显淡红色，二氢黄酮醇类显棕黄色。棕黄色。四氢硼钠复原反响四氢硼钠复原反响 四氢硼钠四氢硼钠NaBH4NaBH4是针对二氢黄酮类化合物是针对二氢黄酮类化合物专属较高的一种复原剂。二氢黄酮类或二氢黄酮专属较高的一种复原剂。二氢黄酮类或二氢黄酮醇类被复原产生红紫红色，假设醇类被复原产生红紫红色，假设A A环与环与B B环有一环有一个以上的个以上的-

25、OH-OH或或-OCH3-OCH3取代那么颜色加深。其它黄取代那么颜色加深。其它黄酮类均为负反响。酮类均为负反响。 黄酮复原后呈橙至微红色，黄酮醇、二氢黄酮、黄酮复原后呈橙至微红色，黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇复原后呈红二氢黄酮醇复原后呈红- -紫红色，个别也有绿色或紫红色，个别也有绿色或蓝色。硼氢化钠只能复原二氢黄酮类而呈现紫蓝色。硼氢化钠只能复原二氢黄酮类而呈现紫- -紫紫红色。红色。4.24.2金属盐类试剂的络合反响金属盐类试剂的络合反响三氯化铝反响三氯化铝反响 络合物多黄色，在紫外下显鲜黄色荧光，但络合物多黄色，在紫外下显鲜黄色荧光，但4-4-羟基黄酮醇或羟基黄酮醇或7 7，4-4-二

26、氢黄酮醇显天蓝色荧二氢黄酮醇显天蓝色荧光。光。锆锆- -枸橼酸反响枸橼酸反响 鉴别黄酮类化合物分子鉴别黄酮类化合物分子中中3-3-或或5-OH5-OH的存在与否。锆的存在与否。锆盐络合物多呈黄绿色荧光。盐络合物多呈黄绿色荧光。铅盐反响铅盐反响 常用常用1%1%醋酸铅或碱式铅水溶液，可生成黄醋酸铅或碱式铅水溶液，可生成黄- -红红色沉淀。黄酮类化合物与铅盐生成沉淀的颜色，因色沉淀。黄酮类化合物与铅盐生成沉淀的颜色，因羟基数目及位置不同而异。羟基数目及位置不同而异。镁盐反响镁盐反响 常用醋酸镁甲醇溶液做显色剂，紫外光下，二常用醋酸镁甲醇溶液做显色剂，紫外光下，二氢黄酮、二氢黄酮醇类可显示出天蓝色荧

27、光，假设氢黄酮、二氢黄酮醇类可显示出天蓝色荧光，假设具有具有C5-OHC5-OH，颜色更明显。黄酮、黄酮醇及异黄酮，颜色更明显。黄酮、黄酮醇及异黄酮类等那么显示黄类等那么显示黄- -橙黄橙黄- -褐色。褐色。氨性氯化锶反响氨性氯化锶反响 氨性氯化锶的甲醇溶液可与分子中具有邻二酚氨性氯化锶的甲醇溶液可与分子中具有邻二酚羟基构造的黄酮类化合物生成绿羟基构造的黄酮类化合物生成绿- -棕色棕色- -黑色沉淀。黑色沉淀。三氯化铁反响三氯化铁反响 分子中的酚羟基可与三氯化铁水溶液或醇溶液分子中的酚羟基可与三氯化铁水溶液或醇溶液反响显色。黄酮类化合物依分子中所含酚羟基数目反响显色。黄酮类化合物依分子中所含酚

