农业级聚谷氨酸标准

1、 Q/XKJS 南京轩凯生物科技有限公司 发布2011-08-01发布2011-08-01实施农业级聚谷氨酸 Q/XKJS001-2011南京轩凯生物科技有限公司企业标准前 言农业级聚谷氨酸目前尚无国家标准和行业标准，根据标准化法的规定，特制定本标准，作为企业产品检验的依据。本标准的编写要求、格式、构成和表述方法，符合GB/T 1.1-2009标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写和GB/T 1.2-2002标准化工作导则 第2部分：标准中规范性技术要素内容的确定方法的要求。本标准中主要技术要素是参照国外同类产品相关产品标准，并结合产品试剂的实际数据及市场需要确定。本标准自发布之日起有效期

2、三年，到期复审。本标准由南京轩凯生物科技有限公司提出并负责起草。本标准主要起草人： 。农业级聚谷氨酸1 范围本标准规定了农业级聚谷氨酸的技术要求、检验方法、检验规则、标志、包装、运输与贮存等。本标准适用于以谷氨酸为原料制得的农业级聚谷氨酸。结构式：2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T8170-2008 数值修约规则与极限数值的表示和判定GB/T 

3、;603-2002  化学试剂  试验方法中所用制剂及制品的制备GB/T6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法NY/T 1115-2006 水溶肥料水不溶物含量的测定国家技术监督局令1995第43号 定量包装商品计量监督规定3 技术要求产品性能应符合表1的要求 表1 产品性能指标序号项目指标1物理外观黄色或褐色粉末2含量20%3全氮5%5全磷15%6全钾18%7不溶物含量0.5%8pH5.0-7.0 净含量允许误差应符合定量包装商品计量监督管理办法的规定。4 检验方法4.1 物理外观在自然光线下用肉眼检查产品的外观。4.2 含量4.2.1 方法

4、提要以硫酸钠溶液为流动相，用凝胶渗透色谱法（GPC）分离测定聚谷氨酸含量4.2.2 试剂及溶液4.2.2.1 硫酸钠溶液（0.2mol/L）称取28.412g硫酸钠溶于水并稀释至1L，用乙酸调节pH至4.0，用孔径0.22m混合纤维素酯微孔滤膜过滤，超声波脱气15min。4.2.2.2 聚谷氨酸标准贮备液（10mg/mL）称取聚谷氨酸标准品（纯度99.0%）1.0g(准确至0.0002g)，用纯水溶解转移至100mL容量瓶中，用纯水稀释至刻度，混匀。4.2.2.3 聚谷氨酸标准溶液（1.0mg/mL）移取10.00mL聚谷氨酸标准贮备溶液（4.2.2.2）于100mL容量瓶中，用纯水稀释至刻度

5、，混匀。此标准溶液使用前制备。4.2.3 仪器设备 凝胶渗透色谱仪：配有紫外检测器。一般实验室仪器和设备。4.2.4 色谱柱及操作条件凝胶柱：SB-806M HQ检测温度：35检测波长：210nm检测器:紫外检测器(210nm)流速：1.0mL/min进样量：20L4.2.5 分析步骤4.2.5.1 标准曲线的绘制按表2所示，将聚谷氨酸标准溶液（4.2.2.3）分别准确移去至6个25 mL容量瓶中，用纯水稀释至刻度，溶液经0.22m水系滤头过滤。打开色谱仪，并调至工作状态，待基线平稳后，依次将上述聚谷氨酸标准溶液注入凝胶柱中，进样量为20L，记录峰面积，以标准溶液中聚谷氨酸的质量为横坐标，峰面