28、羟基数目及位置的不同，可呈现紫、绿、蓝等不同颜色。及位置的不同，可呈现紫、绿、蓝等不同颜色。4.34.3硼酸显色反响硼酸显色反响 黄酮类化合物分子中含有以下构造时，在无机黄酮类化合物分子中含有以下构造时，在无机酸或有机酸存在的条件下，可与硼酸反响，产生亮酸或有机酸存在的条件下，可与硼酸反响，产生亮黄色。黄色。5-5-羟基黄酮及羟基黄酮及6 6- -羟基查耳酮类构造符合上羟基查耳酮类构造符合上述要求，故呈阳性反响。述要求，故呈阳性反响。4.44.4碱性试剂反响碱性试剂反响 四条四条4.54.5与五氯化锑反响与五氯化锑反响4.64.6其它显色反响其它显色反响 Gibb Gibbs s反响可用于鉴别

29、黄酮类反响可用于鉴别黄酮类 化合物酚羟基化合物酚羟基对位能否被取代。方法是将样品溶于吡啶中，酚羟对位能否被取代。方法是将样品溶于吡啶中，酚羟基对位未被取代者那么参与基对位未被取代者那么参与GibbGibbs s 试剂试剂2,6-2,6-二二氯苯醌氯亚胺后即显蓝色或蓝绿色。氯苯醌氯亚胺后即显蓝色或蓝绿色。第三节 提取与分别一、粗提二、提取物的精制三、分别1. 1.黄酮类化合物的提取与分别黄酮类化合物的提取与分别1.11.1黄酮类化合物的提取黄酮类化合物的提取1.1.11.1.1乙醇或甲醇提取法乙醇或甲醇提取法1.1.21.1.2热水提取法热水提取法1.1.31.1.3碱性水或碱性稀醇提取法碱性水

30、或碱性稀醇提取法 黄酮苷和极性较大的苷元：甲醇，乙醇，甲醇黄酮苷和极性较大的苷元：甲醇，乙醇，甲醇- -水水1 1：1 1，丙酮，乙酸乙酯，丙酮，乙酸乙酯 多糖苷：沸水多糖苷：沸水 花样苷：花样苷：0.1%0.1%盐酸进展提取盐酸进展提取 苷元：氯仿，乙醚，乙酸乙酯。苷元：氯仿，乙醚，乙酸乙酯。留意：苷类提取防止酶解。留意：苷类提取防止酶解。溶剂萃取法：自浸膏中先用乙醚萃取苷元，再溶剂萃取法：自浸膏中先用乙醚萃取苷元，再用乙酸乙酯反复萃取苷，最后用正丁醇萃取极用乙酸乙酯反复萃取苷，最后用正丁醇萃取极性较大的苷。性较大的苷。碱提酸沉法：碱提酸沉法：常用碱水：石灰水，常用碱水：石灰水，Na2CO3

31、,，稀，稀NaOH，碱性稀醇。酸沉：盐酸。，碱性稀醇。酸沉：盐酸。留意：酸碱浓度不宜过高，碱性过强，破留意：酸碱浓度不宜过高，碱性过强，破坏黄酮母核；酸性过强，生成烊盐，影响坏黄酮母核；酸性过强，生成烊盐，影响产率。产率。石灰水：可除去鞣质，果胶，粘液质，有石灰水：可除去鞣质，果胶，粘液质，有利于纯化。但浸出效果不及利于纯化。但浸出效果不及NaOH，且有，且有些黄酮可与钙结合成不溶性沉淀。些黄酮可与钙结合成不溶性沉淀。稀稀NaOH：浸出效率高，但杂质多。：浸出效率高，但杂质多。 炭粉吸附法 主要适于苷类的精制任务。通常，在植物的甲醇粗提取物中，分次参与活性炭，搅拌，静置，直至定性检查上清液无黄

32、酮反响时为止。过滤，搜集吸苷炭末，依次用沸甲醇、沸水、7%酚/水、15%酚/醇溶液进展洗脱，各部分洗脱液进展定性检查或用PPC鉴定。 分别的根本根据：极性差别、酸性强弱、分子分别的根本根据：极性差别、酸性强弱、分子大小和特殊构造。大小和特殊构造。1.2.11.2.1溶剂萃取法溶剂萃取法1.2.2 pH1.2.2 pH梯度萃取法梯度萃取法1.2.31.2.3柱色谱法柱色谱法1.2 1.2 黄酮类化合物的分别黄酮类化合物的分别1.2.31.2.3柱色谱法柱色谱法硅胶柱色谱法：适于分别异黄酮，二氢黄酮醇硅胶柱色谱法：适于分别异黄酮，二氢黄酮醇和高度甲基化或乙酰化的黄酮及黄酮醇类。和高度甲基化或乙酰化

33、的黄酮及黄酮醇类。分别苷元时：氯仿分别苷元时：氯仿- -甲醇混合溶剂洗脱。甲醇混合溶剂洗脱。分别苷时：氯仿分别苷时：氯仿- -甲醇甲醇- -水或乙酸乙酯水或乙酸乙酯- -丙酮丙酮- -水洗脱。水洗脱。 聚酰胺柱色谱：适宜于黄酮类化合物的分别。聚酰胺柱色谱：适宜于黄酮类化合物的分别。 其分别规律如下：其分别规律如下： a. a.苷元一样时，以含水挪动相洗脱，被吸附的强弱顺序苷元一样时，以含水挪动相洗脱，被吸附的强弱顺序为：苷元为：苷元 单糖苷单糖苷 双糖苷双糖苷 双糖键苷。双糖键苷。 b.b.与酚羟基的数目有关，数目越多，吸附力越强。与酚与酚羟基的数目有关，数目越多，吸附力越强。与酚羟基的位置有

34、关，假设酚羟基所处的位置易构成分子内氢羟基的位置有关，假设酚羟基所处的位置易构成分子内氢键，那么吸附力减弱。普通来说查耳酮键，那么吸附力减弱。普通来说查耳酮 二氢黄酮，黄酮二氢黄酮，黄酮 二氢黄酮。二氢黄酮。 c.c.不同类型黄酮类化合物，被吸附的强弱顺序为：黄酮不同类型黄酮类化合物，被吸附的强弱顺序为：黄酮醇醇 黄酮黄酮 二氢黄酮二氢黄酮 异黄酮。异黄酮。 d.d.分子内芳香化程度越高，共轭双键越多，那么吸附力分子内芳香化程度越高，共轭双键越多，那么吸附力越强。越强。葡聚糖凝胶色谱法：葡聚糖凝胶色谱法： 凝胶类型：凝胶类型：SephadexLH-20和和SephadexG两种类型的凝胶。两种

35、类型的凝胶。 分别苷元时：利用吸附作用，游离酚羟基分别苷元时：利用吸附作用，游离酚羟基数目越多，那么吸附力越强，越难洗脱。数目越多，那么吸附力越强，越难洗脱。 分别苷时：主要靠分子筛，洗脱时按苷分分别苷时：主要靠分子筛，洗脱时按苷分子量由大到小的顺序依次被洗脱出柱体。子量由大到小的顺序依次被洗脱出柱体。 常用的洗脱剂：碱性水溶液，含盐水溶液、常用的洗脱剂：碱性水溶液，含盐水溶液、醇及含水醇。醇及含水醇。1.2.2 PH1.2.2 PH梯度法：用不同浓度的碱分别。梯度法：用不同浓度的碱分别。 混合物溶于有机溶剂，依次用混合物溶于有机溶剂，依次用NaHCO3NaHCO3、Na2CO3Na2CO3、

36、0.2%NaOH0.2%NaOH、4%NaOH4%NaOH萃取，相应萃取，相应的黄酮类化合物洗脱顺序：的黄酮类化合物洗脱顺序：7,47,4二羟基二羟基7 7或或4 4羟基普通酚羟基羟基黄酮。羟基普通酚羟基羟基黄酮。1.2.3 1.2.3 硼酸络合法硼酸络合法: : 具有邻二酚羟基的黄酮类化合具有邻二酚羟基的黄酮类化合物可与硼酸络合生成易溶于水的化合物。物可与硼酸络合生成易溶于水的化合物。 1. 1.理化检识理化检识 2.2.色谱检识色谱检识 2.1 2.1 纸色谱纸色谱 2.22.2薄层色谱薄层色谱第四节第四节 检识与构造测定检识与构造测定2.2 2.2 薄层色谱薄层色谱 硅胶薄层硅胶薄层 聚