6、积为纵坐标绘制标准曲线。聚谷氨酸典型图谱见附录A。表2 聚谷氨酸标准溶液加入量聚谷氨酸标准溶液体积，mL0510152025聚谷氨酸的对应量，mg05101520254.2.5.2 试样测定根据试样中聚谷氨酸的不同含量，按表3确定称样量后称样，准确至0.0001g。然后用纯水溶解转移至100mL容量瓶中，并用纯水稀释至刻度，摇匀。配好的试样溶液经0.22m水系滤头过滤，进样量为20L，进行GPC检测，记录峰面积，并根据标准曲线查得试样中聚谷氨酸的质量m1。表3 不同聚谷氨酸含量，称取试料量聚谷氨酸（）%00.050.050.200.200.500.50称取试料量（m）g2.000.500.20

7、0.104.2.6 结果的表述和计算以质量分数表示的聚谷氨酸的含量，数值以表示，按公式（1）计算： m =×100%（1）m式中：m1试料中测得聚谷氨酸的质量，mg；m试样质量，g。4.2.7 允许差平行测定结果允许绝对值不得大于0.005%，取平行测定结果的算术平均值作为测定结果。4.3 全氮4.3.1 方法提要农业级聚谷氨酸用浓硫酸加双氧水消煮，使有机氮转化为铵盐。铵盐经碱化后形成氨，经蒸馏将氨吸收到硼酸溶液中。以甲基红-溴甲酚绿为指示剂，用标准酸滴定，测定全氮含量（不包括全部硝态氮）。4.3.2 试剂所有试剂除注明者外，均为分析纯。分析用水应符合GB/T 6682分析实验室用水

8、规格和试验方法三级水的规格。4.3.2.1 硫酸（GB/T 625）。4.3.2.2 30%过氧化氢（GB 6684）。4.3.2.3 氢氧化钠：40%，（m/V）溶液，称取40g氢氧化钠（GB 629 分析纯）溶于100mL水中。4.3.2.4 硼酸：2%（v/m）溶液，20g硼酸（GB 628）溶于1L约 60去离子水中，冷却后再用稀碱调节溶液pH至4.5。使用前每升硼酸溶液中加入甲基红-溴甲酚绿混合指示剂20mL，并用稀酸或稀碱调节至微红色，此时该溶液的PH值为4.5。4.3.2.5 甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：0.5g溴甲酚绿(HG 3-1220)和0.1g甲基红(HG 3-958)于

9、研钵中，加少量95%乙醇研磨至指示剂全溶为止，最后加95%的乙醇至100mL。4.3.2.6 硫酸标准液c（1/2 H2SO4）=0.02mol/L（GB 601）。4.3.3 仪器：4.3.3.1 消煮管：50mL或100mL。4.3.3.2 消煮炉或可调电炉：1000W。4.3.3.3 弯颈小漏斗：2cm。4.3.3.4 凯氏定氮仪：全自动或半自动。4.3.3.5 分析天平：感量为0.1mg。4.3.3.6 移液管：5，10mL。4.3.4 分析步骤4.3.4.1 试样溶液制备称取试样0.5g，精确至0.001g，置于50mL消煮管中（勿将样品粘附在瓶颈上）。先滴入少些水湿润样品，然后加8

10、mL硫酸，轻轻摇匀并放置过夜。在管口放一弯颈小漏斗，在消煮炉上先250消煮（温度稳定后计时，时间约30min），待H2SO4分解冒出大量白烟后再升高温度至400，当溶液呈均匀的棕黑色时取下。（时间约3h），稍冷后加10滴H2O2（注4.3.6.1），摇匀，再加热至微沸（注4.3.6.2），消煮约5min，取下稍冷后，重复加H2O2 5-10滴，再消煮。如此重复3-5次，每次添加的H2O2的量应逐次减少，消煮到溶液呈无色或清亮后（应该为水的颜色），再加热约5-10min，以除尽剩余的H2O2。将消煮管取下，冷却。并用少量水冲洗弯颈漏斗，洗液流入消煮管。将消煮液无损的洗入100mL容量瓶中，用水定

11、容，摇匀。过滤或放置澄清后供氮的测定。4.3.4.2 空白试验除不加试样外，试剂用量和操作与测定试样时相同。4.3.4.3 测定4.3.4.3.1 蒸馏前将配制好的氢氧化钠，硫酸标准液，混合指示剂，对定氮仪进行充分预热，进行空蒸镏清洗管道，直至读数稳定。4.3.4.3.2 吸取上述待测液10.00mL（含NH4-N约1mg），注入凯氏定氮仪蒸馏管中，参数设置后，对待测液进行测定，其中加碱时间应设为3S。 4.3.5 分析结果的表述全氮（N）含量以g/kg表示，按下式计算：全氮(N)=c(V-V0)×0.014×D×1000/m； 式中：c酸标准溶液的浓度，mol/

12、L；V滴定试样所用的酸标准液体积，mL；V0滴定空白所用的酸标准液体积，mL；0.014N的摩尔质量，kg/mol；m称样量，g；D分取倍数，定容体积/分取体积，100/10；所得结果应保留小数点后三位。两个平行测定结果允许绝对差应0.06%。4.3.6 注意事项4.3.6.1 加H2O2时，要直接滴入瓶底溶液中，如果滴在瓶颈壁上，H2O2很快分解，失去氧化能力；也不要滴在小漏斗上，以免遗留的H2O2影响氮的比色测定。4.3.6.2 H2O2不宜加入过早，每次用量不可过多，加入后的消煮温度不要过高，只要保持消煮液微沸即可。 定氮仪参数设置中，加碱量设置为3S；定氮仪开机预热后，要多空蒸几次，等

13、读数稳定后再进行样品测定。4.4 全磷4.4.1 方法提要农业级聚谷氨酸经硫酸-过氧化氢消煮使各种形态的磷转变成正磷酸。待测液中的正磷酸与偏钒酸和钼酸能生成黄色的三元杂多酸，其吸光度与磷浓度成正比，可在波长400490nm处用吸光光度法测定。磷浓度较高时选用较长的波长，较低时选用较短波长。4.4.2 试剂 所有试剂除注明者外，均为分析纯。分析用水应符合GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法三级水的规格。4.4.2.1 硫酸（GB/T 625）。4.4.2.2 30%过氧化氢（GB 6684）。4.4.2.3 硝酸（GB/T 626）。4.4.2.4 钒钼酸铵溶液4.4.2.5 A液：称

14、取25.0g钼酸铵（GB 657）溶于400mL水中；B液：称取1.25g偏矾酸铵（HG 3-941）溶于300mL沸水中，冷却后加250mL硝酸（4.3），冷却。在搅拌下将A液缓缓注入B液中，用水稀释至1L，混匀，贮于棕色瓶中。4.4.2.6 氢氧化钠（GB/T 629）：10%（m/V）溶液。4.4.2.7 二硝基酚指示剂：0.2%（m/V）溶液，称取0.2g 2,6-二硝基酚或2,4-二硝基酚溶于100mL水中。4.4.2.8 磷标准溶液: 50mg/L，0.2195g(干燥的KH2PO4(分析纯)溶于水，加入5mL浓HNO3，转移到1000mL的容量瓶中，然后用水定容。4.4.2.9

15、硫酸：5%（V/V）溶液。4.4.3 仪器、设备4.4.3.1 消煮管：50mL或100mL。4.4.3.2 消煮炉或可调电炉：1000W。4.4.3.3 弯颈小漏斗：2cm。4.4.3.4 分光光度计。4.4.3.5 分析天平：感量为0.1mg。4.4.3.6 移液管：5，10mL。4.4.3.7 容量瓶：50，100，1000mL。4.4.4 分析步骤4.4.4.1 试样溶液制备称取试样0.5g，精确至0.001g，置于50mL消煮管中（勿将样品粘附在瓶颈上）。先滴入少些水湿润样品，然后加8mL硫酸，轻轻摇匀并放置过夜。在管口放一弯颈小漏斗，在消煮炉上先250消煮（温度稳定后计时，时间约3