37、酰胺薄层聚酰胺薄层 纤维素薄层纤维素薄层 氧化铝柱色谱氧化铝柱色谱 葡聚糖凝胶柱色谱葡聚糖凝胶柱色谱 “相对洗提率相对洗提率 1 1理化检识：理化检识：HCI-MgHCI-Mg粉：黄酮醇、二氢黄酮醇；粉：黄酮醇、二氢黄酮醇；在盐酸在盐酸- -镁粉作用下，易被氢化复原，迅速生镁粉作用下，易被氢化复原，迅速生成红紫红色个别有绿兰色。成红紫红色个别有绿兰色。四氢硼钠：二氢黄酮醇；四氢硼钠：二氢黄酮醇； 取样品取样品10mg10mg溶于甲醇，加溶于甲醇，加NaBH4 10mgNaBH4 10mg，再滴，再滴加加1%1%浓盐酸或浓硫酸，呈红紫色。浓盐酸或浓硫酸，呈红紫色。醋酸镁：二氢黄酮醇醋酸镁：二氢黄

38、酮醇 醋酸镁甲醇液作显色剂，可在纸上进展。醋酸镁甲醇液作显色剂，可在纸上进展。 二氢黄酮醇类显天蓝色荧光，假设具有二氢黄酮醇类显天蓝色荧光，假设具有C5-C5-OHOH，色泽更明显。，色泽更明显。五氯化锑：查耳酮五氯化锑：查耳酮查耳酮的查耳酮的CCl4CCl4溶液与五氯化锑作用生成红或溶液与五氯化锑作用生成红或紫红沉淀。紫红沉淀。锆盐锆盐- -枸橼酸：区别枸橼酸：区别3-OH3-OH、5-OH5-OH黄酮；黄酮；方法如下：方法如下：观察颜色2%枸橼酸甲醇液黄色1ml2% ZrOCl210ml甲醇溶样品0.5-1mg黄色不褪黄色褪去2%枸橼酸黄色锆络合物 锆盐3-OH, 4=O5-OH, 4=O

39、氨性氯化锶：邻二酚羟基黄酮氨性氯化锶：邻二酚羟基黄酮. .显绿棕色黑色沉淀。显绿棕色黑色沉淀。2色谱检识色谱检识 纸色谱纸色谱运用范围：适宜于检识各种类型黄酮类化合物，运用范围：适宜于检识各种类型黄酮类化合物，包括苷与苷元。包括苷与苷元。双向纸色谱是检识植物粗提物中黄酮类化合物双向纸色谱是检识植物粗提物中黄酮类化合物存在的最好方法之一。存在的最好方法之一。 第一向通常采用一种第一向通常采用一种“醇性溶剂展开，醇性溶剂展开，如如n-BuOH-HOAc-H2O(4:1:5 上层上层 BAW)、n-BuOH-HOAc-H2O(3:1:1 ，TBA)与水饱和的与水饱和的n-BuOH等；等； 第二向通常

40、用一种第二向通常用一种 “水性溶剂展开，水性溶剂展开， 如如2%2%5%HOAc5%HOAc等等检识黄酮类苷元：普通用检识黄酮类苷元：普通用“醇性展开剂；醇性展开剂； 检识黄酮苷：普通用检识黄酮苷：普通用“水性展开剂。水性展开剂。RfRf与黄酮类化合物构造的关系：与黄酮类化合物构造的关系： a. a.水性溶剂展开时，平面型分子几乎停留原点水性溶剂展开时，平面型分子几乎停留原点不动不动(Rf0.02);(Rf0.7Rf0.7 单糖苷单糖苷 双糖苷。双糖苷。c.c.醇性溶剂展开时，羟基被甲氧基取代，因极性醇性溶剂展开时，羟基被甲氧基取代，因极性减小，减小，RfRf将增大。将增大。d.d.醇性溶剂展

41、开时，如黄酮类化合物羟基被苷化，醇性溶剂展开时，如黄酮类化合物羟基被苷化，因极性增大，因极性增大，RfRf将下降。将下降。 e.e.大部分极性大的黄酮出如今滤纸的右上方，极大部分极性大的黄酮出如今滤纸的右上方，极性小的黄酮那么出如今滤纸的左下方。性小的黄酮那么出如今滤纸的左下方。f.f.大多数黄酮类化合物在纸色谱上用紫外光灯检大多数黄酮类化合物在纸色谱上用紫外光灯检查时，可以看到有色斑点，以氨蒸汽处置后常产查时，可以看到有色斑点，以氨蒸汽处置后常产生明显的颜色变化生明显的颜色变化附：黄酮与黄酮醇的斑点颜色变化。附：黄酮与黄酮醇的斑点颜色变化。滤纸上斑点颜色滤纸上斑点颜色能够构造能够构造UVUV

42、UV/NH3UV/NH3 深紫黄或黄绿1 15-OH5-OH、4-OH4-OH黄酮黄酮2 25-OH5-OH、4-OH 3-OR4-OH 3-OR黄酮醇黄酮醇3 35-OH5-OH、33，4-OH4-OH黄酮黄酮4 45-OH5-OH、34-OH 3-OR34-OH 3-OR黄酮醇黄酮醇亮蓝色荧光亮蓝色荧光 黄绿或蓝绿色1 1无无5-OH 5-OH 黄酮黄酮2 2无无5-OH 5-OH 但有但有3-OR3-OR3 3无无5-OH 5-OH 但有但有33，44双双-OH-OH暗黄或橙色无颜色变化无颜色变化1 13-OH3-OH或或5-OR 5-OR 黄酮黄酮2 23-OH3-OH、33，4-OH

43、4-OH黄酮醇黄酮醇TLCTLC主要指吸附薄层主要指吸附薄层 硅胶硅胶TLCTLC用途：分别与鉴定弱极性黄酮类化合物。主要用用途：分别与鉴定弱极性黄酮类化合物。主要用于检识极性较小的黄酮。氯仿于检识极性较小的黄酮。氯仿- -甲醇或正丁醇甲醇或正丁醇- -醋醋酸酸- -水等系统展开。水等系统展开。分别黄酮苷元常用的展开剂：分别黄酮苷元常用的展开剂： 甲苯甲苯- -甲酸甲酯甲酸甲酯- -甲酸甲酸 541 541 等。等。分别黄酮苷元的衍生物如甲醚、乙酸乙酯分别黄酮苷元的衍生物如甲醚、乙酸乙酯 等中性成分，常用的展开剂是：苯等中性成分，常用的展开剂是：苯- -丙酮丙酮9191或苯或苯- -乙酸乙酯乙

44、酸乙酯7.52.57.52.5等。等。聚酰胺聚酰胺TLCTLC 特点：特别适宜于分别含游离酚羟基的特点：特别适宜于分别含游离酚羟基的 黄酮及其苷类。黄酮及其苷类。 常用的展开剂：常用的展开剂： 乙醇乙醇- -水水3 3：2 2、丙酮、丙酮- -水水1 1：1 1、 水饱和的正丁醇水饱和的正丁醇- -醋酸醋酸100100：1 1等等 游离黄酮：氯仿游离黄酮：氯仿- -甲醇、氯仿甲醇、氯仿- -甲醇甲醇- -丁酮展开丁酮展开 黄酮苷：甲醇黄酮苷：甲醇- -乙酸乙酸- -水、甲醇水、甲醇- -水展开。水展开。常用的薄层色谱显色方法常用的薄层色谱显色方法 1 1紫外灯下察看；紫外灯下察看； 2 2氨蒸