16、0min），待H2SO4分解冒出大量白烟后再升高温度至400，当溶液呈均匀的棕黑色时取下。（时间约3h），稍冷后加10滴H2O2（注4.4.6.1），摇匀，再加热至微沸（注4.4.6.2），消煮约5min，取下稍冷后，重复加H2O2 5-10滴，再消煮。如此重复3-5次，每次添加的H2O2的量应逐次减少，消煮到溶液呈无色或清亮后（应该为水的颜色），再加热约5-10min，以除尽剩余的H2O2。将消煮管取下，冷却。并用少量水冲洗弯颈漏斗，洗液流入消煮管。将消煮液无损的洗入100mL容量瓶中，用水定容，摇匀。过滤或放置澄清后供磷的测定。4.4.4.2 空白溶液制备 除不加试样外，应用的试剂和操作步

17、骤同4.4.4.1。4.4.4.3 标准曲线绘制吸取磷标准溶液0，1.00，2.50，5.00，7.00，10.00，12.50，15.00mL分别置于8个50mL容量瓶中，加入与吸取试样溶液等体积的空白溶液，加水至30mL左右，加2滴二硝基酚指示剂，用氢氧化钠溶液和稀硫酸调节溶液呈微黄色，加10mL钒钼酸铵溶液摇匀，用水定容。此溶液磷含量为0，1.00，2.50， 5.00，7.50，10.00，12.50，15.00 mg/L的标准溶液系列。在室温15以上条件下放置20min后（最长不超过4h），在分光光度计波长440nm处用1cm光径比色皿，以空白溶液调节仪器零点，进行比色，读取吸光度。

18、根据磷浓度和吸光度绘制标准曲线或求出直线回归方程。4.4.4.4 准确吸取定容，过滤或澄清后的消煮液10.00mL放入50mL容量瓶中，加水至30mL左右，与标准系列同条件显色、比色，读取吸光度。4.4.5 结果计算4.4.5.1 计算公式全磷（P）含量以g/kg表示，按下式计算：全磷（P）= c×V×D×10-3/m式中： C 从校准曲线或回归方程求得的显色液中磷的质量浓度，mg/L；V显色液体积，50mL；D分取倍数，定容体积/分取体积，100/10；m称取试样质量，g；10-3将单位mL换算为L的换算因数。所得结果应保留小数点后三位，两个平行测定结果允许绝对

19、差应0.04%。4.4.6 注意事项4.4.6.1 加H2O2时，要直接滴入瓶底溶液中，如果滴在瓶颈壁上，H2O2很快分解，失去氧化能力；也不要滴在小漏斗上，以免遗留的H2O2影响磷的比色测定。4.4.6.2 H2O2不宜加入过早，每次用量不可过多，加入后的消煮温度不要过高，只要保持消煮液微沸即可。 4.4.6.3 一般室温下，温度对显色影响不大，但室温太低(如<15)时，需显色30min。4.5 全钾4.5.1 方法提要农业级聚谷氨酸经硝酸、高氯酸消煮后，消化液中的钾用火焰分光光度计测定。火焰分光光度法是利用火焰做激发源，使钾原子激发。根据激发出能量的大小测定钾素的含量。4.5.2 试

20、剂 所有试剂除注明者外，均为分析纯。分析用水应符合GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法三级水的规格。4.5.2.1 硫酸（GB/T 625）。4.5.2.2 30%过氧化氢（GB 6684）。4.5.2.3 钾标准溶液：称取1.907g经110条件下干燥2h的氯化钾（GB 646），溶于水，于1L容量瓶中定容，即为1000mg/L钾标准溶液，将其存于塑料瓶中。4.5.3 仪器与设备4.5.3.1 消煮管：50mL或100mL。4.5.3.2 消煮炉或可调电炉：1000W。4.5.3.3 弯颈小漏斗：2cm。4.5.3.4 火焰光度计。4.5.3.5 分析天平：感量为0.1mg。4.5

21、.3.6 移液管：5，10mL。4.5.3.7 容量瓶：50，100，1000mL。4.5.4 分析步骤4.5.4.1 试样溶液制备称取试样0.5g，精确至0.001g，置于50mL消煮管中（勿将样品粘附在瓶颈上）。先滴入少些水湿润样品，然后加8mL硫酸，轻轻摇匀并放置过夜。在管口放一弯颈小漏斗，在消煮炉上先250消煮（温度稳定后计时，时间约30min），待H2SO4分解冒出大量白烟后再升高温度至400，当溶液呈均匀的棕黑色时取下。（时间约3h），稍冷后加10滴H2O2（4.5.6.1），摇匀，再加热至微沸（4.5.6.2），消煮约5min，取下稍冷后，重复加H2O2 5-10滴，再消煮。如此

22、重复3-5次，每次添加的H2O2的量应逐次减少，消煮到溶液呈无色或清亮后（应该为水的颜色），再加热约5-10min，以除尽剩余的H2O2。将消煮管取下，冷却。并用少量水冲洗弯颈漏斗，洗液流入消煮管。将消煮液无损的洗入100mL容量瓶中，用水定容，摇匀。过滤或放置澄清后供钾的测定。4.5.4.2 空白溶液制备除不加试样外，应用的试剂和操作步骤同4.5.4.1。4.5.4.3 标准曲线绘制准确吸取钾标准溶液（3.3）0，1.00，2.50，10.00，20.00 mL，分别放入50mL容量瓶中，加入与吸取试样溶液等体积的空白溶液，(使标准溶液中的离子成分和待测液相近)，加水定容。即得0，2，5，1

23、0，20，40 mg/L K标准系列溶液。在火焰光度计上，以浓度最高的标准溶液定火焰光度计检流计的满度(一般只定到90)，以空白溶液调节仪器零点，然后从稀到浓依次进行测定，记录检流计读数，以检流计读数为纵坐标，钾浓度为横坐标绘制校准曲线或求直线回归方程。4.5.4.4 测定吸取定容后的消煮液10.00mL放入50mL容量瓶中，用水定容，直接在火焰光度计上测定，读取检流计读数，每5个样品必须用钾标准溶液校正仪器。4.5.5 结果计算4.5.5.1 计算公式全钾（K）含量以g/kg表示，按下式计算：全钾(K)= C×V×D×10-3/m式中：C从校准曲线或回归方程求得

24、的测读液中K的浓度，mg/L；V消煮液定容体积，mL；D分取倍数，定容体积/分取体积，100/10；m称样质量，g；10-3将mL单位换算为L的换算因数。所得结果应保留小数点后三位，两个平行测定结果允许绝对差应0.12%。4.5.6 注意事项4.5.6.1 加H2O2时，要直接滴入瓶底溶液中，如果滴在瓶颈壁上，H2O2很快分解，失去氧化能力；也不要滴在小漏斗上，以免遗留的H2O2影响钾的比色测定。4.5.6.2 H2O2不宜加入过早，每次用量不可过多，加入后的消煮温度不要过高，只要保持消煮液微沸即可。 4.6 不溶物含量按NY/T 1115-2006规定的方法测定。4.7 pH4.7.1 方法原理试样经水浸泡平衡，直接用pH酸度计测定。4.7.2 仪器实验室常用仪器及pH酸度计。4.7.3 试剂和溶液4.7.3.1 pH 4.01标准缓冲液：称取经110烘1h的邻苯二钾酸氢钾（KHC8H4O4）10.21g，用水溶解，稀释定容至1L。4.7.3.2 pH 6.87标准缓冲液：称取经120烘2h的磷酸二氢钾（KH2PO4）3.398g和经120 130烘2h的无水磷酸氢二钠（Na2HPO4）3.53g，用水溶解，稀释定容至1L。4.7.3.3 pH 9.18标准缓冲液：称取硼砂（Na2B4O710H2O）（在盛有蔗糖和食盐饱和溶液的干燥器中平衡一周）3.8g，用水溶解