45、气处置后察看颜色变化氨蒸气处置后察看颜色变化 3 32 2 AlCl3AlCl3甲醇溶液甲醇溶液中药实例 例一例一 槐米：豆科槐槐米：豆科槐Sophora japonicaSophora japonica的花蕾。主要的花蕾。主要成分为黄酮芦丁含量成分为黄酮芦丁含量23%23%。芦丁的溶解度：热水：。芦丁的溶解度：热水：1:2001:200；冷水：；冷水：1:100001:10000；沸乙醇：；沸乙醇：1:601:60；沸甲醇：；沸甲醇：1:71:7。可溶于吡啶，甲酰胺和碱液，微溶于乙醇、丙酮、乙可溶于吡啶，甲酰胺和碱液，微溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯，不溶于氯仿，二硫化碳、乙醚、苯和石油醚。酸乙酯

46、，不溶于氯仿，二硫化碳、乙醚、苯和石油醚。 OHOOHOOROHOHR=glurha芦丁R=OH槲皮素 提取分别：水煮提取或碱溶酸沉法提取，水提取分别：水煮提取或碱溶酸沉法提取，水或乙醇重结晶。流程图见下页。或乙醇重结晶。流程图见下页。 留意：芦丁有邻二酚羟基，不太稳定，空气留意：芦丁有邻二酚羟基，不太稳定，空气中会渐渐氧化变为暗褐色，碱性条件下更易中会渐渐氧化变为暗褐色，碱性条件下更易氧化，因此用碱水提取时常加少量硼砂，使氧化，因此用碱水提取时常加少量硼砂，使硼酸盐与邻二酚羟基络合维护酚羟基。硼酸盐与邻二酚羟基络合维护酚羟基。槐花米粗粉（20g）碱提取在500ml烧杯中加入水250ml，硼砂

47、1g注1在加热至沸腾时，投入槐花米，继续直火煮沸23分钟，在搅拌下小心加入石灰乳，调至8.59注2保持微沸30分钟，趁热用尼龙布挤过滤。滤渣滤液酸沉淀在6070下用浓盐酸调pH至4注3。静置6小时以上析出沉淀。抽滤，用蒸馏水洗沉淀12次至中性。滤液沉淀（芦丁粗品）（弃去）粗称重后按芦丁在热水中1 200的溶解度加蒸馏水进行重结晶。将沉淀悬浮于蒸馏水中，加热煮沸15分钟，趁热过滤。滤渣（弃去）滤液充分静置，过滤，6070干燥，称重。芦丁（精制品）水提取法水提取法碱溶酸沉提取法碱溶酸沉提取法 具有清热燥湿、具有清热燥湿、泻火解毒、止血安胎泻火解毒、止血安胎之效果，其化学成分之效果，其化学成分主要含

48、黄酮类成分，主要含黄酮类成分，另有氨基酸、挥发油、另有氨基酸、挥发油、糖和甾醇。糖和甾醇。例二 黄芩：唇形科黄芩的枯燥根。 1. 1.主成分的构造与性质：主成分的构造与性质： 有有3030多种黄酮类成分。以游离存在的数目较多。含量多种黄酮类成分。以游离存在的数目较多。含量以黄芩苷为主，也是抗菌的代表性成分。以黄芩苷为主，也是抗菌的代表性成分。 黄芩苷：含量高达黄芩苷：含量高达4%4%5%5%，为葡萄糖醛酸苷。在酸水，为葡萄糖醛酸苷。在酸水中溶解度小，不易被酸水解，能被黄芩酶水解。中溶解度小，不易被酸水解，能被黄芩酶水解。 黄芩素：溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯及热冰醋酸。溶黄芩素：溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯及热冰醋酸。溶于稀氢氧化钠呈绿色，黄芩素具有于稀氢氧化钠呈绿色，黄芩素具有5 5，6 6，7 7三羟基，在空三羟基，在空气中易被氧